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任课教师：赵莉1、基因工程包括哪些步骤？3、基因工程中的核心环节是哪一步？4、基因表达载体导入到受体细胞有哪些方法？5、目的基因导入受体细胞就会成功表达吗？如何检测和鉴定？2、什么是目的基因？获取的方法有哪些方法？思考讨论问题：银烛秋光冷画屏，轻罗小扇扑流萤；天阶夜色凉如水，坐看牛郎织女星。基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定主要是指编码蛋白质的基因(一）目的基因目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。一、目的基因的获取（二）获取目的基因的方法1、从基因文库中直接获取2、PCR技术扩增3、人工合成——核心二、基因表达载体的构建科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。资料:然后在插入抗虫基因的质粒中插入抗虫基因启动子，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。编码区非编码区非编码区启动子启动子：位于基因首端一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。没有启动子，基因就不能转录。RNA聚合酶:能够识别启动子上的结合位点并与其结合的一种蛋白质.终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，它能阻碍RNA聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，使转录终止。终止子编码区非编码区非编码区启动子终止子AGGTCACGTCGTCCAGTGCAGCRNA聚合酶AGGUCACGUCG基因表达载体的组成：b、目的基因a、启动子c、终止子d、标记基因e、复制原点1、下列属于获取目的基因的方法的是①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥小试牛刀2、有关基因工程的叙述中，错误的是A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来B、限制性内切酶用于目的基因的获得C、目的基因须由运载体导入受体细胞D、人工合成目的基因不用限制性内切酶小试牛刀3、1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功。请据右下图回答问题。(1)此图表示的是采取__________合成基因的方法获取__________基因的过程。(2)图中①DNA是以为__________________模板，形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的目的基因。人工目的控制胰岛素合成的信使RNA小试牛刀(3)图中③代表，它往往含基因，以便对目的基因的检测。重组DNA分子标记1、从基因文库中直接获取（1）基因文库的概念部分基因文库：基因组DNA文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库含有一种生物的全部基因只包含了一种生物的部分基因，如:cDNA文库（2）基因文库的建立方法提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与运载体连接导入受体菌中储存基因组文库方法一：直接分离法(鸟枪法)某种生物的单链mRNA单链互补DNA双链cDNA片段导入受体菌中储存与运载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶方法二：反转录法--cDNA的合成流程图解PCR技术—聚合酶链式反应PCR扩增仪DNA双链复制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA2、利用PCR技术扩增目的基因原理：前提：原料：条件：利用PCR技术扩增目的基因5’3’G—GT—C3’5’A—GC—C5’3’引物ⅡG—G高温变性低温退火中温延伸1.目的基因DNA受热变性，解链；5’3’A—G引物Ⅰ2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成3、人工合成