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实验室生物安全标准操作规程ZHCADC-PGC-2010（第一版）受控状态：Y□N□受控编号：持有人：2010年1月11日发布2010年1月20日实施庄河市动物疫病预防控制中心修订表版号规程号修订次序修订内容批准日期实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC-2010修订表第1页共1页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施目录ZHCADC-PGC01-2010BSL-2实验室个人防护装备的总体要求ZHCADC-PGC02-2010实验室人员进出实验室ZHCADC-PGC03-2010实验室检测样品采集ZHCADC-PGC04-2010实验室检测样品包装和运送ZHCADC-PGC05-2010实验室检测样品接收ZHCADC-PGC06-2010样品检测操作规程ZHCADC-PGC07-2010电气设备操作规程ZHCADC-PGC08-2010实验室消毒剂配制标准操作规程ZHCADC-PGC09-2010无菌间使用标准操作规程ZHCADC-PGC10-2010实验室废弃物处理标准操作规程ZHCADC-PGC11-2010实验室消毒标准操作程序ZHCADC-PGC12-2010实验室意外事故处理实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC-2010目录第1页共1页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施1目的个人防护装备是减少操作人员暴露于气溶胶、喷溅物以及意外接种等危险的一个屏障。为了实验人员的安全，以保证实验室人员的安全及实验室环境不被污染。2适用范围适用于生物安全实验室选用个人防护装备（防护口罩、防护手套、防护服与防护鞋）的质量控制。3职责实验室组织有关人员采购符合要求的个人防护装备，并且严格控制其质量。4过程要求实验室所用的个人防护装备应符合国家标准GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》。在生物因子危害评估的基础上，按不同级别的防护要求选择适当的个人防护装备。4.1防护口罩根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》、GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》、《医用防护口罩技术要求》，生物安全实验室选用P2级的防护口罩，必须满足GB19083-2003以下条件：（1）长方形口罩展开后中心部分尺寸：长度不小于17cm、宽度不小于17cm；密合型拱形口罩尺寸：横径不小于14cm，纵径不小于14cm。（2）口罩表面不得有破洞、污渍；口罩带应调节方便，应有足够强度固定口罩位置。每根口罩带与口罩体连接点的断裂强力应不小于10N。（3）口罩滤料的颗粒过滤效率应不小于95％；经环氧乙烷灭菌的口罩，其环氧乙烷残留量应不超过10μg/g；不能从防护口罩中检出致病菌；口罩对皮肤无刺激。4.2防护手套实验室防护手套选择用国内生产的一次性乳胶手套和耐酸碱手套。技术要求见国标GB7543-1996实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC01-2010实验室个人防护装备的总体要求第1页共2页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施4.3防护鞋及鞋套防护鞋应该选择耐磨、防滑和舒适的合成材料制成的鞋类。鞋套应为塑料材质制成，可防水、要求一次性使用。4.4防护服BSL-2实验室试验操作人员的防护服装主要选择一次性的连体防护服，通常选用国内厂商合格的防护服。上下连体式，宜连鞋帽，无口袋、无横褶、腰带、接缝封缝、光洁。发尘量小、不易发生纤维剥落、断丝；不易产生静电和粘附粒子；耐有机溶剂，透明度低、柔软、舒适、不妨碍动作。实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC01-2010BSL-2实验室个人防护装备的总体要求第2页共2页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施1目的制定BSL-2实验室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。2适用范围适用于BSL-2实验室人员进出程序。3职责实验室工作人员执行本程序的规定。各科室负责人负责监督执行。4规程要求4.1进入程序4.1.1实验室人员需将外衣挂入休闲吧内，避免将外衣与工作服混放。4.1.2实验室人员进入实验室前在人员位置示意图上做好标记，将自己的名字磁扣贴在欲达到的位置。4.1.3实验室工作人员进入BSL-2更衣室，脱掉自已所穿鞋，放入外侧鞋柜内，转向内侧，从内侧鞋柜取出工作鞋换上。4.1.4实验室工作人员进入更衣室，穿上医用白大褂或连体工作服。4.1.5按要求戴手套，口罩等防护用品。4.2退出程序4.2.1试验结束后，实验室工作人员在实验室脱掉一次性口罩和一次性乳胶手套和一次性防护服，装入高压灭菌袋中。4.2.2实验室工作人员先用0.5%新洁尔灭对手进行消毒，再用消毒肥皂洗手。实验室工作人员在更衣室脱下医用白大褂，打开更衣室的紫外灯进行紫外消毒。4.2.3实验室工作人员在更衣室脱掉工作鞋，放入内侧鞋柜，转向外侧，从外侧鞋柜中取出自己所穿鞋。4.2.4实验室工作人员退出实验室后，将BSL-2实验室入口门关好，将人员示意图上标记复位，离开实验室。实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC02-2010BSL-2实验室人员进出实验室第1页共1页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施1目的为保障检测实验的顺利进行，规范采样程序，防止病原微生物在采样过程中产生污染。2适用范围适用于实验室样品的采集。3职责3.1采集检测样品的工作人员在采集过程中应当防止病原扩散，并对样本的来源、采集过程和处理方法等作详细记录。3.2检验人员必须严格按照本操作规程操作，不可擅自做出超出本规程的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。4过程要求4.1工作要求采集和处理检测样品应当具备下列条件：4.1.1具有采集、处理样品所需要的生物安全防护设备；4.1.2具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员；4.1.3具有有效的防止病原扩散的措施；4.1.4具有保证检测样品质量的技术方法和手段。4.2实验材料准备灭菌的解剖器械（剪刀、镊子、手术刀、大刀、斧头等）、灭菌试管、平皿或自封袋、载玻片、棉签、营养肉汤、30%、50%甘油盐水缓冲液、加抗生素的PBS（病毒保存夜）、50％甘油磷酸盐缓冲液、酒精灯、灭菌注射器、15mL的离心管、1.5mLEP管、记号笔、签字笔、防护服、无粉乳胶手套、防护口罩、铅笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒棉球、冰袋、冷藏容器、消毒药品、采样单等。4.3活畜样品的采集4.3.1血清样品的采集实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC03-2010实验室检测样品采集第1页共4页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施4.3.1.1采血方法对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒，75%的酒精消毒，待干燥后采血。采血方法推行生猪站立式前腔静脉、牛羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌。4.3.1.2采血数量单一病种抗体监测的每头（只）采集2～3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5～10mL全血。4.3.1.3全血保存采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直接放在盛有冰块的保温箱，送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。4.3.1.4血清分离凝固全血在室温2～4h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入4℃冰箱4～8h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm、30min离心，吸出血清。分离的血清，一般不加防腐剂。血清若在1～2周内即可检验，可放在4℃冰箱内保存；如果保存时间较长，应放在-20℃～-80℃冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送。4.3.2全血样品的采集全血采集后应直接注入盛有抗凝剂的试管中，立即摇动，充分混合。也可将全血液注入盛有玻璃珠的灭菌瓶中，立即连续振荡脱纤维蛋白。4.4活禽样品的采集咽喉拭子的采集：将棉签插入喉头口及上颚裂处来回刮3～5次取咽喉分泌液，泄殖腔拭子的采集：将棉签插入取泄殖腔转2～3圈并沾取少量粪便，再将咽喉拭子、泄殖腔拭子一并放入盛有0.8～1.0mL加有抗生素PBS的EP管中，加盖，编号。4.5病死（屠宰）畜禽样品的采集4.5.1解剖前检查实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC03-2010实验室检测样品采集第2页共4页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施急性死亡的牛、羊、猪、马等动物，解剖之前应作临床检查，疑似炭疽病的应采血、镜检，排除炭疽病时，方可解剖。动物死亡后应在6h内进行剖检。解剖人员要做好自我防护工作。4.5.2肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏样品的采集在肝、脾、肾、淋巴结、肺和牛、马心脏有病变的部位各采取2～3cm3的小方块，分别置于灭菌的试管或平皿中。其他畜禽采集整个心脏，置于自封袋中。细菌分离样品的采集可用烧红的刀片烫烙脏器表面，在烧烙部位刺一孔，用灭菌后的铂金耳伸入孔内，取少量组织或液体，作涂片镜检或划线接种于适宜的培养基上。4.5.3脑、脊髓样品的采集取脑、脊髓2～3cm3浸入50%甘油盐水中或将整个头部（猪、牛、马除外）割下，用消毒纱布包裹，置于不漏水的容器中。4.5.4肠、肠内容物及粪便样品的采集肠样品的采集：选择病变最严重的部分，将其中的内容物弃去，用灭菌的生理盐水轻轻冲洗后，置于试管中。肠内容物样品的采集：烧烙肠壁表面，用吸管扎穿肠壁，从肠腔内吸取肠内容物，放入盛有30%甘油盐水中或者直接将带有粪便的肠管两端结扎，从两端剪断。粪便样品的采集：用棉签插到直肠黏膜表面采集粪便，然后将拭子放入盛有30%甘油盐水中。4.5.5液体病料样品的采集采集胆汁、脓、粘液、关节液、水泡液等样品时，用药物或烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管（毛细吸管、注射器）经消毒部位插入，吸取内部液体，然后将病料注入灭菌试管中，加盖。也可用接种环经消毒部位插入，提取病料直接接种在培养基上。4.5.6胎儿样品的采集取流产后的整个胎儿，装入自封袋或不透水塑料薄膜中。4.5.7皮肤样品的采集用清水清洗病变皮肤后，取病变皮肤3～5g放入灭菌小瓶中，加适量50％甘油磷实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC03-2010实验室检测样品采集第3页共4页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施实验室生物安全标准操作规程（SOP）ZHCADC-PGC03-2010实验室检测样品采集第4页共4页第1版第0次修订2010年1月11日发布/1月20日实施酸盐缓冲液(pH7.4)，加盖密封。4.5.8死（屠宰）禽样品的采集死（屠宰）禽样品的采集除按上述方法采集，也可将整个死禽装入不透水塑料薄膜袋或自封袋中或其他容器内。4.6组织样品采集完后的无害化处理活畜禽、病死畜禽组织样品采集完后，应做好样品外包装和环境消毒以及病死畜禽及其产品的无害化处理。4.7样品编号、抽样单填写4.7.1样品编号每头动物的不同部位的组织样品应单独包装。包装好后，在样品袋或平皿外贴上标签，标签注明动物种类代号（Z表示猪，N表示牛，￥表示羊，J表示鸡，Y表示鸭，E表示鹅）、样品名称、样品编号、采样日期等，全市每种动物血清样品，每次单独包装，每种动物样品编号每月由1、2、3、4…阿拉伯数字连续编号。4.7.2抽样单填写同时填写动物血清和组织（拭子）抽样单、流行病学调查表、动物检测样品送检单和动物疫病预防控制中心接诊单。动物血清和组织（拭子）抽样单一式三份，一份由被抽样单位保存、一份由送检单位保存、一份由检测单位保存（原始记录）。动物检测样品送检单一式两份，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存。动物疫病预防控制中心接诊单一式两份，一份由送检单位保存，一份由检测单位保存（原始记录）。1目的维护检测样品的质量，防止病原的泄漏和扩散，保障样品检测的顺利开展。2适用范围适用于检测样品的包装和运送。3职责3.1操作者必须严格按照本程序操作，不可擅自做出超出本程序的操作，所有实验人员对所从事的工作负相应的责任。3.2实验室负有对样品包装、运输的监督和管理职责，并监督检查相关工作人员的安全工作程序和