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1《体内药物分析》课程作业一、问答题第X章题目要求1什么是体内药物分析？与常规药物分析相比，体内药物分析有哪些特点？答：体内药物分析旨在通过各种分析手段，了解药物在体内的数量与质量变化。获得药物代谢动力学的各种参数和信息，从药品生产、临床医疗、实验研究等方面对所研究药物作出估计和评价。与常规药物分析相比，体内药物分析具有干扰杂质多、样品量少且浓度变化大，不能再度获得完全相同的样品、有时要求较快提供结果、要有一定的仪器设备、工作量大等特点。必做影响血药浓度的因素有哪些？答：包括机体因素：生理（年龄、性别、妊娠）、病理、遗传；药物因素：剂型因素、手性药物对映体相互作用；环境因素：化学物质、合并用药；人体昼夜节律、营养和精神状态。必做为什么要进行体内药物分析？体内药物分析的主要任务是什么？答：为开展临床药学和临床药理学研究服务，以指导临床安全、合理、有效用药和正确评价新药。体内药分的主要任务：分析方法学的研究、治疗药物监测、药代动力学研究、人群代谢分型研究、体内内源性物质的测定及其它方面（药物滥用、吸毒、兴奋剂检测、法医毒物分析等）的应用。必做2药物进入体内后一般需经历哪些物理、化学变化？这些变化与药理作用的关系如何？答：物理变化——系指药物与生物大分子如血浆蛋白的结合反应。化学变化——系指药物的代谢反应，包括一相代谢（氧化、还原、水解反应）和二相代谢反应（各种结合反应）由于药物的作用强度与血液中游离药物的浓度密切相关，同时药物经代谢后活性发生了变化，故药物的物理、化学变化与药理作用密切有关。必做药物在体内的代谢反应有哪些类型？必做3常用生物样本有哪些？如何采集、储存。答：常用生物样本有：血样（血浆、血清和全血）、尿样、唾液。采集与储存：血浆——全血加抗凝剂，离心，取上清液；血清——全血离心，取上清液。采血后必须尽快离心分离出血浆或血清，置－20℃以下冷冻保存。尿样——收集服药后一定时间内尿样，记录体积，混合均匀后取一定量,测定尿中药物浓度，计算一定时间内尿中药物的累积量。唾液——漱口15分钟后收集口内自然流出或经舌在口内搅动后流出的混合唾液，离心后取上清液。样本采集后不能及时测定，可置4℃冷藏，若放置时间较长，则需-20℃～-80℃冷冻保存。必做2生物样品测定前为什么要除去蛋白质？除去蛋白质的常用方法有哪些？答：除蛋白质的意义：使结合型药物释放出来，以测定总浓度。得到较“干净”的提取液，减少乳化。消除对测定的干扰。常用去蛋白质方法：蛋白质沉淀法——生成不溶性盐或盐析和脱水作用。包括：加酸类、重金属盐、中性盐和能与水混溶的有机溶剂等，如：三氯乙酸、高氯酸、Cu2+、硫酸铵、甲醇、乙腈等。组织酶消化法——蛋白水解酶，如胰蛋白酶、胃蛋白酶等。必做影响液-液提取和液-固提取效率的因素分别有哪些？必做影响液-液提取的因素有:水相pH提取溶剂离子强度影响液-固提取的主要因素有:固定相洗脱液流速样品装载量4评价分析方法的效能指标包括哪些项目？如何求算？必做试述体内药物分析方法设定的一般步骤。答：首先进行文献查阅，设计方案，然后通过实验加以验证。一般实验步骤如下：以纯品进行测定——选择最佳测定条件（线性，灵敏度、pH、检测波长等）。空白样品测定——按设定的方法进行前处理和测定，考察空白值的大小和干扰程度。以水代替空白样品，添加标准品后测定，以获得提取回收率的大致情况，从而对前处理中各步操作条件进行选择。空白样品中添加标准后测定——求样品回收率，建立标准曲线等。体内实样测定——根据实样测定结果来判断设定的方法是否合理、可行。以上步骤需要反复试验以获得最佳实验条件。必做阐述定量限与检测限的定义、区别及表示方法。答：定量限——即定量下限（LLOQ），表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以S/N=5～10确定。检测限（LOD）——表示药物的最低可测度，不必定量，通常以信噪比（S/N）=2~3时被测药物的绝对量表示；两者的区别主要在于是否有定量要求：LOD没有定量要求，而LLOQ则有定量要求。必做体内药物分析方法有哪些？各有何优缺点？答：体内药物分析方法可分为三大类：光谱法——包括比色法、紫外法和荧光法。方法优点是操作简便、快速，所需设备简单。其缺点是不具备分离功能，选择性较差，对前处理要求高；比色法和紫外法灵敏度较低。免疫法——包括放射免疫、酶免疫、荧光免疫等。方法优点是灵敏、专属，操作简便、快速，对样品预处理要求不高。其缺点是精密度较差，需要试剂盒和专属仪器。色谱分析法——包括HPLC,GC,LC/MS,GC/MS等。方法优点是具有分离分析功能，是评价其它方法的参比方法。必做5紫外法消除干扰的方法有哪些？说明原理和应用条件。P82必做31.差示分光光度法（1）利用最大吸收波长进行测定（2）利用最小吸收波长处的增色效应进行测定（3）利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行测定2.双波长测定法如何进行激发光谱和荧光光谱的测定？P91页必做荧光物质吸收紫外光后被激发出荧光，如果将激发荧光的光源用单色器使其分光后，测定在每一波长的激发光照射下，物质所发射的荧光，以荧光强度对激光光波长作图，得到荧光物质的激光光谱，实际上，激发光谱就是荧光物质的吸收光谱。激发光谱中最高峰的波长，能使荧光物质发出最强烈的荧光。如果使激发光的波长和强度保持不变，而让物质所发生的荧光通过单色器色散，依次将不同波长的荧光照射于接收器上，并依次测其荧光强度，然后以荧光强度对相应的荧光波长作图，得到该物质的荧光发射光谱，简称荧光光谱。6免疫分析的基本原理、基本条件是什么？答：基本原理：即抗原-抗体结合反应。在反应体系中，当抗体（Ab）量一定时，抗原（Ag）与标记抗原（Ag*）就与抗体发生竞争性结合反应，生成的[Ag*-Ab]与[Ag]的量呈负相关，这种特异的竞争性抑制的数量关系是免疫分析的定量基础。基本条件是：特异性抗体、标记抗原、未标记抗原（即标准品）。必做常用免疫分析有哪几种？相互间区别在哪些方面？答：常用免疫分析有放射免疫法、酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法等，它们的主要区别在于标记物不同，由此采用的测定方法也不同。必做在RIA中，结合物与游离标记物的分离方法有哪些？必做7气相色谱仪最常用检测器是什么？有何特点？适用范围？必做GC法定量方法与内标选择原则？答：对内标物的要求：内标物必须是样品中不含有的组分，其保留时间应与待测物tR值相近，但R≥1.5，并具有足够的纯度。内标物选择原则：内标与被测物相差一个化学元素；或内标与被测物为同系物；或内标与被测物结构相似，或内标与被测物理化性质相似。必做什么是正相色谱？什么是反相色谱？必做说明RP-HPLC法的常用固定相、流动相、适用范围，及流动相中甲醇等有机溶剂浓度变化对被测组分保留时间的影响。答：常用固定相——ODS（C18）柱；流动相——甲醇-水、乙腈-水、四氢呋喃-水；适用范围——非极性至中等极性的各类分子型化合物；流动相中甲醇等有机溶剂浓度增大，被测组分保留时间缩短。必做4HPLC仪常用检测器有哪些？指出各种检测器的适用范围和适用注意点。答：常用检测器有：紫外、二极管阵列、荧光、蒸发光散射、电化学、质谱等。紫外检测器——通用型检测器，适合具有紫外吸收的各种物质的检测。二极管阵列检测器——具有光谱、色谱和三维图谱，可以进行定性和定量分析，以及色谱峰纯度检查。荧光检测器——专属检测器，适合具有荧光或潜在荧光物质的检测，灵敏度高。蒸发光散射检测器——适合于无紫外吸收物质的检测，要求流动相必须是挥发性的，不能含有非挥发性的缓冲盐。电化学检测器——适合于具有氧化还原性质的物质，要求流动相必须有一定的电导率，一般为盐类、有机溶剂和水的混合物。质谱检测器——具有定性定量功能和高的灵敏度。必做8什么是手性药物？为什么要研究手性药物？必做常用手性色谱方法有哪些？答：分子结构中含有不对称碳原子（即手性中心）的药物称为手性药物。因手性药物两对映体在体内的生物活性有差异，包括药效学差异（竞争拮抗等）和药动学差异（吸收、分布、代谢、排泄）。为正确评价两对映体的作用和进行对映体药物的质量控制，所以要研究手性药物。常用手性HPLC法有：手性衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做9毛细管电泳有哪几种分离模式？毛细管电泳分离模式有毛细管区带电泳，胶束电动色谱，毛细管凝胶色谱，毛细管等电聚焦，毛细管等速电泳，移动界面毛细管电色谱。必做10常用联用技术有哪些？常用联用技术有LC-MS，GC-MS，GC-GC，HPLC-HPLC，GC-HPLC，免疫分析-HPLC等必做二、名词解释第X章题目要求1TDM答：治疗药物监测，为英文“therapeuticdrugmonitoring”的缩写。必做2一相代谢答：指药物在体内发生的氧化反应、还原反应、水解反应。必做二相代谢答：指药物在体内的结合反应，包括：葡萄糖醛酸结合、硫酸酯化、甲基化、乙酰基化、氨基酸缀合、谷胱甘肽缀合等。必做生物转化答：主要指体内代谢反应。必做5CYP1A2答：细胞色素P4501族A亚族第2个酶基因。必做3血清答：全血经离心后的上清液。必做血浆答：全血加抗凝剂（肝素等），经离心后的上清液。必做4RSD答：相对标准偏差，即精密度的一种表示方法。必做检测限答：表示药物的最低可测度，不必定量，通常以S/N=2~3倍时被测药物的绝对量表示。必做定量限答：表示药物可定量测定的最低量，须符合一定精密度和准确度要求，常以标准曲线最低浓度点来确定，或以S/N=5～10确定。必做提取回收率答：指药物加入到生物样本中经前处理后测得的量与理论加入量的比值。必做5荧光光谱答：以发射波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图。必做激发光谱答：以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标所作的图必做6酶免疫分析答：酶免疫分析是在放射免疫分析基础上发展起来的一种免疫分析方法，以酶代替同位素来标记药物，酶与底物、辅酶等反应后引起吸收光谱变化而被检测。必做7反相HPLC答：即流动相极性大于固定相极性的HPLC。必做ODS答：即十八烷基硅烷键合硅胶，为常用反相HPLC的固定相。必做三、填充题第X章题目要求1体内药物分析的特点干扰杂质多，样品量少浓度低，不能再度获得完全相同的样品，B要有一定的仪器设备、工作量大等。必做影响血药浓度的因素有机体因素（生理因素、遗传因素、病理因素）、药物因素（剂型、手性药物相互作用）、环境因素（药酶诱导剂、抑制剂、大气污染、饮食）等。必做2药物在体内发生的物理变化和化学变化分别是指和。必做3常用生物样品有血样（血浆、血清、全血），尿样，唾液等必做常用去蛋白的方法有蛋白质沉淀法（加蛋白质沉淀剂，如：三氯乙酸，高氯酸，必做6Zn2+，Cu2+，硫酸铵，氯化钠，甲醇，乙腈，丙酮等）和组织酶消化法（加蛋白水解酶如：胃蛋白酶，胰蛋白酶，枯草菌溶素等）生物样品中药物与代谢物的提取方法有液-液提取和液-固提取等必做影响液-液提取的因素有水相pH值、提取溶剂和离子强度等。必做4分析方法认证的主要指标线性范围、准确度、精密度、专属性、灵敏度、稳定性等必做体内药物分析方法包括光谱法（比色、紫外、荧光），色谱法（HPLC、GC、GC-MS、LC-MS），免疫分析法（放射免疫、酶免疫、荧光免疫）等。必做5紫外光谱法消除干扰的方法有差示光谱法、导数光谱法、双波长法等必做6在放射免疫分析中，结合物与游离标记物的分离方法有沉淀法、吸附法、固相法、差速迁移法、双抗体法必做7气相色谱法中常用的检测器有氢焰离子化检测器、氮磷检测器、电子捕获检测器、MS等必做液相色谱中常用检测器有紫外检测器（可变波长、二极管阵列）、荧光检测器、电化学检测器、蒸发光散射检测器、MS等。必做反相HPLC法常用流动相有甲醇-水，乙腈-水，四氢呋喃-水必做8手性HPLC法常用测定方法有手性试剂衍生化法、手性流动相添加剂法、手性固定相法。必做9在毛细管电泳中，驱动荷电物质前进的两个重要作用力是电泳流和电渗流。必做四、单选题第X章题目要求1尿中异烟肼及乙酰异烟肼的比色测定是利用（B）专属反应（KCN－氯胺