高效液相色谱法在食品分析中的应用

高效液相色谱法在食品分析中的应用摘要：综述高效液相色谱法在食品分析中的应用，通过参考近20篇相关文献，主要介绍了高效液相色谱法在食品中黄曲霉毒素、食品中农兽、药残留量、食品中各种添加剂及食品贮藏过程产生毒素每方面的分析测定中的应用。基本上反应了高效液相色谱法在食品分析领域的最新应用，并阐明了独到的见解，具有一定的参考价值。关键词:高效液相色谱法黄曲霉毒素残留农兽药添加剂毒素0引言高效液相色谱法是六十年代末、七十年代初发展起来的快速分离分析的方法。它的基础是液相柱层析［1］。由于新型固定相、性能良好的高压输液泵以及具有选择性的高灵敏的检测器的使用,尤其是近年来利用电子计算机进行自动化控制及数据处理,使液相色谱法得到了很大的发展。高效液相色谱法被广泛应用于许多领域,同样亦被应用于食品分析领域。它不仅可以对食品中各类营养成分及含量进行分离和测定,而且还可以对食品中残留的一些有害的微量物质及在食品腐败过程中产生的各种毒素进行分析［2］,从而向人们展示出高效液相色谱法在食品分析中的重要地位。1食品中黄曲霉毒素的测定黄曲霉毒素(AFT)是一种毒性极强的真菌毒素，目前已分离鉴定的有近20种，是一类化学结构相似的物质，其中以B1、B2、G1、G2和M1、M2为主。在天然污染的食品中以B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。林裕［3］建立HPLC测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2含量的方法，采用ALLSPHEREODS（250×416mm）色谱柱，流动相为乙腈/水（梯度洗脱），荧光检测器：激发波长360nm，发射波长440nm。结果最低检出的B1、B2、G1、G2分别为浓度0.20μg/kg，0.05μg/kg，0.20μg/kg，0.05μg/kg。样品进行净化、衍生处理后，用荧光检测器检测，检出的浓度比国标法［4］提高10倍。2食品中农、兽药残留量的测定为了防止粮食作物和蔬菜水果等的病虫害,往往在它们的生长期内施加一定的农药。这些农药在收获的果实上的残留量就成为人们关注的问题。尤其是有些有机农药对人体健康的危害不能不引起人们的重视。高效液相色诸法提供了分析残留农、兽药量的一种较好的方法。2.1蔬菜水果中农药残留量的测定目前蔬菜水果中不同种类农药的残留测定方法主要是气相色谱法(GC)或气相色谱－质谱法(GCMS)，但GC对沸点高或热稳定性差的农药需进行衍生化处理，这样就不可避免地增加了样品前处理的难度，也使它的应用受到一定程度的限制。李永新［5］等建立了同时测定蔬菜水果12种农药残留的反相高效液相色谱分析方法。将样品捣碎，用乙酸乙酯超声提取，经Florisil固相萃取柱净化、正己烷二氯甲烷(1∶1)洗脱、氮气吹干、甲醇溶解并定容后，采用高效液相色谱柱分离、紫外检测，以外标法定量。结果表明：5种有机磷农药、6种拟除虫菊酯类农药和除草剂二甲戊乐灵的检测限为0.114～2.65ng。应用该法对从市场上随机购买的莲白、小白菜、黄瓜等20个蔬菜样品和苹果、梨等20个水果样品进行检测，其中氧化乐果的检出率分别为55%和45%，辛硫磷的检出率分别为50%和30%，由此可见，国家明文规定的不得用于蔬菜、瓜果的剧毒、高毒农药仍有检出。2.2肉类中残留兽药量的测定激素是由内分泌腺和散在其它器官的内分泌细胞所分泌的微量生物活性物质，动物和人体内正常时含量甚微，残留于动物性食品中的激素常为性激素，当性激素超过人体正常水平时，会破坏机体的正常生理平衡而呈现不良后果。因此对食品中激素残留的测定十分重要。王帆［6］等研究检测大豆异黄酮类保健食品中三种雌激素(雌二醇、雌酮、己烯雌酚)含量的分析法。采用HypersilODS2Cl8色谱柱，流动相为甲醇水(体积比53∶47)，流速1.0ml/min，检测波长280nm，该方法的线性范围在0.5～250mg/L，三种雌激素的最低检出限分别为0.8、0.9、0.4mg/L。3食品中各种添加剂含量的测定3.1食品防腐剂的分析测定苯甲酸和山梨酸是食品中最常使用的两种防腐剂。对于它们的分析过去常用分光光度法和气相色谱法进行,但要经过繁杂的预处理操作。近年来发展了高效液相色谱法只需经过简单的处理,就可直接进行测定。我国秦皇岛卫生检验所的赵惠兰等报导了用高效液相色谱法快速测定饮料中苯甲酸、山梨酸的方法［7］。他们将饮料过滤后直接注入液相色谱系统。10—20min可同时测定这两种防腐剂及糖精钠的含量。该法的色谱条件是：以uBandapakC18柱为分析柱，含有0.02M醋酸胺的甲醇水（35：65）溶液为流动相,洗脱速度1ml/min,在254um的紫外检测器进行检测。该法的回收率97%。标准差为0.29，变异系数为0.038。武汉市产品质量监督检验所的周胜银、李增也报导了用高效液相色谱法测定酱油及软饮料类样品中防腐剂的方法［8］。3.2测定食品中非食用色素酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O均为工业染料，用于染丝、麻、皮革等，这3种物质均可以使人致癌，根据GB2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》规定，这3种物质严禁作为品使用。但不法商贩利用其颜色鲜艳、着色稳定、价廉的特点非法添加于豆制品中，使腐竹、豆皮的色泽光亮，欺骗消费者，严重危害了广大消费者的身体健康[9]。：建立食品中的酸性橙Ⅱ、碱性橙2和碱性嫩黄O染料残留的高效液相色谱同时测定的方法，样品通过提取之后，采用基质固相分散法净化，然后分别用乙醇和乙醇-氨水-水（7∶2∶1）分步洗脱，最后进行HPLC分离、检测。此法的回收率平均为79％，酸性橙Ⅱ的检出限为0.01mg/kg、碱性橙2的检出限为0.02mg/kg，碱性嫩黄O染料的检出限为0.01mg/kg，相对标准偏差平均为3.53％[10]。4食品贮藏过程产生毒素的测定一些食品在加工过程中会产生化学变化，生成对人体有害的物质。2002年4月瑞典斯德哥尔摩大学MargaretaTornqvist教授，首次在油炸及焙烤的马铃薯和谷物类食品中发现了具有神经毒性的潜在致癌物——丙烯酰胺(Acrylamide)，该毒物很容易经消化道、皮肤、肌肉或其他途径吸收，并能通过胎盘屏障，是一种公认的神经毒素和准致癌物，已被WHO国际癌症研究中心(IRAC)列为可能致癌物质(ⅡA类)。2005年4月13日我国卫生部发布了“建议全国消费者避免食用油炸薯片和油炸薯条”的公告，呼吁采取措施减少食品中丙烯酰胺可能导致对健康的危害。柳其芳［11］等检测食品中致癌物丙烯酰胺的固相萃取，二极管阵列检测，反相高效液相色谱测定，用水提取食品中丙烯酰胺，采用C18固相萃取小柱对样品液进行纯化，流动相为甲醇水(体积比5∶95)，DAD扫描波长范围190～370nm，检测波长210nm。结果丙烯酰胺在0.1～10mg/L浓度范围内线性良好，方法检出限为10ng/g。用建立的方法分析了59份面包、谷类、豆类、坚果类和土豆类食品，结果显示，食品炸焦的程度越深，则丙烯酰胺含量越高。食品贮藏不当，会引起真菌生长，造成食品的腐败变质，同时有些霉菌产生的霉菌毒素，具有较强的毒性和耐热性。5其他5.1高效液相色谱法测定水产品中喹乙醇残留量水产饲料中添加喹乙醇对增加水生动物的抗病性和促进生长有一定的效果,但是长期添加和过量添加会给鱼类造成极大的危害。国家已明令禁止在水产饲料中使用喹已醇[12],但一些饲料厂家仍大量使用,添加量高达50~150mg/kg喹乙醇的蓄积毒性不但能使养殖鱼类发生中毒或死亡,而且喹已醇在鱼体内极易降解,降解代谢物能抑制脱氧核糖核酸的合成,对染色体畸变有影响,属致癌物,对人体健康有损害。因此在农业标NY5070-2002(无公害食品水产品中渔药残留限量)中规定喹乙醇不得检出[13]。现在建立了一套简捷有效的样品前处理方法,用高效液相色谱法测定水产品中喹乙醇残留量。[14]将草鱼、鲤鱼和鲫鱼等水产品去鳞、去皮、沿背脊取肌肉,用高速匀浆机打成匀浆,冷冻备用。称取样品5.00g置于50mL离心管中,加入无水硫酸钠10g搅匀,再加入乙腈30mL,涡旋混合2min,于振荡器上振荡提取15min,以3600r�min-1转速离心10min,将上清液倒入125mL棕色蒸发瓶中后,再向离心管中加入乙腈20mL,重复操作一次,合并上清液。在40!水浴下旋转减压蒸发至近干,向棕色蒸发瓶中加入流动相1.00mL和正己烷(用乙腈饱和)10mL,充分洗涤溶解残留物后,倒入10mL离心管中,静置或离心分层后,下层液经0.45�m微孔滤膜过滤后,按色谱条件进行测定。5.2高效液相色谱法分析调味品高效液相色谱法亦被用于分析食物调味品。例如J.D.BARANOWSKI报导了用高效液相色谱法分离生姜辣味成分的方法[15]。又如BbathnanathicM和BuckleH.A报导了用高效液相色谱法测定胡椒中胡椒碱的方法[16]。6小结综上所述,高效液相色谱法在食品分析中的应用是广泛的。所有实验均表明,在食品分析中高效液相色谱法是一种高效能、高灵敏度、高准确度及操作简便的分析办法。随着新型检测的问世及与计算机的联用,高效液相色谱法将在食品分析中发挥更大的作用。参考文献：［1］曾泳怀分析化学（仪器分析部分）（第三版）［2］于世林.高效液相色谱方法及应用［M］.北京：化学工业出版社，2000，3.［3］林裕.高效液相色谱法测定食品中黄曲霉毒素［J］.中国热带医学，2006，6（4）：677-678.［4］卫生部.食品卫生检验方法理化部分(一)［M］.北京：中国标准出版社，2004：189-195.［5］李永新,孙成均,赵剑虹，等.高效液相色谱法同时测定蔬菜水果中的12种农药残留［J］.色谱，2006，24（3）：251-255.［6］王帆，胡小钟，王勇，等.快速同时检测大豆异黄酮保健食品中三种雌激素的HPLC法［J］.中国卫生检验杂志，2004，14（4）：410-411.［7］周胜银，李珺、色谱、1990；8（1），54—55［8］SAMY.H.ASHOORandJIM.WEITY.J.chromatogr.1984;287,452-456［9］陈文,王正猛,吴晓蓉,等.单扫描极谱法连续测定食品中非食用色素酸性金黄和酸性大红[J].食品科学,2005,26(6):210-212[10]高效液相色谱法测定食品中非食用色素王荣艳，贾丽，范筱京北京市理化分析［11］柳其芳，吕玉琼，黎雪慧，等.二极管阵列检测高效液相色谱法测定食品中丙烯酰胺的研究［J］.中国热带医学，2005，5（6）：1186-1188.中心，北京100089）［12］NY5071-2002�无公害食品渔用药物使用准则[S].［13］NY5070-2002�无公害食品水产品中渔药残留限量[S].［14］高效液相色谱法测定水产品中喹乙醇残留量谢小华,周德山,宋向明,李�强(连云港市水产品质量检测中心,连云港222001)［15］J.D.BARANOWSKI;Jchromatogr,1985;319,471-474［16］RathnanathicM.andBuckleH.A,J.chromatogr,1983;264,316-320