酶切位点保护碱基

PCR设计引物时酶切位点的保护酶寡核苷酸序列切割率%2hr20hrAccIGGTCGACCCGGTCGACCGCCGGTCGACCGG000000AflIIICACATGTGCCACATGTGGCCCACATGTGGG0909009090AscIGGCGCGCCAGGCGCGCCTTTGGCGCGCCAA909090909090AvaICCCCGGGGCCCCCGGGGGTCCCCCGGGGGA509090909090BamHICGGATCCGCGGGATCCCGCGCGGATCCGCG109090259090BglIICAGATCTGGAAGATCTTCGGAAGATCTTCC0752509090BssHIIGGCGCGCCAGGCGCGCCTTTGGCGCGCCAA00500090BstEIIGGGT(A/T)ACCC010BstXIAACTGCAGAACCAATGCATTGGAAAACTGCAGCCAATGCATTGGAACTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT0252505090ClaICATCGATGGATCGATCCCATCGATGGCCCATCGATGGG009050009050EcoRIGGAATTCCCGGAATTCCGCCGGAATTCCGG909090909090HaeIIIGGGGCCCCAGCGGCCGCTTTGCGGCCGCAA909090909090HindIIICAAGCTTGCCAAGCTTGGCCCAAGCTTGGG00100075KpnIGGGTACCCGGGGTACCCCCGGGGTACCCCG0909009090MluIGACGCGTCCGACGCGTCG025050NcoICCCATGGGCATGCCATGGCATG050075NdeICCATATGGCCCATATGGGCGCCATATGGCGGGGTTTCATATGAAACCCGGAATTCCATATGGAATTCCGGGAATTCCATATGGAATTCCC0000757500009090NheIGGCTAGCCCGGCTAGCCGCTAGCTAGCTAG0101002550NotITTGCGGCCGCAAATTTGCGGCCGCTTTAAAATATGCGGCCGCTATAAAATAAGAATGCGGCCGCTAAACTATAAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA010102525010109090NsiITGCATGCATGCACCAATGCATTGGTTCTGCAGTT10909090PacITTAATTAAGTTAATTAACCCTTAATTAAGG00002590PmeIGTTTAAACGGTTTAAACCGGGTTTAAACCCAGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG000750255090PstIGCTGCAGCTGCACTGCAGTGCAAACTGCAGAACCAATGCATTGGAAAACTGCAGCCAATGCATTGGAACTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT0109090001090900PvuICCGATCGGATCGATCGATTCGCGATCGCGA010002510SacICGAGCTCG1010SacIIGCCGCGGCTCCCCGCGGGGA050090SalIGTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGCGCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGGACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCGGAA0101005075ScaIGAGTACTCAAAAGTACTTTT10752575SmaICCCGGGCCCCGGGGCCCCCGGGGGTCCCCCGGGGGA00109010105090SpeIGACTAGTCGGACTAGTCCCGGACTAGTCCGCTAGACTAGTCTAG10100090905050SphIGGCATGCCCATGCATGCATGACATGCATGCATGT001002550StuIAAGGCCTTGAAGGCCTTCAAAAGGCCTTTT909090909090XbaICTCTAGAGGCTCTAGAGCTGCTCTAGAGCACTAGTCTAGACTAG09075750909090XhoICCTCGAGGCCCTCGAGGG010025CCGCTCGAGCGG1075XmaICCCCGGGGCCCCCGGGGGCCCCCCGGGGGGTCCCCCCGGGGGGA02550900759090注释：1．如果要加在序列的5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的5’端加上相应的碱基（黑色），相同如果要在3‘端加保护碱基，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的3’端加上相应的碱基（黑色）。2．切割率：正确识别并酶切的效率3。加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。