流式实验如何设置对照

流式实验如何设置对照A、空白对照细胞内物质自身也发出荧光，能被FCM灵敏的检测到，这种未染色的细胞自身发出的一些荧光称为自发荧光。设置空白对照（未染色的细胞），用以区分细胞的自发荧光和特异性荧光，避免假阳性的结果。如上图。流式结果中荧光强弱是一个相对值，光电倍增管电压越大，电子信号越强；电压越小，信号越弱。通过调节电压，使阴性对照管的荧光强度处于阴性的位置，实验组的荧光值都是相对对照组。如下图：B、同型对照IsotypeControl非特异性染色——抗体的Fc段可以与细胞表面的Fc受体非特异性结合；——抗体进入胞内，不容易洗脱，造成非特异性染色。同型对照是指使用与实验抗体相同种属来源、相同剂量及同种免疫球蛋白的相同亚型的抗体作为对照，用于消除抗体非特异性结合到细胞上而产生的背景荧光。比如实验抗体：FITC-CD3单克隆抗体为鼠IgG1亚型抗体;同型对照：未免疫小鼠血清纯化的IgG1，并标记FITC，相同剂量C、阳性对照PositiveControl设置阳性对照是为了检测荧光抗体是否有效，并不是每次分析时都必须设置：a)使用新的荧光素抗体时；b)使用存储时间较长的荧光素抗体时。c)设置阳性对照的方法：d)用肯定表达有该抗原的细胞来检测；e)已经证明有效的、偶联其他荧光素的该抗原的抗体。D、单标对照SingleStainingControl用来调节补偿。