搜索
岛津LC-20A型液相色谱系统的使用和维护一、系统配置系统组成:本系统由2个LC-20AT溶剂输送泵分为A,B泵、手动进样器、C18填料色谱柱、SPD-20A紫外-可见检测器、N2010工作站等组成。二、准备工作流动相准备:使用前应待检样品的检验方法准备所需的流动相(水使用纯净水,其他有机溶剂要求色谱纯,无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L用合适的0.45μm滤膜过滤(有机相和水相分别选用各自的专用滤膜,有机相用尼龙,水相用纤维素,超声脱气20min以上待用。1、色谱柱准备:根据待检测样品的需要选用合适色谱柱,柱进出口方向应与流动相流向一致(检查柱上“FLOW”流向2、样品溶液配置:配置样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制,用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重,可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。3、检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。三、开机、参数设定及平衡系统1、接通电源,依次开启稳压电源、A泵、B泵、检测器,待泵和检测器自检结束后,打开电脑显示器、主机,启动工作站软件。2、排气泡或更换流动相的操作方法(操作时虑头必须全部浸入流动相中,否则,可能带入气泡。更换流动相时,须先把泵关掉,等柱压为零再拿出虑头更换。2.1.将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中;2.2.逆时针转动A/B泵的排液阀180o,,打开排液阀;2.3.按A/B泵的[purge]键,pump指示灯亮,泵大约以9.9ml/min的流速冲洗,3min(可设定后自动停止;2.4.将排液阀顺时针旋转到底,关闭排液阀。2.5.如管路中仍有气泡,则重复以上操作直至气泡排尽。2.6.如按以上方法不能排尽气泡,从柱人口处拆下连接管,放入废液瓶中设流速为5ml/min,按pump键停泵,重新接上柱并将流速重设定为规定值。3、参数设定3.1、波长设定:在检测器显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需波长值,按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。3.2、流速设定:在A泵显示初始屏幕时,按[func]键,用数字键输入所需流速(柱在线时流速一般不超过1ml/min,按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.3、流动相比例设定:在A泵显示初始屏幕时,按[conc]键,用数字键输入流动相B的浓度百分数,按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.4、梯度设定3.4.1.在A泵显示初始屏幕时,按[edit]键,[Enter]键;3.4.2.用数字键输入时间,[Enter]键,重复按[func]键选择所需功能(FLOW设定流速,BCNC设定流动相B的浓度,按[Enter]键,用数字键输入设定值,按[Enter]键,3.4.3重复上一步设定其他时间步骤;3.4.4用数字键输入停止时间,重复按[func]键直至拼命显示STOP,按[Enter]键确认。按[CE]键退出。4、平衡系统4.1.按《N2010色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件,输入实验信息并设定各项方法参数。4.2等度洗脱方式4.2.1按A泵的[pump]键,A、B泵将同时启动,pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统,一般最少需6倍柱体积的流动相。4.2.2.检查各管路连接处是否漏夜,如漏夜应予以排除4.2.3.观察泵控制屏幕上的压力值,压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡,进行气泡排除操作4.2.4.观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV时,可认为系统已经达到平衡状态,可以进样。4.3.梯度洗脱方式4.3.1以检查方法规定的梯度初始条件,按4.6.2项下方法平衡系统。4.3.2在进样前运行1~2次空白梯度。方法:按A泵的[run]键,prom..run指示灯亮,梯度程序运行;程序停止时,prom.run指示灯灭。4.4如果使用前色谱柱只能中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛,而新流动相中含有缓冲盐时,应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相,以免盐析出损坏系统。4.5.如系统为正相或反相交换使用,应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。四、检测1、进样前按检测器[zero]键调零2、用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。3、每次进样量要基本一致,进样针里不可有气泡,如有,及时赶去。4、在进样阀处于“Inject”状态时,插入进样器,迅速旋转至load状态,注入样品,旋回inject位置,进样结束。5、至样品检测结束,在N2010色谱工作站软件上计算结果。五、清洗系统关机1、手动进样器清洗:用注射器吸20ml超纯水后套上冲洗头,将冲洗头轻轻顶在进样口上(不宜用力过大,否则容易损坏进样口,使进样阀保持在load位置,慢慢将水推入,水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈,由样品溢出管排出。2、色谱柱清洗:继续以分析中使用流动相冲洗10分钟以上,待基线平稳后关闭检样器,冲洗色谱柱。3、如果流动相不含缓冲盐,可以用甲醇:水=70:30(或用纯甲醇直接冲洗30分钟以上后把流速设为零,然后关闭所有仪器设备,顺序为:先退出工作站软件,再依次关闭系统控制器、检测器、自动进样器、柱温箱、泵;4、如流动相含缓冲盐可先用纯水冲洗20~30分钟后再用甲醇:水=70:30(或用纯甲醇冲洗30分钟以上,流速设零后再关闭仪器各部分电源,然后关闭总电源离开实验室。