实验五-植物细胞骨架的光学显微镜观察

1实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。三、实验试剂：1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1%TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、实验步骤：1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1%TritonX-100处理30min；3、吸去1%TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次5min；4、3%戊二醛固定30min；5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。五、实验结果：在光学显微镜下，可以清晰的看到细胞骨架呈淡蓝色。2六、分析与讨论：1、洋葱表皮细胞中，质膜下，核周，胞质中的细胞骨架的分布有无不同？答:核周细胞骨架分布紧密，向外基质出延伸时明显变得稀疏，质膜下维持细胞的外部形态。因此显微镜下看到的细胞骨架形态基本与细胞形态相似。胞质中细胞骨架呈现纤维状向质膜发射，质膜处的细胞骨架围成细胞固有形态。2、为什么试验中所看到的洋葱表皮细胞中细胞骨架有的成纤维状，有的成串球状？答:细胞骨架有运输细胞内物质的作用，细胞内物质沿着细胞骨架的通路进行运输，因此细胞骨架成串珠状可能是由于被运输物质停留在纤维的某一位置上使纤维状的细胞骨架成串珠状。