实验四、花粉生活力的测定

实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。1.形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。2.染色法(1)碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。②I-KI溶液：取2.0gKI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0gI2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。(2)蓝墨水染色法①蓝墨水溶液：正常购买的蓝墨水稀释10倍。②具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴蓝墨水溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。凡被染色呈无色时表示具有生活力，呈蓝黑色者为发育不良生活力弱的花粉。为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉的生活力。3.培养基发芽法：人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱。(1)培养基的制作与接种10%蔗糖+0.01%硼酸+1%琼脂，溶于蒸馏水中，加热煮沸即可。将配好的培养基保持在40℃的水浴锅中保温，即不凝固。用玻璃棒蘸一滴培养基滴在载玻片的凹玻片内，然后用头发沾少量花粉条播。将载玻片放在垫有湿润滤纸的培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签（花粉品种名称、姓名和日期），将培养皿放于25℃暗培养24h后统计发芽率。(2)观察记数在显微镜下观察，每品种观察不同的3个视野，每个视野花粉粒数目≥20粒，求平均值，统计花粉的发芽率。花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。四、作业1．绘出花粉发芽前、后的形态特征图。2．统计碘-碘化钾染色法和蓝墨水染色法测定花粉生活力的结果，并填写表1。3.统计培养基发芽法测定花粉生活力的结果，并填写表2。4.比较花粉生活力测定的不同方法，并分析引起花粉生活力差异的具体原因。表1染色法测定花粉生活力结果统计表染色法各视野中有活力和无活力花粉粒的数量花粉生活力(%)视野花粉粒总数(个)有活力花粉粒数量(个)无活力花粉粒数量(个)各个视野花粉生活力(%)碘-碘化钾123蓝墨水123表2培养基发芽法测定花粉生活力结果统计表视野花粉粒总数(个)发芽的花粉粒数量(个)花粉发芽率(%)花粉生活力(%)123