PEG沉淀法-病毒提纯方法

1.Virusessuchasbaculoviruscanbeconcentratedbypolyethyleneglycolprecipitation.2.AdjustthepHofthevirus-containingsupernatantto7.2-7.5.Polyethyleneglycol(PEG,MW6,000)isaddedtoafinalconcentrationof8%(w/v).3.Stirat4℃for2hours.4.Centrifugeat10,000xgfor2hours.5.Resuspendthepelletinasmallvolumeofappropriatebuffer(e.g.,RNase-freeddH2forvirusRNAprep).沉淀法-病毒提纯方法主要是从稀的悬浮液中浓缩病毒，有中性盐沉淀法、聚乙二醇(PEG)沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、皂土法和鱼精蛋白沉淀法等。1.中性盐沉淀法：病毒一般在45%以上饱和度的硫酸铵溶液中沉淀，且保持其感染性。在含有病毒的组织培养液中加入等体积的饱和硫酸铵，可以很容易地沉淀某些病毒如狂犬病毒、鸡新城疫病毒等。2.聚乙二醇沉淀法：聚乙二醇(PEG)为水溶性非离子型聚合物，具有各种不同的分子量，用于病毒沉淀的主要是分子量为2000～6000的PEG。将PEG配成50%左右的溶液，或直接将固体PEG加于病毒悬液中，使其达到所需浓度，通常在4℃搅拌过夜，然后离心使病毒沉淀。Tanncock(1985年)成功地用PEG浓缩了禽脑脊髓炎病毒。3.有机溶剂沉淀法：甲醇、氯仿、正丁醇、氟碳化合物等都可用于提纯病毒，但乙醚、氯仿等脂溶剂对于具有脂质囊膜的病毒具有破坏和灭活作用，故不适于这类病毒的浓缩提纯。4.等电点沉淀法：病毒粒子在等电点时，所携带的正电荷与负电荷相互中和，因而失去相互排斥的作用而发生沉淀。多数病毒的等电点在pH4.5～5.5之间，因此在pH3～6范围内均可沉淀，由于一部分细胞成份在等电点时亦发生沉淀，此法效果不太理想，但从感染的组织培养液中浓缩病毒，可以获得较好结果。应用酸性范围的等电点沉淀或分级沉淀病毒时，必须注意pH对病毒活性的影响及病毒粒子电荷与组织蛋白电荷的差异。5.皂土法：Girin(1989年)应用皂土在酸性条件下(pH4～4.5)吸附轮状病毒SA-11，再在碱性条件下（pH8.5），又使其洗脱下来，从而达到纯化目的。6.鱼精蛋白沉淀法：鱼精蛋白为碱性蛋白，具有携带其它蛋白质共沉淀的作用，能和直径大于50nm的病毒共同沉淀而不影响病毒的感染力。当向这种沉淀物加入1mol/LNaCl时，病毒又重新释放到悬液中，而鱼精蛋白仍然沉淀。直径小于50nm的小型病毒则不与鱼精蛋白共同沉淀。因此，可利用鱼精蛋白去除病毒材料中直径大于50nm的异种蛋白质。聚乙二醇HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH(n＞4)(PolyethyleneGlycol简写为PEG)，它的亲水性强，溶于水和许多有机溶剂，对热稳定，有广泛围的分子量，在生物大分子制备中，用的较多的是分子量为6000～20000的PEG。PEG的沉淀效果主要与其本身的浓度和分子量有关，同时还受离子强度、溶液pH和温度等因素的影响。在一定的pH值下，盐浓度越高，所需PEG的浓度越低，溶液的pH越接近目的物的等电点，沉淀所需PEG的浓度越低。在一定范围内，高分子量和高浓度的PEG沉淀的效率高。以上这些现象的理论解释还都仅仅是假设，未得到充分的证实，其解释主要有：①认为沉淀作用是聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。②由于聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。③聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。④通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而发生沉淀。有机聚合物沉淀的优点是：①操作条件温和，不易引起生物大分子变性；②沉淀效能高，使用很少量的PEG即可以沉淀相当多的生物大分子；③沉淀后有机聚合物容易去除。水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质的机制尚不清楚，大致有如下解释：①聚合物与蛋白质形成共沉物；①聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；①聚合物与蛋白质形成复合物。此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等。分子量为2000～6000的PEG皆适宜于做蛋白沉淀用。如若使用得当，效果甚为满意。一般认为，PEG浓度在3％～4％时沉淀免疫复合物，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％可沉淀IgG，12％～15％可沉淀其他球蛋白，25％可沉淀白蛋白。最突出的应用是用3％～4％的PEG沉淀免疫复合物，未结合的抗原和抗体留在溶液中。按此原理设计了快速测定法和循环免疫复合物测定法从网上搜索到得关于PEG沉淀提纯病毒的方法，先汇总至此贴，希望大家支持本版1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；3、4℃过夜或放置一段时间；4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜；6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。PEG沉淀法提纯病毒1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG(一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore公司的离心浓缩柱，Amicon系列的可以一次浓缩15ml样品。)；3、4℃过夜或放置一段时间；4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4℃过夜；6、10000r/min离心1小时,沉淀即为浓缩的病毒。还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。Concentratingvirus(PEG6000)--------------------------------------------------------------------------------1.Virusessuchasbaculoviruscanbeconcentratedbypolyethyleneglycolprecipitation.2.AdjustthepHofthevirus-containingsupernatantto7.2-7.5.Polyethyleneglycol(PEG,MW6,000)isaddedtoafinalconcentrationof8%(w/v).3.Stirat40Cfor2hours.4.Centrifugeat10,000xgfor2hours.5.Resuspendthepelletinasmallvolumeofappropriatebuffer(e.g.,RNase-freeddH2forvirusRNAprep).PEG-it™慢病毒浓缩试剂价格：￥3802.5说明：欢迎询价详谈货号：LV810A-1PEG-it™慢病毒浓缩试剂原理PEG是高分子聚合物，具有高亲水性，在溶液中会吸收大量水分，减少病毒之间的距离，使病毒与病毒能够很容易的聚合在一起，病毒的相对浓度提高，达到沉淀浓缩的目的。PEG-it™中还含有特定的（SBI专属的）缓冲液，它能够保持病毒的活性。少量残留的PEG-it™还会提高感染效率，使病毒更稳定。图1使用简便快捷只需将5倍的PEG-it™溶液与包含病毒颗粒的细胞培养基混合离心30分钟，即可得到10-100倍的病毒浓缩液特点快捷：全程只需30min高效：能使病毒颗粒浓缩10-100倍安全：对所有靶细胞，包括胚胎干细胞是无毒的使用方便：无需使用特别的仪器，避免了昂贵的超高速离心机的使用，只需普通离心机，低速离心即可无残留：没有细胞残片的残留，避免对细胞的毒性和免疫原性提高转导效率：为动物转导提供高滴度的病毒特别适合大体积的病毒浓缩，解除了超滤管小量的限制产品信息货号产品名称包装体积价格（￥）说明LV810A-1PEG-it™VirusPrecipitationSolution(100mLaliquot)100mL3802.5适用于400ml慢病毒细胞上清液浓缩LV825A-1PEG-it™VirusPrecipitationSolution(250mLaliquot)250mL8287.5适用于1L慢病毒细胞上清液浓缩纯化病毒用终浓度10%PEG处理后8000g离心，溶解于PBS。这样的方法对吗？PEG沉淀的原理是什么啊？是这样的，纯化病毒和噬菌体都可以，原理就是PEG8000是一种高度的网状聚合物，很粘稠，可以把病毒沉淀下来。Catalog#ProductName+SizePriceBuyNowK904-200PEGVirusPrecipitationKit200preparations$725.00K904-50PEGVirusPrecipitationKit50preparations$245.00PEGVirusPrecipitationKit中文名称PEG病毒沉淀试剂盒(200次)供应商Biovision产品货号K904-200产品报价￥11600/200次分析背景资料包装出来的重组病毒常常含量很少，因此通常需要浓缩之后才能进行储存或其它应用。另外，在病毒包装过程中，可能会产生有毒的蛋白或生物分子杂质。因此需要一种快速、简单而便宜的方法来浓缩病毒，同时去除杂质。产品描述BioVision的PEG病毒沉淀试剂盒提供了一种简单方便省时的方法来浓缩病毒，无需超速离心。本试剂盒可用于小实验样品处理或者大规模高产出、高生物量病毒制备。本试剂盒可利用细胞培养液或者环境样品浓缩逆转录病毒、杆状病毒、慢病毒、噬菌体等。浓缩倍数可达100倍以上。试剂盒中还有一种优化的重悬溶液可最大化地进行病毒复苏，根据病毒类型和来源，复苏比例在40-100%不等。整个过程都使用无毒试剂，浓缩的病毒可用于感染实验、DNA或RNA纯化等。产品特点1、一种快速简单便宜的方法浓缩病毒去除杂质；2、简单方便省时的方法浓缩病毒，无需超速离心；3、病毒可浓缩100以上；4、整个过程都使用无毒试剂。保存建议请在接收到该Biovision品牌的PEG病毒沉淀试剂盒(200次)产品后，置于-20℃保存。PEGVirusPrecipitationKit中文名称PEG病毒沉淀试剂盒(50次)供应商Biovision产品货号K904-50产品报价￥3920/50次分析超速离心法-病毒提纯方法录入时间:2009-6-269:30:33来源：青岛海博病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法，它是分离提纯不同大小的病毒的有效方法之一。在应用超速离心法沉淀病毒时，必须了解所用离心机的离心力。离心机由于转头的回转产生了强大的离心力，这种离心力是随转头的大小和离心管至转轴中心的距离而变化的。高速和超速离心机的离心条件，有的以每分钟速度(r/min)表示，有的则以离心力——重力加速度为单位来表示。离心沉淀时，沉降]速度与离心力有关。当运转角速度为ω，运转半径为R时，则：离心力，ω=(2πr/min)/60，图13-2〓角转头的横剖面图表明从旋转中心到离心管顶部、中部及底部的距离。上式中，Rav为离心管中心至转轴中心的平均距离(如图13-2)。从上式可以作]出r/min、R与g三者关系的贯线图(如图13-3)。三者中如知其二，就可推算另一数值。如转速超过7万，或R为英寸时，可参阅图13-4。JZ]图13-3〓推算转头离心力的贯线图图13-4〓推算转头离心力的贯线图由此图可以获得与半径相关的相对离心力的值。将尺放