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尿肌酐的测定-分光光度法1、实验目的：掌握碱性苦味酸法测定尿肌酐的原理；熟悉实验操作步骤和分光光度计的使用；了解尿肌酐测定方法的注意事项。2、实验原理：肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐。在波长490nm处比色定量。3、仪器与试剂：仪器：分光光度计、乙烯塑料瓶、10mL具塞比色管试剂：饱和苦味酸溶液（15g/L）、NaOH（100g/L）、碱性饱和苦味酸溶液（VNaOH:V苦味酸=1:10）、HCl（0.1mol/L）、肌酐标准溶液（0.1mg/mL)4、实验步骤：4.1样品采集：按所接触的毒物或其代谢产物所规定的采样时间，用50mL聚乙烯塑料瓶收集尿样，冷藏运输，4℃下可保存2周。4.2标准曲线绘制与样品测定以肌酐浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线！5、计算肌酐肌酐---尿中肌酐的质量浓度，g/L---标准曲线上查得的HA浓度，mg/L---尿液稀释倍数，26、注意事项6.1在0.5h内比色完毕，如时间过久，滤液内其他物质与苦味酸起非特异性反应而影响结果。管号012345样品试剂空白肌酐标液（mL）00.10.20.30.40.50.1mL尿样-水（mL）3.02.92.82.72.62.52.93.0碱性苦味酸溶液各加2.0mL，混匀，室温下反应20～30min加5mL水混匀后，以零管作参比，490nm下测定吸光度加5mL水混匀后，以试剂空白作参比，测定样品的吸光度肌酐浓度（g/L）吸光度6.2温度在15～20℃显色稳定，反应温度应控制在小于30℃。6.3如测定管显色过深，应稀释尿液后测定，其结果乘以稀释倍数。6.4成人尿肌酐浓度值正常范围为0.4～1.3g/L。