抗核抗体检测及临床意义-张瑾

风湿免疫性疾病诊断方法症状、体征自身抗体影像学检查病理风湿免疫性疾病相关自身抗体抗核抗体谱（ANAs）类风湿关节炎相关抗体(RF,抗CCP等)抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗自身免疫性肌炎谱自身免疫性肝病相关抗体谱抗磷脂抗体谱抗核抗体谱检测的意义有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗Sm抗体是SLE的标记抗体；抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；观察疾病活动度和治疗反应抗dsDNA抗体研究发病机理抗核小体抗体、抗dsDNA抗体基本概念ANA荧光核型ANAs中的常见抗体抗核抗体自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。ANA新概念：抗核酸(Nucleicacid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富(如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)ANA检测方法-IIF法ANA滴度ANA核型ANA滴度的意义结缔组织病的粗筛（1:160）阳性标本还需进一步识别感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性ANA阴性基本可以除外SLEANA滴度与疾病活动性无明确相关性荧光显微镜下ANA的染色型别均质型（H）核膜型（M)斑点型（S）核仁型（N）着丝点型（ACA）胞浆型（C）混合型均质型(H)抗组蛋白抗ds/ssDNA抗核小体主要出现在SLE中均质型(H)核膜型(M)主要与抗dsDNA有关与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗gp210出现在PBC中核膜型(M)与抗ENA成分有关抗Sm抗RNP抗SS-A抗SS-B出现在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等斑点型(S)斑点型(S)与抗核仁蛋白有关抗Scl-70抗RNA多聚酶I抗PM-Scl出现在SSc中核仁型(N)核仁型(N)与抗着丝点染色质有关存在于有丝分裂期出现在SSc、CREST综合征等中着丝点型(ACA)着丝点型(ACA)与抗胞浆成分有关抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信号识别颗粒（SRP)抗线粒体：出现在PBC中抗高尔基体抗溶酶体等等胞浆型(C)见于PM/DM胞浆型(C)ANA荧光核型小结均质型（H）：像大饼，SLE相关核膜型（M)：像圈圈，SLE相关斑点型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像纽扣，SD相关着丝点型（ACA）：像满天星，抗ACA胞浆型（C）：像空心大饼,SLEPM/DMPBC相关混合型：稀释后检测有助于区分抗核抗体谱（ANAs）ANAs抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色体DNA蛋白抗核仁抗体抗DNA抗体抗核小体抗体抗组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA…….dsDNAssDNA抗着丝点抗体（ACA)抗5sRNA抗dsDNA检测方法以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IIF)：≥1:5短膜虫或马疫锥虫的动基体内含有天然纯dsDNA，未经人工处理，不含组蛋白与ssDNA，抗原性纯一特异。优点：特异性好抗dsDNA检测方法酶联免疫吸附法（ELISA）:≥100IU/ml优点：敏感性最高缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而这两种致病力均不强放射免疫法(Farr):≥20%优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响蛋白印迹法（WB）缺点：dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everythingispossible至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ELISA法抗dsDNA抗体临床意义SLE的血清特异性抗体多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90％可用于SLE疾病活动期判断＆药物疗效观察与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法X2SD)可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性SLE：50%活动期SLE可达90.2%与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性药物性狼疮（DIL）：90%如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL其他结缔组织病：23-30%如：RA、PBC、SSc等核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SLE发病机制：多克隆B细胞活化剂产生ANuA，先于其他ANA促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的发生抗核小体抗体（ANuA）抗核小体抗体临床意义SLE标记性/高特异性自身抗体敏感性：58%-66%（优于抗dsDNA及抗Sm）特异性：98%-100%（与抗dsDNA相当）用于SLE的早期诊断ANuA的产生早于抗dsDNA、AHA抗dsDNA阴性者有1/4～1/2ANuA阳性与LN相关，用于SLE疾病活动性监测ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义抗ENA抗体extractablenuclearantigen可提取性核抗原成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译合成来源：无种属差异，有组织不均一性理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的一簇抗体，与疾病活动性大多无相关抗ENA抗体检测方法免疫双扩散法(ID)对流免疫电泳法(CIE)免疫印迹法(IBT)酶联免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Proteinchip）38KD29KD28KD16.5KD15KD13.5KD无风湿病相关抗体SmRid、抗体阳性红斑狼疮病人血清86KD73KD60KD52KD45KD38KD32KD29KD28KD17.5KD16.5KD15KD13.5KD抗Sm抗体与抗U1RNP抗体靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白，Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点抗Sm抗体与抗U1RNP抗体抗Sm：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。阳性率低：SLE（30%）抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。阳性率：40-60%，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm-MCTD抗U1RNP+抗Sm+SLE抗U1RNP-抗Sm+实验室误差?U1RNP丢失?抗rRNP抗体靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白抗rRNP抗体SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。阳性率：24%可出现在SLE早期（ANA及抗dsDNA阴性）抗SSA与抗SSB抗体靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同（细胞核内和胞浆中均可存在）pSS的SS-A存在于细胞核内SLE的SS-A存在于胞浆中SS-B主要位于细胞核内45KD47KD48KD抗SSA与抗SSB抗体抗SS-A：结缔组织病中出现频率最高的抗体（60-75%），见于pSS（75%）SLE（25%）RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于pSS（40%）、SLE（10%）临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、平滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、淋巴结肿大、WBC减少有关ANA阴性的SCLE：常为抗SSA抗体阳性。抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)靶抗原：组氨酸tRNA合成酶胞浆中的磷酸蛋白抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体)PM/DM的标记抗体，阳性率20-30%抗体效价与疾病活动性相关抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻）,肺间质病变其他抗合成酶抗体：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ抗ScL-70抗体靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物主要存在核仁中SSc的标记抗体，阳性率20-30%多见于dSSc，病情进展快，提示预后不良与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见主要靶抗原：着丝点蛋白-B多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好CREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等国外文献：与PAH相关，而ILD少见中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义.中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.抗着丝点抗体(ACA)TakeHomeMassageANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，尤其在靶抗原阴性时。ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。抗核仁型抗体常与SSc有关。抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关。TakeHomeMassage抗dsDNA：SLE特异性抗体，与LN及疾病活动度有关，至少两种方法联合检测（如：IIF法+ELISA法）。抗核小体、抗组蛋白、抗dsDNA三抗体阳性者强烈提示增殖性LN。与疾病活动性相关的抗体：抗dsDNA、抗核小体、抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）案例1女性，34岁游走性多关节痛，雷诺现象半年RF56U/L；抗CCP抗体阴性；ANA1：320胸部CT：轻度肺间质病变诊断？治疗？（核仁型）UCTDILD发展为SSc可能性大Pred+CTX案例2男性，50岁双腕关节炎、雷诺现象半年ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性胸部CT：轻度肺间质病变右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎诊断？复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性诊断：抗Jo-1抗体综合征Pred+TⅡ案例3女性32岁手指关节痛2月ANA（+）S1:80抗SSA（+++）135抗Ro52（+++）110三大常规正常；ESRCRP正常；补体正常；RF87IU/ml；诊断？治疗？CTDSLE待随诊，重用HCQ案例4女性，40岁4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA1：320、抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred10mgqod+HCQ”维持。15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；尿常规：PRO阴性；尿四蛋白：轻度增高；补体下降（C350mg/dlC47.4mg/dl）；抗dsDNA（IF）1：320抗核小体+抗组蛋白+；诊断？治疗？SLE，SLEDAI8分，pred1mg/kg/day+CTX案例5女，28岁，面部红斑，尿蛋白（++）；ANA1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）：1:40/800；C340mg/dlC46mg/dl；诊断？治疗？治疗半年后蛋白尿（+）；ANA1:320H；抗dsDNA（IF/ELISA）：1:20/400；C366mg/dlC48mg/dl；治疗？治疗1年后蛋白尿（-）；ANA1:160H；抗dsDNA（IF/ELISA）：阴性/250；C386mg/dlC412mg/dl；治疗？Thanks