抗氧化剂测定方法的分类

抗氧化剂测定方法的分类前言近十几年来,抗氧化剂作用在医疗、保健、食品保鲜等领域内占有越来越重要的地位而引起们的普遍关注。食品的变质，除了受微生物的作用而发生腐败变质外，还会和空气中的氧气发生氧化反应，导致食品中的油脂酸败、褪色、褐变、风味变劣及维生素破坏等，甚至产生有害物质，从而降低食品质量和营养价值。误食这类食品有时甚至会引起食物中毒，危及人体健康。在食品中添加抗氧化剂可以防止食品发生氧化变质。而在食品中广泛应用的合成抗氧化剂如丁基羟基甲苯、叔丁对甲氧酚制剂、特丁基对苯二酚等由于具有潜在毒性和致癌作用而受到人们的排斥。鉴于上述原因,关于清除自由基和抑制脂质过氧化效应的探讨已得到普遍关注。抗氧化剂的定义抗氧化剂是一类对油脂自动氧化有阻止或很大地增加脂类的氧化稳定性作用的物质。可用于食品的抗氧化剂应具备以下条件：①具有优良的抗氧化效果；②本身及分解产物都无毒无害；③稳定性好，不影响食品感官性质；④使用方便，价格便宜抗氧化剂通常是还原剂，例如硫醇、抗坏血酸、多酚类。常见的有谷胱甘肽、维生素C与维生素E，过氧化氢酶、超氧化物歧化酶等酶，以及各种过氧化酶。低阶的抗氧化剂或抗氧化酶的抑制剂，则会引发氧化应激，会伤害、杀死细胞。抗氧化剂的分类①按来源分天然抗氧化剂生育酚（维生素E）、L-抗坏血酸（维生素C）、D-异抗坏血酸钠（异维生素C钠）、茶多酚（TP）、迷迭香提取物、植酸（肌醇六磷酸）、生姜提取物合成抗氧化剂丁基羟基甲苯、叔丁对甲氧酚制剂、特丁基对苯二酚②根据活性不同，可分为物理抗氧化剂和活性抗氧化剂物理抗氧化剂是用于稳定产品基质，抑制基质中一些活性成分氧化的抗氧化剂。这些抗氧化剂包括：BHT、BHA、没食子酸等等。活性抗氧化剂是指通过产品基质作为载体，渗透到皮肤或头发中，抵抗化学氧化、自由基攻击、生物氧化酶反应及UV光对细胞和细胞间质的生命大分子的破坏的一类活性抗氧化剂。通常包括SOD，谷肛甘肽，维生素C、E、A，EGCG，辅酶Q-10，等等。抗氧化剂的分类（其他分类）按溶解性可分为油溶性、水活性和兼溶性3类。油溶性抗氧化剂有BHA、BHT等；水溶性抗氧化剂有维生素C、茶多酚等；兼溶性抗氧化剂有抗坏血酸棕榈酸酯等。按作用方式可分为自由基吸收剂、金属离子螯合剂、氧清除剂、过氧化物分解剂、酶抗氧化剂、紫外线吸收剂或单线态氧淬灭剂等。抗氧化剂的检测方法1.液相色谱法以甲醇一水一乙酸体系为流动相,采用梯度洗脱，使用对称C柱为固定相，检测限为2mg/kg,回收率为82.4%一98.7%,RSD为1.01%一4.47%。采用基质固相分散萃取植物油中抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ和PG,经高效液相色谱进行分离,其回收率在85.8%~94.3%,相对标准偏差为2.1%~4.0%,最低检测限2ng。标准样品平均回收率为72.1%~99.6%;RSD为0.7%~7.2%,检测限TBHQ、NDGA为1ug/g,PG和OG为10ug/g。适用于定量分析抗氧化剂,具有速度快、灵敏度高、色谱柱可反复使用、样品量少、容易回收等优点2、液相色谱/离子阱质谱法甲醇-水(体积比50∶50)作为流动相,以C18作为分离柱,以电喷雾离子源作为接口,在负离子检测模式下进行一、二级质谱分析。二级质谱检测的线性范围为61.8~4542.5μg/L(R2=0.9999),最低检出限为48μg/L;10种食用植物油中TBHQ的回收率为(81.9±1.9)%~(109.6±4.6)%,RSD(n=10)≤5.3%。该法能快速、简便、准确地检测食用植物油中的抗氧化剂TBHQ。与单独的液相色谱法相比,液相色谱/离子阱质谱联用法对经液相色谱分离出的组分用TBHQ的二级质谱碎片离子进行检测,比目前常用的紫外和荧光检测器具有更高的灵敏度和更好的选择性。3、气相色谱法一般传统气相色谱法测定食用油中抗氧化剂程序是先将油脂溶解于己烷,用乙腈和80%乙醇混合溶液萃取，然后除去溶剂,经硅烷化处理,进行检测。硅烷化抗氧化剂在气相色谱图上出峰顺序依次为:BHA、TBHQ、BHT、PG。如果以DC-200为固定相,则BHA出峰在前,BHT在后。若以极性大Carbowax20M为固定相,则出峰顺序相反。该方法存在步骤繁琐、耗费试剂多、检测时间长等缺点,样品量大时,难以满足工作需要;因此许多研究者对该法不断进行改进,主要是在油样预处理程序方面。许彩芸采用甲醇直接从含油脂试样中提取BHA和BHT,然后用气相色谱氢火焰离子化检测,其检测结果:BHA和BHT定量检测范围。4、比色法将含有抗氧化剂BHT食用油脂样品经水蒸汽蒸馏,将BHT从油脂中分离出来,馏出物经冷凝后用甲醉吸收,然后加入邻联二茵香胺溶液和2ml0.3%亚硝酸钠溶液,生成橙红色发色团,接着用氯仿萃取得紫红色溶液,在波长520nm处测定吸光度,绘制吸光度与BHT浓度标准曲线,进行比较定量,测定植物油中BHT。含有抗氧化剂PG油脂样品用乙醚溶解,接着用乙酸按溶液提取,没食子酸丙酷与亚铁酒石酸盐发生颜色反应,在波长540nm处测定其吸光度,与标准曲线比较,测定PG含量。比色法测定抗氧化剂虽仪器简单,但操作程序繁琐,测定精度稍差,不能同时测定多种抗氧化剂。5、电分析法利用微分脉冲伏安法同时测定脱水马铃薯片中BHA和BHT含量,二者在碳纤维微电极上氧化峰电位差为300mV，利用电分析方法辅以化计量学技术同时测定食用油和调味粉中BHA、BHT、PG和TBHQ。电化学分析技术由于其高选择性和灵敏度、检测快捷方便特性,所以在复杂体系中检测微量化合物和生物活性成分方面应用广泛;而酚类抗氧化剂都是电活性物质,电化学分析技术在抗氧化剂定量分析和抗氧化活性评价方面应用潜力巨大。6、气相色谱-质谱法样品经乙腈提取后,进行气相色谱-质谱分析,采用外标法定量。结果:在0.1~10.00mg/kg添加水平范围内,3种抗氧化剂的添加回收率在69.1%~111.1%之间,相对标准偏差4.0%~1.5%,方法的测定低限(LOQ)为0.1mg/kg。该方法具有简便、快速、准确、无毒等特点，应用于大豆油、花生油、芝麻油、菜籽油、茶油、食用调和油中的抗氧化剂的测定。讨论目前,虽然有多种抗氧化活性的检测方法,由于抗氧化反应的多样性和复杂性,尚未形成一种标准方法。抗氧化剂在体系中的抗氧化活性受很多因素的影响,主要有抗氧化剂在水相和油相间的分配效应、所处的微环境、被氧化底物的性质和组成,检测体系。因此,在进行抗氧化活性实验设计时,这些因素都要被考虑。对于具体某一被测物的抗氧化活性,应至少使用两种不同的方法,因为被测物在一种检测方法中是抗氧化剂,而在另一种方法中有可能是促氧化剂。因此,在检测被测物的抗氧化活性时,首先,应明确氧化作用的底物是脂类物质、蛋白质还是DNA。其次,不要对样品的抗氧化效果轻易下结论,除非实验条件与应用环境条件基本相同。叔丁基对羟基茵香醚(BHA)、没食子酸丙酷(PG)、特丁基对苯二酚(TBHQ)2,6一二叔丁基化轻基甲苯(BHT)谢谢观看