在定量PCR仪上使用ROX校正的优点

在定量PCR仪上使用ROX校正的优点2Apr,2009©2009AppliedBiosystems定量PCR使用ROX校正的优点●在运行中校正可能由气泡或蒸发/浓缩造成的信号变化●提供功能强大的故障诊断工具：被动校正信号，不受反应的影响，而且在运行的每个循环中收集信号●在一个运行中校正可能由加样或可能的蒸发造成的体积差别●在多个运行间校正体积的差别，提供运行之间更一致的Ct值由于使用ROX具有以上优点，所以AB的定量PCR仪都支持ROX校正，并且AB的MasterMix也都加有ROX。客户可以在AB的定量PCR仪上选择使用或是不使用ROX。3Apr,2009©2009AppliedBiosystemsROXTM校正在一个运行中的信号变化Multicomponent图谱显示出逐渐增高的ROX信号，说明存在蒸发4Apr,2009©2009AppliedBiosystems4校正取样误差减少孔间差异“管家荧光”ROXRn=RReporter/RROX5Apr,2009©2009AppliedBiosystemsROXTM提供功能强大的故障诊断工具●通过观察ROX信号值进行故障诊断，如：–没有ROX说明漏加了MasterMix–较大的ROX信号差别，说明可能有些孔多加了一份MasterMix–不规则的ROX信号变化提示可能存在硬件故障6Apr,2009©2009AppliedBiosystemsROXTM校正体积差别7Apr,2009©2009AppliedBiosystemsExperimentOne:要获得高精度结果并不是必须要用ROXTM在7500Fast系统上使用RNaseP仪器校验板的反应结果，使用和不使用ROX的结果，Ct的SD值显示分别为0.042和0.108。8Apr,2009©2009AppliedBiosystemsExperimentTwo:ROXTM校正移液错误在RNaseP校验板中使用0.5、1.0和1.5μLddH2O取代等体积转移的样本，使用和不使用ROX得到的Ct的SD值分别为0.075和0.174。9Apr,2009©2009AppliedBiosystemsExperimentThree:在定量反应中ROXTM校正可确保精确的结果使用和不使用ROX校正得到的标准曲线可得到几乎相当的结果，R2值分别为0.997和0.9910Apr,2009©2009AppliedBiosystems使用1.0μLddH2O取代等体积转移的样本，表明ROX可以校正微小的起始浓度或总反应体积的差别ExperimentThree:在定量反应中ROXTM校正可确保精确的结果11Apr,2009©2009AppliedBiosystemsExperimentThree:在定量反应中ROXTM校正可确保精确的结果使用和不使用ROX校正、以及使用原反应液和用1.0μLddH2O取代等体积转移的样本得到结果的SD值差别12Apr,2009©2009AppliedBiosystems总结●在AB的定量PCR仪上，客户可以选择使用或是不使用ROX进行校正，两者获得的结果无显著差别●使用ROX校正可以协助实验故障诊断、校正体积差别等荧光波动，确保更加准确的定量结果●目前AB提供的所有MasterMix，和几乎所有MasterMix的生产厂商都提供具有ROX校正染料的试剂盒。AB作为定量PCR领域的标准，几乎所有试剂厂商开发的试剂都会以AB的系统为平台，所以AB的定量PCR仪具有很广泛的试剂开放性