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2100检测简介赖琼英•一、2100检测在整个环节中的作用•二、2100检测仪器•三、2100检测的工作原理•四、Cliper检测步骤•五、Caliper检测过程中的注意事项•六、产前文库的峰图判断2100检测简介2100检测的作用•产前实验流程抽血-血浆分离-DNA提取-建库-QC(QPCR&2100)-上机-数据分析-报告发放•2100检测是对文库进行定性以及定量新一代测序质控.定性则是判断文库构建是否成功，而定量是有别于QPCR并作为QPCR的参照为上机提供参考。2100检测所用仪器•Agilent2100Bioanalyzer2100检测所用仪器•CaliperLabChipGXAgilent2100Bioanalyzer、CaliperGX对比仪器名称Agilent2100BioanalyzerCaliperLabChipGX片段检测范围25~1000bp25~1000bp检测所需时间12个样品40分钟96个样品2小时16分钟检测成本12RMB(8RMB)/个样品3-4RMB/个样品定性范围（以ladder作为样品）0.1–50ng/μL0.1–50ng/μL检测所需样品体积1μL理论：1.5μL实际：2μL只针对Kit10002100检测原理•一句话概括--可定量的电泳仪Agilent2100Bioanalyzer、CaliperLabChipGX都是基于芯片实验室技术的核酸分析系统，通过微流体技术对样品进行分离。当给芯片加入电压时，样品便在芯片上的显微蚀刻管道中进行毛细管电泳，在样品流动过程中，不同DNA片段根据其大小被分离。凝胶-染料基质中的荧光染料可嵌入DNA双链，通过激光激发荧光，使其被仪器检测到，仪器依据收集到的荧光信号强度对样品定量。定性及定量原理•Agilent2100Bioanalyzer每次独立的检测都是ladder最先出来的，而caliper也是每12样品之前会首先跑ladder，ladder会根据自身的各个条带（已知size）及其相对应的迁移时间，形成一个迁移时间和size的函数关系，样品孔中的特定的DNA片段就能根据迁移时间算出size来。ladder孔和样品孔中的marker起到对齐和定范围的校准作用。定性及定量原理•DNA定量则是一个多步骤的过程。第一步，将特定DNA片断的面积与各个样品中均存在的marker（已知浓度）的面积进行比较。第二步，使用经验校正因子来校正已知谱带的面积。第三步，由校正面积计算得出未知谱带的浓度。相对于传统电泳优势•1.高质量的结果：提供高度准确的芯片电泳数字化数据。•2.快速得出结果：比传统的凝胶电泳的速度快高达数十倍。•3.重现性高的结果：自动进行样品分离与分析，提供标准化的、重现性高的结果。•4.先进、易用的软件：操作简便，便于数据处理、分析与存档。•5.耗样量少：正常检测只需要1-1.5ul样品。•6.安全：最大限度地减少与有害物质的接触。CaliperGX检测步骤•（1）室温平衡试剂盒；•（2）清洗芯片、准备芯片；•（3）配胶（此步骤根据需要执行）；•（4）按特定的顺序稀释样品（2+18）；•（5）混匀样品并转板；•（6）上机检测；•（7）清洗芯片；•（8）数据分析。Caliper检测过程注意事项•①选择合适的试剂盒•②过期芯片不能使用•③检测胶中含有DMSO（二甲基亚砜），避免与皮肤和眼睛接触；配好的胶要用锡箔纸包好，避光保存。•④加样转板后确保芯片及96孔板中无气泡才能上机检测，若有气泡，用干净枪头将气泡戳破。Caliper检测过程注意事项•⑤上机检测时要确定使用试剂盒和上机程序一致。•⑥检测过程中，应远离振动大的仪器及设备（离心机等）。•⑦检测完成以后，应及时将芯片取出清洗，不允许不处理而过夜。CaliperGX软件界面1000ladder峰图产前合格文库峰图产前不合格文库峰图产前拖尾文库峰图常见问题1、2100分析仪为什么不能检测单链DNA？因为在2100的检测中，凝胶-染料基质中的荧光染料可嵌入DNA双链，通过激光激发荧光，使其被仪器检测到。在单链DNA中不存在双螺旋结构，荧光染料无法镶嵌在基因中。2、为什么不允许检测芯片在分析仪中长时间放置？因为芯片中加有胶-荧光染料mix，如果长时间不用时，胶-荧光染料mix会凝固，会黏在电极上，造成电极清洗困难，对样品检测造成污染。