布鲁氏菌病防治技术规范

布鲁氏菌病防治技术规范布鲁氏菌病（Brucellosis，也称布氏杆菌病，以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的常见传染病。我国将其列为二类动物疫病。为了预防、控制和净化布病，依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关的法律法规，制定本规范。1适用范围本规范规定了动物布病的诊断、疫情报告、疫情处理、防治措施、控制和净化标准。本规范适用于中华人民共和国境内一切从事饲养、经营动物和生产、经营动物产品，以及从事动物防疫活动的单位和个人。2诊断2.1流行特点多种动物和人对布鲁氏菌易感。布鲁氏菌属的6个种和主要易感动物见下表：种主要易感动物羊种布鲁氏菌（Brucellamelitensis）羊、牛牛种布鲁氏菌（Brucellaabortus）牛、羊猪种布鲁氏菌（Brucellasuis）猪绵羊附睾种布鲁氏菌（Brucellaovis）绵羊犬种布鲁氏菌（Brucellacanis）犬沙林鼠种布鲁氏菌（Brucellaneotomae）沙林鼠布鲁氏菌是一种细胞内寄生的病原菌，主要侵害动物的淋巴系统和生殖系统。病畜主要通过流产物、精液和乳汁排菌，污染环境。羊、牛、猪的易感性最强。母畜比公畜，成年畜比幼年畜发病多。在母畜中，第一次妊娠母畜发病较多。带菌动物，尤其是病畜的流产胎儿、胎衣是主要传染源。消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途径，也可通过损伤的皮肤、黏膜等感染。常呈地方性流行。人主要通过皮肤、黏膜、消化道和呼吸道感染，尤其以感染羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌最为严重。猪种布鲁氏菌感染人较少见，犬种布鲁氏菌感染人罕见，绵羊附睾种布鲁氏菌、沙林鼠种布鲁氏菌基本不感染人。2.2临床症状潜伏期一般为14～180天。最显著症状是怀孕母畜发生流产，流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎，从阴道流出污秽不洁、恶臭的分泌物。新发病的畜群流产较多；老疫区畜群发生流产的较少，但发生子宫内膜炎、乳房炎、关节炎、胎衣滞留、久配不孕的较多。公畜往往发生睾丸炎、附睾炎或关节炎。2.3病理变化主要病变为生殖器官的炎性坏死，脾、淋巴结、肝、肾等器官形成特征性肉芽肿（布病结节）。有的可见关节炎。胎儿主要呈败血症病变，浆膜和黏膜有出血点和出血斑，皮下结缔组织发生浆液性、出血性炎症。2.4实验室诊断2.4.1病原学诊断2.4.1.1显微镜检查采集流产胎衣、绒毛膜水肿液、肝、脾、淋巴结、胎儿胃内容物等组织，制成抹片，用柯兹罗夫斯基染色法染色，镜检，布鲁氏菌为红色球杆状小杆菌，而其它菌为蓝色。2.4.1.2分离培养新鲜病料可用胰蛋白月示琼脂面或血液琼脂斜面、肝汤琼脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝汤琼脂斜面等培养基培养；若为陈旧病料或污染病料，可用选择性培养基培养。培养时，一份在普通条件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的环境中，37℃培养7～10天。然后进行菌落特征检查和单价特异性抗血清凝集试验。为使防治措施有更好的针对性，还需做种型鉴定。如病料被污染或含菌极少时，可将病料用生理盐水稀释5～10倍，健康豚鼠腹腔内注射0.1～0.3mL/只。如果病料腐败时，可接种于豚鼠的股内侧皮下。接种后4～8周，将豚鼠扑杀，从肝、脾分离培养布鲁氏菌。2.4.2血清学诊断2.4.2.1虎红平板凝集试验（RBPT）（见GB/T18646）2.4.2.2全乳环状试验(MRT)（见GB/T18646）2.4.2.3试管凝集试验(SAT)（见GB/T18646）2.4.2.4补体结合试验(CFT)（见GB/T18646）2.5结果判定县级以上动物防疫监督机构负责布病诊断结果的判定。2.5.1具有2.1、2.2和2.3时，判定为疑似疫情。2.5.2符合2.5.1，且2.4.1.1或2.4.1.2阳性时，判定为患病动物。2.5.3未免疫动物的结果判定如下：2.5.3.12.4.2.1或2.4.2.2阳性时，判定为疑似患病动物。2.5.3.22.4.1.2或2.4.2.3或2.4.2.4阳性时，判定为患病动物。2.5.3.3符合2.5.3.1但2.4.2.3或2.4.2.4阴性时，30天后应重新采样检测，2.4.2.1或2.4.2.3或2.4.2.4阳性的判定为患病动物。布鲁氏菌病虎红平板凝集试验操作规程1范围本标准规定了布鲁氏菌病虎红平板凝集试验的操作技术要求本标准适用于各种家畜布鲁氏菌病筛选试验。2试剂和材料2.1试剂2.1.1抗原和血清：按照说明书使用，使用前置室温（22℃~25℃）30min~60min，并充分摇匀。2.2材料2.2.1玻璃板：约45cm×30cm，要求洁净，划成32个方格，横数8个格，纵数4个格，每格4×4cm，每一格下再划1cm宽的小格，用于填写血清号。2.2.2牙签：扁形圆头或类似小棒。2.2.3移液器：能够吸取30uL。2.3被检血清2.3.1按照常规方法采血分离血清。血清必须新鲜，无明显蛋白凝固、无溶血和无腐败气味。2.3.2运送和保存血清样品防治血清冻结和受热，以免影响凝集价。试验前血清须置室温（22℃~25℃）30min~60min。3操作方法3.1将玻璃板上各格标上被检血清号，然后加入相应的被检血清30uL。3.2在被检血清上滴加30uL虎红平板凝集抗原，使其相混合。轻微摇动，室温下4min内观察结果，同时作阴、阳血清对照。3.3每次操作以不超过20份血清样品为宜，以免样品干燥而不易观察结果。4结果判定每份血清在规定时间内出现凝集反应者判为阳性，不出现凝集反应者判为阴性；其必须在阴性血清对照不出现凝集，阳性血清对照出现凝集时，试验成立，方可判定。