AOAC985.29食品中总膳食纤维测定中文翻译

45.4.07AOAC官方的方法985.29食品中总膳食纤维酶-重量法1985年首次发布的准则1986年最终准则AOAC–AACC方法法典采用AOAC分析法*A.原理干燥食品的替换测验部分，脂肪提取，如果含10％的脂肪，是通过淀粉酶（热稳定a-淀粉酶），然后用朊酶和淀粉葡萄糖苷酶进行酶促化，以除去蛋白质和淀粉。（在分析混合饮食时，随时提取之前确定总膳食纤维脂肪。）添加四倍体积的乙醇以便沉淀可溶性膳食纤维。过滤总残留量，用78％乙醇，95％乙醇和丙酮冲洗。干燥后，称量残留物。对一份进行蛋白质分析，另一份在525°C灰化，测定灰分。总膳食纤维=残留物的重量-重量（蛋白质+灰分）。B.设备(a)多孔坩埚——孔隙度，第2号（耐热号，32940，粗，ASTM40-60m；或者第36060号布赫呐，烧结盘，派热克斯玻璃，60mL,ASTM40-60m）。彻底清洗，525℃加热1小时，浸泡，然后水冲洗。给风干坩埚加约0.5克硅藻土，在130℃干燥至恒重（≥1小时）1h).冷却，存储在干燥器中备用。(b)真空源——真空泵或吸气器，配备直列双真空瓶，以防止出现水阻塞时混合。(c)真空炉——70°C.可选用，105℃的空气烘箱。(d)干燥器。(e)高温烘炉。(f)水浴槽。——（1）煮沸（2）恒温——可调至60℃，无论是多站振动筛还是多站磁力搅拌器，酶水解期间给消化瓶（煮解瓶）提供恒力搅拌。(g)烧杯——高烧杯，400或600毫升。(h)天平——分析天平，灵敏度到0.1毫克。(i)氢离子计——pH7和pH4缓冲液定型。C.试剂(a)95%乙醇.——v/v.工业级。(b)78%乙醇.——1升量瓶中放置207毫升H2O。用95%乙醇稀释至刻度。必要时用95％乙醇再次稀释至刻度。混合。一个容量的H2O用四倍容量的95％的乙醇混合，也会能给出78％乙醇的最终浓度。(c)丙酮(d)磷酸盐缓冲剂——0.08M,pH6.0.在约700毫升水中，溶解1.400克磷酸氢二钠，无水二钠（Na2HPO4）（或1.753克二水合物）和9.68克磷酸二氢钠一水合物（磷酸二氢钠×H2O）（或10.94克二水合物）。用H2O稀释到1毫升。用氢离子计测PH值。(e)α-淀粉酶(热稳定的)。——淀粉酶.淀粉酶.（1）冷藏根据尼尔森/SOMOGYI与可溶性淀粉作为基质还原糖。——10000+1000单位/mL（1单位被定义为当pH为6.5，温度为40℃时，释放1微摩尔（μmol）还原糖/分钟所需的酶的量。）（2）根据Ceralpha方法，使用对硝基苯基-单糖作为基质，在热稳定阿尔法-葡萄糖苷酶存在的情况下。——3000+300（Ceralpha）单位/ml（当pH为6.5，温度为40℃时，每分钟需要1单位酶释放1微摩尔对硝基苯基。）(f)蛋白酶——冷藏。(1)酪蛋白测定法。——300-400单位/毫升。（1蛋白酶单位被定义为水解所需的酶的量（在TCA中溶解）1微摩尔（μmol）酪氨酸当量/分钟，源于可溶的酪蛋白，pH值为0.8，温度40°C)；7-15单位/毫克（1单位将水解酪蛋白以产生色素（颜色）相当于1.0微摩尔（μmol）酪氨酸/分钟，pH值为7.5，温度37°C。）由福林-乔高特溶剂着色。（2)偶氮-酪蛋白测定法。——300–400单位/mL【1单位内肽酶活力被定义为水解所需的酶的量（在TCA中溶解）1微摩尔酪氨酸当量/分钟，源于可容的酪蛋白，pH值为8.0，温度40°C。】(g)淀粉转葡糖苷酶——冷藏。(1)偶氮/葡萄糖测定法。——2000–3300单位/mL（1单位酶活力被定义为释放1微摩尔(μmol)葡萄糖/分钟，pH值为4.5，温度为40°C所需的酶的量）。(2)PNPBM（对硝基苯基β-麦芽糖苷）法。——130-200单位/ml（1个酶活力单位（1PNP单位）定义为：40°C，有过量β-萄糖苷酶存在下，每分钟从对硝基苯基-β-麦芽糖苷释放1微摩尔（μmol）对硝基苯基所需要的酶量。发现严重受干扰活力污染的唯一酶是淀粉葡糖苷酶。来自商业源的热稳定α-淀粉酶和蛋白酶，通常是不含干扰酶。在蛋白酶制剂已被检测到的β-葡聚糖酶水平较低，但在水平远低于会干扰总膳食纤维的分析。淀粉葡萄糖苷酶制剂中的主要污染物被证明是一种内切纤维素酶，其结果是由大麦和燕麦混合连接的β-葡聚糖的内-解聚作用造成的，这个结果是根据估计这个膳食纤维成分得到的。内纤维素酶（β-葡聚糖酶）与淀粉葡萄糖苷酶的污染可以容易地检测到。或者，可以从很多家公司获得含有所有3酶素（预测试的）试剂盒。氢氧化钠溶液。——0.275M.在1升量瓶中的约700毫升的H2O中溶解11.00g的NaOH。用H2O稀释至刻度。(i)盐酸溶液。——0.325M.用H2O稀释已知滴度的原液，如325毫升1M盐酸，至1升的量。(j)硅藻土。——酸洗的。表985.29测试样品的酶素纯度_________________________________________________________________________________________测试样品测试活力测试部分（重量，g）预期恢复率，％柑桔属果树果胶果胶酶0.195–100Stractan(落叶松胶质)半纤维素酶0.195–100小麦淀粉淀粉酶1.00–1玉米淀粉淀粉酶1.00–2酪蛋白蛋白酶0.30–2?Β-葡聚糖（大麦胶质）aΒ-葡聚糖酶0.195–100_________________________________________________________________________________________A.Sigma化工有限公司Megazyme国际责任公司D）酵素纯度为了确保在此过程中所使用的酶中不存在不合需要的酶活力，在整个过程中，运用表985.29中列出的材料，每次很多酶素要改变；或以6个月最大间隔，以确保酶没有退化。E.测试部分准备测定干试验样品的总膳食纤维。取均质试验样品，在70℃真空烘箱中干燥过夜，干燥机中冷却，干研磨样品过0.3-0.5毫米网筛。如果测试样品不能加热，先冷冻干燥，再粉碎。如果是高脂肪含量（10％），不能正常磨碎，先用石油醚脱脂（25ml份/g测试样品，脱脂三次），再研磨。记录下由于脱脂造成的重量损失，并作出适当修正，以达到测定中发现的最终的膳食纤维%含量。在加盖的干燥器中储存干磨碎的测试样品，直到进行分析。F.测定整个过程中与测试部分同时运行空白对照组，以测量从试剂到残留的任何影响。准确称取双份试样各1g，精确到0.1mg，置于400毫升高型烧杯中。测试部分的重量不应相差20毫克。在每个烧杯中加入50mLPH值6.0的磷酸盐缓冲液，控制PH值，根据需要，可调整到6.0±0.2。添加0.1mL的淀粉酶溶液。铝箔纸覆盖烧杯，置于沸水中煮15分钟。每隔5分钟轻轻晃动。当水浴器中的烧杯中的数目难以使烧杯中的含量达到95°-100℃的内部温度时，增加培养时间时。使用温度计，并计算时间，15分钟，温度95℃-100℃。在水浴中反应持续30分钟。冷却溶液至室温。添加10毫升的0.275mol的氢氧化钠溶液，调整pH值7.5±0.2。.添加5毫克蛋白酶。蛋白酶粘在刮勺上，所以它可以较好地制备酶溶液（1毫升磷酸盐缓冲液中50毫克），使用前，用移液管给每个样品添加0.1毫升。用铝箔纸覆盖烧杯。60℃培育30分钟，连续搅拌。冷却。添加10毫升0.325mol氯化氢溶液。测量PH值，根据需要，可滴加酸。最终的pH值应为4.0-4.6。添加0.3ml淀粉葡萄糖苷酶，盖上铝箔，60℃培育30分钟，连续搅拌。添加280毫升的95%乙醇，预热至60℃（加热前测量体积）。室温下放置60分钟，形成沉淀。称量含有0.1毫克硅藻土的坩埚，用洗瓶中的78％的乙醇润湿并重新将硅藻土平铺于坩埚中。用吸管将硅藻土吸移到多孔玻璃板上，作为平垫。持续量化抽取酶解沉淀物并将其转移坩埚。用三分20毫升78％的乙醇，两份10毫升95％乙醇，两份10毫升丙酮依次洗涤残余物。一些产品中可能会形成胶质，困住液体。如果是这样的话，用刮勺刺破表面膜以改善过滤。计时过滤和洗涤时间，变化从0.1至6小时，平均每个样品0.5小时。整个过滤过程中，可以通过小心地间歇吸滤，避免长时间的过滤。将含有残留的坩埚70℃真空烘箱或105℃的空气烘箱中，过夜干燥。干燥器中冷却，称重以精确到0.1毫克。减去坩埚和硅藻土的重量来计算残渣质量。以N×6.25为换算系数，计算两份中其中一份的蛋白质含量。除非已知蛋白质中的N含量。另一份在525°C灰化5小时。干燥器中冷却，称重以精确到0.1毫克。减去坩埚和硅藻土重量来计算灰分质量。G.计算空白测定：B=空白,mg=重量残渣-PB-AB重量残渣=残渣重量的平均数（mg）用于双份样品空白测定；PB和AB=蛋白质和灰分的重量（mg），本别在第一和第二个空白残渣中测定。按照以下计算TDF：TDF,%=【重量残渣-P-A-B)/测试样品重量】X100重量残渣=重量的平均数（mg）用于双份样品空白测定；P和A=蛋白质和灰分的重量（mg），分别在第一和第二个检验残渣中测定;测试样品重量=所取两份测试部分重量的平均数（mg）。参考书目：JAOAC68,677(1985);69,259(1986)。修订：2003年6月______________________________________________________*被采用作为法典作为规定用法，用于特定食品中对于食物总膳食纤维的重力/酶消解的测定。