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洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第1页共6页名称：洁净室（区）沉降菌测试标准操作规程共6页编号：SOP-QC-002版本号：00起草:日期：变更原因：审核:日期：批准:日期：执行日期：颁发部门：质量保证部分发部门：质量总监、质量保证部、质量控制部目的制定标准的洁净室（区）沉降菌的测试方法，指导沉降菌的测试工作。范围适用于洁净室（区）沉降菌的测定和验证。责任QC微生物室检验员负责洁净室（区）沉降菌的测试，QC主管和QA部门负责对测试的数据进行统计分析。程序1.定义1.1.菌落：微生物培养后，由一个或几个微生物繁殖而形成的微生物集落，简称CFU。1.2.沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数。1.3.动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态设备在指定的方式下进行，并且有指定的人员按照规范操作的状态。2.测试方法2.1.测试过程2.1.1.设备和培养基：恒温培养箱、购买预灌装TSA平皿或者自制TSA平皿。2.2.测试条件2.2.1.洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18~26℃，相对湿度在45%~65%为宜）。2.2.2.风速、压差应在合格范围内。洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第2页共6页2.2.3.动态测试。2.3.测试方法2.3.1.将准备好的培养皿按采样点要求放置或放在沉降架上（约1.0m）。将采样台面取样位置或采样辅助设施表面消毒，打开培养皿，将培养皿盖置于已消毒位置，将培养皿置于培养皿盖上，使培养基表面充分暴露后，将培养皿盖盖上后倒置。2.3.2.在每一只培养皿上标记好具体的取样位置及取样日期，将所有培养皿在QC微生物室进行培养观察。2.4.培养观察计数2.4.1.全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，在20~25℃培养箱中培养3天，30~35℃培养箱中培养2天后观察计数。2.4.2.每批培养基应有阴性对照试验，检验培养基本身是否污染。可每次选定2只培养皿作对照培养。2.5.计算2.5.1.平均菌落数M=M1＋M2＋…MNNM1＝1号培养皿菌落数M2＝2号培养皿菌落数Mn＝n号培养皿菌落数n＝培养皿总数2.5.2.结果判定2.5.2.1.最终结果采用平均值。但每个碟的菌落数亦不得多于标准规定。2.5.2.2.如有一个碟的菌落数超过标准规定，平均却符合规定，也以不合格论。2.5.2.3.静态测试时，若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。2.6.注意事项2.6.1.若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第3页共6页2.6.2.采取一切措施防止人为因素对样本的污染。2.6.3.由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。2.6.4.采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。2.6.5.对于沉降菌测试，符合最少采样点数时，还必须符合最小培养皿数。最少采样点数与最少培养皿见附表。2.7.日常监控2.7.1.对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限和警戒限，以保证洁净室（区）的微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并做趋势分析。静态动态监控都可以采用此方法。2.7.2.对于沉降菌的取样频次。如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次：2.7.2.1.连续超过纠偏限和警戒限2.7.2.2.停工时间比预计长2.7.2.3.关键区域内发现污染存在2.7.2.4.在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修2.7.2.5.日常操作记录反映出倾向性的数据2.7.2.6.消毒规程的改变2.7.2.7.引起生物污染的事故等2.7.2.8.当生产设备有重大维修或增加设备时2.7.2.9.当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时2.8.洁净车间采样点分布图详见《洁净区洁净度监控管理规程》。2.9.微生物实验室采样点分布图详见《微生物实验室环境测试规程》。相关文件和记录序号文件/记录名称文件/记录编号备注1沉降菌测试记录SOP-QC-002a-00洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第4页共6页2洁净区洁净度监控管理规程SMP-QA-0153微生物实验室环境测试规程SMP-QA-031变更/修订记录：原版本生效日期本次变更/修订的原因、依据及详细变更内容附图：最少采样点数目面积m2洁净度级别A级C级D级洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第5页共6页102~322≥10～20422≥20～40822≥40～1001642≥100～20040103≥200～40080206≥400～10001604013≥1000～200040010032≥200080020063注：对于A级的单向流洁净室（区），包括A级工作台，面积指的是送风口的表面积。对于C级以上的非单向流洁净室（区），面积指的是指房间面积。洁净室（区）沉降菌监测标准操作规程（文件编码：SOP-QC-002版本号:00）第6页共6页沉降菌测试记录编号：SOP-QC-002a-00测试人：测试日期：测试时间：测试依据：测试级别：级生化培养箱型号：编号：________________有效期至：__________________霉菌培养箱型号：_____________编号：________________有效期至：__________________培养基批号：来源：有效期至：__________________培养条件：测试标准：标准规定级别标准警戒限纠偏限复核人：复核日期：培养结果测试区域培养皿号平均结论12阴性对照