感受态细胞制备流程

感受态细胞的制备：1.以1:100的比例吸取过夜菌液（250ul）加入25mlLB液体培养基中，37℃，200r/min振荡培养2-3h至OD600达到0.5左右（OD600范围0.4-0.6）。2.将25ml菌液移至预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置30min，使培养物冷却到0℃。3.于4℃，以4000rpm离心10min，回收细胞。4.倒出培养液，将管倒置1min（于滤纸/吸水纸上），使最后残留的痕量培养液流尽。5.每50ml菌液用10ml预冷的0.1mol/L的CaCl2，重悬每份沉淀，放置于冰浴上30min。6.于4℃，以4000rpm离心10min，回收细胞。7.倒出培养液，将管倒置1min（于滤纸/吸水纸上），使最后残留的痕量培养液流尽。8.每50ml初始培养物用2ml用冰预冷的0.1mol/L的CaCl2（含15%甘油）重悬每份细胞沉淀。9.在冰上将细胞分装成小份，100ul/份，防御-70℃冻存。10.如果当天要用，最好将制好的感受态细胞在4℃放置4h后再用，效果较好。制备好的感受态细胞在4℃放置24-48h内使用，不影响效果。感受态细胞制备流程图：过夜菌250ul加入25mlLB液体培养基37℃，200r/min振荡培养2-3hOD600测达0.5左右转移至50ml聚丙烯离心管冰上放置30min培养物到0℃4℃，4000rpm，离心10min回收细胞弃培养液倒置放置1min加入5ml0.1mol/LCaCl2悬浮细胞沉淀，冰上放30min4℃，4000rpm，离心10min回收细胞弃培养液倒置放置1min加入1ml预冷0.1mol/LCaCl2（含15%甘油）悬浮细胞沉淀冰上分装，10ul/份70℃冻存（当天实验4℃放置4h，最多可放置48h）