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微生物基础知识2015年课程重要性：微生物与药品生产的关系（1）药物的制造研究（2）保证和控制药品质量药品定义：预防、治疗、调节人体机能的特殊商品，其质量好坏直接影响人的健康和安全。确保：安全、有效、质量可控（被污染的药品按假药论处）口服固体制剂微生物限度标准：细菌数应≤1000cfu/g霉菌及酵母菌数应≤100cfu/g大肠埃希菌每1g应不得检出活螨应不得检出。主要内容第一章微生物学的基本知识第二章药品微生物特征第三章药品微生物的污染及其预防第一章微生物学的基本知识一、基本概念：微生物（microorganism,microbe):存在于自然界的一群体型细小、结构简单、肉眼看不见，必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物。二、微生物的特征1.个体小，作用大2.分布广，种类多3.繁殖快、代谢强4.易变异三、细菌、真菌、病毒知识概论细菌：细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核单细胞微生物。（1）、球菌：多数球菌直径在1um左右，外观呈球形或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。（2）杆菌：形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。（3）螺形菌：菌体弯曲，弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构2.细菌的繁殖繁殖方式：一般以简单的二分裂法进行无性繁殖。细菌生长速度很快，一般细菌约20min分裂一次。大肠埃希菌20-30分钟繁殖一代；结核杆菌18-20小时繁殖一代。若按此速度计算，一个细胞经7h可繁殖到约200万个，10h后可达10亿以上3.细菌与人类的关系※有利方面：产生各种不同的代谢产物，如抗生素、维生素、氨基酸、酶及酶抑制剂、甾体化合物、乳酸菌制剂等。※有害方面：细菌的致病性。常见的病原菌有：金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、绿脓杆菌、结核杆菌、炭疽杆菌等。（二）真菌是一类真核细胞型微生物，包括各种霉菌、酵母菌、大型真菌。1.霉菌（1）霉菌是丝状真菌的统称。常见的有：毛霉、根霉、曲霉、青霉等根霉青霉甜：喜爱在含糖的培养基上生长温：最适生长温度为22～30℃湿：通常需要较高的湿度慢：培养3～7天才能见到茂盛的菌落（2）霉菌的培养特性特点酸：最适pH为4.0～6.0氧：霉菌一般为需氧菌2.酵母菌是一类单细胞真菌。代表菌有：啤酒酵母。（1）形态特征：圆形、卵圆形、长形等各形态。（2）生长条件：喜含糖量较高和偏酸的环境。3.大型真菌因菌体大而得名包括各种食用菌和药用菌，如蘑菇、木耳、灵芝、猴头菌、茯苓等。4.真菌与人类的关系※有利方面：制造食品和药物，酵母用于酿酒，香菇、草菇供食用，灵芝、冬虫夏草供药用，霉菌发酵生产抗生素、酶制剂等※有害方面：引起物品霉变、致病性致病性真菌：白色念珠菌、发癣菌、表皮癣菌和小孢霉等真菌毒素：如鹅膏素、黄曲霉素（三）病毒：属于非细胞型微生物。1、大小与形态：个体极小，其测量单位为纳米（nm）形态有球形、杆型、砖型、蝌蚪状等。3、病毒的繁殖专性寄生于细胞内，依赖宿主细胞进行自身核酸和蛋白质的合成来繁殖后代。这种独特的繁殖方式叫做复制。4、病毒与人类的关系人类病毒的种类很多，感染的范围很广。常见的病毒有：流感病毒、脑炎病毒、狂犬病毒、乙型肝炎病毒等。四、微生物的生长条件（1）营养物质（2）温度（3）pH（4）氧气及其他气体食物，维持生长，繁殖后代（1）营养物质：碳源、氮源、无机盐、生长因子及水分。构成细胞物质，提供能量♦单糖（葡萄糖、果糖）♦双糖（蔗糖、乳糖）♦多糖（淀粉、糊精）a.碳源（C）：b.氮源（N）：构成细胞物质，不提供能量♦有机氮源（玉米浆、花生饼粉）♦无机氮源（尿素、NH3、N2）c.无机盐（矿质元素）：构成细胞物质，调节胞内渗透压、pH值、电位，可供做能源硫、磷、钾、镁、钙等d.生长因子：生长中不可缺少的微量有机物♦维生素♦氨基酸♦嘌呤和嘧啶e.水分：保证胞内生理生化反应正常进行，维持渗透压和控制温度（2）温度：生存温度：0~75℃（冰点~失活）最适生长温度：绝大多数细菌为37℃，接近自然宿主的体温。绝大多数真菌为22～30℃。（3）pH：环境中氢离子的浓度，过酸过碱都不适宜生长大多数细菌最适生长pH范围很窄，约为7.2～7.6，真菌喜爱酸性环境，最适PH为4.0～6.0。（4）气体：根据微生物对氧的需求可分为三类：好氧性微生物（大多数真菌）厌氧性微生物（双歧杆菌）兼性厌氧微生物（大肠杆菌）（六）微生物的代谢：¤分解代谢¤合成代谢¤产能代谢¤耗能代谢在合成代谢中，微生物除了合成核酸、蛋白质、多糖等自身必须的成分外，还合成了一些比较复杂的特殊产物，这些产物的致病作用和药用性质值得人们重视。（1）热原：革兰氏阴性菌在生长中能产生一种耐热物质，将其注入人体或动物体内，可以引起发热反应，这种物质被称为热原。（2）毒素：微生物产生的对动植物细胞有毒杀作用的代谢产物称为毒素。外毒素：分泌到细胞外的毒素，如破伤风毒素、黄曲霉素。内毒素：革兰氏阴性菌的细胞壁内成分，在细胞裂解时释放。热原是内毒素主要起毒性作用的部分。（一）药品生境特征1、药品成分2、药品酸碱度3、药品渗透压4、药品水分5、其他第二章药品微生物特征1、药品成分：种类繁多、剂型多样，成分各异营养丰富：葡萄糖注射液、血浆、糖浆微生物的代谢产物：氨基酸、酶制剂含无机盐：钾剂、钙剂、硫酸镁2、药品酸碱度：适合微生物生长、繁殖适合细菌生长：滴眼液适合真菌生长：氨基酸口服液3、药品渗透压：适合微生物生长、繁殖适合细菌生长：滴眼液、生理盐水适合真菌生长：50%硫酸镁、口服糖浆4、药品水分：适合微生物生长、繁殖固体制剂：含水量少，较少污染液体制剂：含水量高、营养丰富时易受污染，并迅速繁殖中草药：易污染霉菌，霉变5、其他：抑菌、杀菌药可能存在活微生物抗生素的抑菌浓度不高或有耐药菌消毒剂的配制浓度不够或者使用时间过长（二）药品污染的常见微生物及其危害※药品中污染的微生物有：细菌、霉菌、酵母菌等，其中大量是与致病菌和产毒菌有关的菌属，如：大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌、青霉、黄曲霉等。※由于原辅料、生产工艺不同，不同类型的药品污染的微生物有所不同，污染的微生物越多，药品变质、失效的可能性越大，甚至对人体健康造成危害：感染、发热、过敏、中毒等。（三）药品受微生物污染后的质量变化※物理性状的改变：花片、黏连、沉淀※化学成分的变化：产气、变色、浑浊※疗效的变化：减效、失效、刺激、毒害第三章药品微生物污染与控制污染：当一个产品中存在有不需要的物质时，它即受到污染。一、微生物对药品的污染二、导致药品微生物污染的六要素1、空气2、水3、表面4、人5、原辅料6、包装材料1.空气空气中充满尘埃和水滴，这是微生物的载体。空气中微生物多种多样：细菌、真菌、病毒、支原体、立克次氏体等。防止药品微生物污染的措施1.控制空气中微生物的污染建立洁净厂房，利用空气过滤系统除去空气中大量的尘粒和微生物。为满足无菌生产的要求，洁净区还应采取一些有效的清洁消毒方法，如空间喷洒消毒剂，甲醛熏蒸等。2.水水中含有一定量的可溶性有机物和盐类，为微生物的生长和繁殖提供了必须的养料。自然条件下几乎各种水体都有微生物存在：原虫、藻类、细菌、真菌等2.控制水中微生物的污染在生产过程中，不仅要严格控制作为生产原料的水，而且要控制好清洗设备及各种表面的水的质量。制药用水：纯化水、注射用水与灭菌注射用水纯化水：可作为配制普通药物制剂的溶剂或试验用水，不得用于注射剂的配制。注射用水：为配制注射剂用的溶剂。灭菌注射用水：主要用于注射用灭菌粉末的溶剂或注射液的稀释剂。3.表面：由于空气中的湿度，所有表面都包有一层含水的薄膜，这层薄膜上的水分和养料为微生物的滋生提供了条件。3.控制各种表面上微生物的污染凡与药品直接接触的设备或各种表面，都应光洁、平整、易清洗、耐腐蚀，不与药品发生化学变化或吸附作用。并应制定相应的SOP，以便于对其进行清洁、消毒或灭菌。4.人：人可以说是最大的一个污染源，人的呼吸、毛发、皮肤、衣物每分钟都散发着大量的微生物。4.控制人带来的微生物污染定期检查药品生产人员的健康状况，建立健康档案培养药品生产人员的个人卫生习惯工作服、卫生、洁净作业建立一套进入洁净区人员必须遵守的制度。程序、动作、监控5.原辅料原辅料本身质量不好，或在运输、贮存、检查取样、配料过程中污染了微生物，这些微生物则会直接带到药品中去。5.控制原辅料中微生物的污染药品生产使用的原辅料应按卫生标准检验，只有合格的才能使用。原辅料保存时要注意环境卫生，以免受到污染。原辅料进入洁净区前应脱去外包装。6.包装材料一些直接接触药品的包装材料如果被微生物污染，则会导致药品一并被污染。6.控制包装材料中微生物的污染选择药品的一些直接包装材料时应以能清洁或可以消毒或可以耐受必要的清洁过程为基本条件。对于无菌产品所使用的直接包装容器，还应可接受灭菌和除热原处理。药品生产洁净室（区）的空气洁净度按我国《药品生产质量管理规范》（2010版）规定分为四个等级：洁净度级别尘粒最大允许数（个/m3）微生物最大允许数≥0.5μm≥5μm浮游菌（cfu/m3）沉降菌（cfu/皿）A级3,5202011B级3,52029105C级352000290010050D级352000029000200100《药品生产质量管理规范》讨论稿附录1：无菌药品无菌药品生产所需的洁净区可分为以下4个级别：A级高风险操作区，如：灌装区、放置胶塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的区域及无菌装配或连接操作的区域。通常用层流操作台（罩）来维持该区的环境状态。层流系统在其工作区域必须均匀送风，风速为0.36-0.54m/s（指导值）。应有数据证明层流的状态并须验证。在密闭的隔离操作器或手套箱内，可使用单向流或较低的风速。B级指无菌配制和灌装等高风险操作A级区所处的背景区域。C级和D级指生产无菌药品过程中重要程度较低的洁净操作区。以上各级别空气悬浮粒子的标准规定如下表：悬浮粒子最大允许数/立方米静态动态(3)洁净度级别≥0.5μm≥5μm(2)≥0.5μm≥5μmA级(1)352020352020B级3520293520002900C级3520002900352000029000D级352000029000不作规定不作规定洁净区微生物监测的动态标准(a)如下：表面微生物级别浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu/4小时(2)接触碟（55mm）cfu/碟5指手套cfu/手套A级1111B级10555C级1005025－D级20010050－注：(1)表中各数值均为平均值。(2)单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。每只脏手可携带40万细菌；刚洗过的手，每平方厘米亦可检验出3200个细菌；人身体其他部位的皮肤表面，也携带着大量细菌，每1平方厘米面积的皮肤表面大约含有1-10万个细菌！据统计：（1）、发尘量洁净室内的发尘量，来自设备的可考虑通过局部排风排除，不流入室内；产品，材料等在运送过程中的发尘与人体发尘量相比，一般极小，可忽略；由于金属半壁（彩钢夹心板）的应用来自建筑表面的发尘也很少，一般占10%以下，发尘主要来自人，占90%左右。在人的发尘量上，由于服装材料和样式的改进，发尘绝对量也不断减少。A、材质：棉质发尘量最大，以下依次为棉、的确良、去静电纯涤纶、尼龙。B、样式：大挂式发尘量最大，上下分装型次之，全罩型最少；C、活动：动作时的发尘量一般达到静止时间3-7倍；D、清洗：用溶剂洗涤的发尘量降至用一般水清洗的五分之一。室内维护结构表面发尘量，以地面为准，大约相应8平方米地面时的表面发尘量与一个静止的人的发尘量相当。2、发菌量工作人员产生的污染：1）皮肤：人类通常每四天完成一次皮肤的完全脱换，人类每分钟脱落约1000片皮肤（平