RNA条带的分析

一．RNA条带分析：要知道RNA电泳的理想带型是：1.完整的RNA琼脂糖电泳会有三条带，某些试剂盒可能会有两条带（没有最下面的5S条带）。2.上面两条带应该最亮，分别代表28S和18SrRNA，且第一条带（28S）亮度应为第二条（18S)亮度的约2倍。最下面一条带最淡，为5S条带。3.如果你发现最下面一条带很亮而上两条带很淡甚至没有，那就说明你的RNA发生了严重的降解。只能重新提取了。4.但如果仅仅是为了检测RNA的质量，没有必要进行如此麻烦的实验，用普通的琼脂糖胶就可以了。5.一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰）6.电泳的目的在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNAsmear的完整性。我们认为RNA的质量是好。二.检测RNA溶液的吸光度核酸分子中含有碱基使核酸在260nm下有最大吸收。紫外吸收是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质，含有嘌呤和嘧啶的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。1.280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。2.一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。a．当R1.82时，说明RNA中蛋白或者其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是2.2的）。b当R1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定要不要使用这份RNA（不同的实验对RNA质量的要求不同）。c．当R2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。三．生物体内一般含三种主要的RNA：核糖体RNA（rRNA）、信使RNA（mRNA）、转运RNA(tRNA)，其中rRNA含量最多,提取组织总RNA所得最多的就是rRNA。真核生物中含有5S、5.8S、18S、28S,原核生物中有5S、16S、23S；而植物组织中一般较多的为5S、18S、28S5S、18S、28S分别具有120、1900和4700个核苷酸。四．RNA含量测定蛋白质由于含芳香族氨基酸，因此也能吸收紫外光，通常蛋白质在280nm波长有特异吸收。因此核酸在A260及A260、A280测定的比值（A260/A280）可以反映样品中核酸的含量及纯度。RNA在A260/A280的比值在2.0以上；DNA在A260/A280的比值为1.8左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。DNA浓度(g/l)=A260×50g/ml×稀释倍数RNA浓度(g/l)=A260×40g/ml×稀释倍数根据DNA或RNA浓度计算DNA或RNA总量(g)，即DNA或RNA浓度(g/l)×总体积(l)。