高良姜对乙醇所致大鼠急性肝损伤的影响中药学院本科生毕业课题基金申请书

项目编号：中药学院本科生毕业课题基金申请书项目名称高良姜对乙醇所致小鼠肝损伤作用的实验研究申请人姓名苏鹤桂学号2006038068所在班级06药学电话[phone]电子邮箱[e-mail]指导教师周园电话39358085申请日期2009年06月04日广州中医药大学中药学院二OO九年五月2说明1.学生申请毕业课题基金资助，均须填写《中药学院本科生毕业课题基金申请书》。2.表格填写必须根据学院的项目招标公告和项目指南的要求认真填写。3.指导教师必须为中药学院在职教工，并保证确有时间和精力在查阅资料、设计课题、实验操作、分析结果与撰写论文等环节对学生给予全程指导，并签署意见。4.项目申请人须为中药学院三年级各专业在读本科生。3研究项目项目名称高良姜对乙醇所致小鼠肝损伤作用的实验研究学科名称药理申请金额500元起止时间2009年10月至2009年12月项目申请人姓名苏鹤桂学号2006038068专业06药学性别男电话[phone]指导老师姓名周园职称讲师电话39358085性别女单位中药学院药理教研室[e-mail]内容简介(200~300字)急性酒精中毒可造成机体损伤，其中肝脏损伤尤为显著。其机制可能是，乙醇代谢过程中产生的乙醛、NADH及H2O2等有害物质造成膜系统脂质过氧化损伤。分子生物学研究表明，高良姜可明显降低自由基生成，对自由基生成的抑制率达96．99％，并推测高良姜中主要的抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山柰素－4－甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物。故而本实验以高良姜为抗氧化剂，观察对急性酒精中毒小鼠肝脏的保护作用，为高良姜的临床应用提供试验依据。本课题设计主要针对高良姜对乙醇所致小鼠肝损伤的影响通过高良姜对小鼠醉酒时间、醒酒时间、死亡率的影响、高良姜对小鼠肝细胞的影响，高良姜对小鼠的乙醇、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）及甘油三酯（TG）含量，初步探讨其对肝的损伤，以明确高良姜药理作用的新方面，为高良姜的临床应用提供一定的理论和实验依据。4立论依据（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析、主要参考文献）项目的研究意义酒精性肝损伤早期一般无特异性症状和体征，随着病情的继续发展，继而出现一些消化系统和肝病的指征。如未采取有效的措施，病情将继续恶化加重，逐渐会出现酒精性肝炎、肝纤维化、以及发生肝硬化。我们之前对高良姜的研究发现，其具有良好的解酒效果，现代药理研究亦发现高良姜具有抗氧化作用，提示其可能对肝损伤具一定的保护作用。高良姜平和，不伤脾胃，副作用少，寻求到一条绿色、安全、有效、廉价的路，为以后中药治病找到一条指明灯。它发挥中医药治疗肝损伤的优势，日趋重要，是一类安全、有效、价廉的治疗肝损伤的药物。然而高良姜对酒精性肝损伤作用仍未可知，能否在治疗酒精性肝损伤上发挥理想的治疗效果成了实验的关键。我们利用小鼠的酒精性肝损伤的模型，初步探讨其对酒精性肝损伤的影响及其机制，可以为高良姜用于临床上治疗酒精性肝损伤疾病提供一定的实验依据和理论指导。。国内外研究现状分析（一）酒精性肝损伤研究状况[1]肝损伤病因酒精性肝损伤是因摄入酒精过度致使肝脏中的乙醇（酒精）和乙醛含量大幅升高，最后使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死的一种酒精性肝病。。[2]症状酒精性肝损伤的临床表现多样，症状繁多，如乏力、食欲不振、恶心呕吐和体重下降等，也可有严重症状如肝性脑病、肾功能衰竭和上消化道大出血等。常见发热和上腹部不适、黄疸，有时出现白细胞明显升高，伴有不同程度慢性肝炎征象（蜘蛛痣、肝掌等）和肝脏异常重大。[3]治疗近20年来，几种药物被用于治疗酒精性肝炎和肝硬化，它们均作用于酒精性肝损伤病理生理学的几个关键步骤。一些药物作用于高代谢状态，降低耗氧量，预防缺氧，减少组织损伤；抗炎药物作用于酒精性肝炎的白细胞，降低局部巨噬细胞（枯否细胞）的活性以及侵入肝内的炎症细胞的活性；枯否细胞内的氧化应激可以诱导肿瘤坏死因子（TNF）的生成，进而导致肝脏产生炎症和细胞凋亡。氧化应激不仅能刺激产生细胞因子，还能通过脂质过氧化促进肝细胞损伤。因此抗氧化剂主要用于酒精性肝损伤的长期治疗。高良姜研究状况[1]来源本品为姜科植物高良姜AlpiniaofficinarumHance的干燥根茎。夏末秋初采挖，除去须根及残留的鳞片，洗净，切段，晒干。5[2]化学成分高良姜的化学成分为：根茎含挥发油0．5％～1．5％，其中主要成分是：姜黄素等二苯基庚烷类化合物，1，8-桉叶素和桂皮酸甲酯，丁香油酚、蒎烯、毕澄茄烯等。还含黄酮类化合物：高良姜素，槲皮素，山柰酚，山柰素，异鼠李素，槲皮素-5-甲醚，高良姜素-3-甲醚，还可能含有鼠李柠檬素及7-羟基-3，5-二甲氧基黄酮。又含挥发油，内有：汇报烯，荜澄茄烯，桂皮酸甲酯。根尚含β-谷甾醇-β-葡萄糖苷，豆甾醇葡萄糖苷,菜油甾醇葡萄糖苷。[3]高良姜药理作用：1抗氧化作用高良姜提取物有较强的抗脂质过氧化作用，其中二苯基庚烷类化合物抗氧化效果显著，对自由基生成的抑制率达96．99％。Lee等[1]研究发现，高良姜提取液能减轻氧化剂H202对V79—4细胞繁殖的抑制作用，用高良姜提取液(100ug／mL)处理过的细胞比未处理过的成活率提高了48％，并推测高良姜中主要的抗氧化活性物质是黄酮醇类化合物，如山奈素一4一甲醚、高良姜素以及二芳基庚烷类化合物。2降血糖作用Akhtar[2]等的研究表明，高良姜提取物具有明显的降血糖作用。研究人员在正常雄性新西兰家兔的降血糖实验中，发现口服高良姜粉末3g／kg时能明显降低血糖，甲醇提取液和水提取液的降血糖作用更明显，当口服剂量为4g／kg时，8h血糖显著降低，推测其降血糖作用可能是通过促进体内胰腺分泌胰岛素而实现的。3抗促癌作用Moon[3]等报道高良姜素能有效降低甲基亚硝基脲，(MNU)对小鼠肺细胞染色体的致畸作用，高良姜提取物能抑制7，12-二甲基苯并蒽引起的小鼠细胞畸变作用，抑制率为57．1％。陈南岳[4]等研究了高良姜对蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC)抑制剂存在下对鼻咽癌细胞生长的影响。PKC抑制剂staurosp0rine(sT)或sphingosine(SS)，能抑制人低分化鼻咽癌细胞CNE一2Z的生长，高良姜本身不影响CNE一2Z细胞的生长，但明显协同ss抑制CNE一2Z细胞生长，提示高良姜本身可能也参与了改变某些与PKC激活途径有关的环节(如钙离子、作用底物、膜脂代谢等。高良姜的甲醇提取物对TPA诱发水肿的抑制率为70％，提取物对DMBA—TPA二阶段致癌过程有抑制作用。4促进渗透性沈琦[5]等研究了高良姜醇提物、化合物(高良姜油和桉叶素)对5一氟尿嘧啶(5一Fu)透皮吸收影响，研究结果表明，高良姜醇提物有一定的促渗作用，而高良姜油和桉叶素具有极强的促渗作用。1％和3％的高良姜油能使5一Fu渗透分别提高110.21倍和108．26倍，2％的桉叶素也可提高67．54倍。5对消化系统作用Borrelli[6]等通过小鼠镇痛和家鸽止呕药效指标模型，对高良姜不同化学部位(即水提液、醇提液、挥发油、水提乙酸乙酯萃取物、醇提乙酸乙酯萃取物)进行了筛选，结果显示各部位均具有镇痛、止呕双重药理作用，而且醇提物的活性强于水提物。陈佃[7]等研究发现高良姜水提物和醇提物对硫酸铜致家鸽呕吐，均能明显延长其呕吐潜伏期和减少呕吐次数，醇提物活性强于水提物。高良姜还具有很好的抗腹泻作用，对于蓖麻油引起的小鼠腹泻，高良姜醇提物和水提物都能明显减少其腹泻次数[8]。对番泻叶引起的小鼠腹泻，高良姜水提物能明显减少6其腹泻次数。胃肠运动受神经和体液因素共同调节。其中胆碱能神经对平滑肌运动起重要作用，主要是通过释放乙酰胆碱(Ach)，刺激肠壁和肌问神经丛M受体，通过细胞膜信号传导系统，使胞内ca2+升高，引起平滑肌收缩。研究表明，高良姜黄酮类具有明显的胃肠解痉作用，可抑制Ach致平滑肌张力升高，因而具有止呕抗腹泻作用[9]。6抗菌作用高良姜醇提物在10mg／mL和1mg／mL时对白色念珠菌、威克海姆原藻和啤酒酵母都有很强的抑制作用，而且高良姜醇提物对晚疫病菌(phytophthorainfestans)能达到100％的抑制。同时，高良姜醇提物具有抑制引起龋齿的链球菌活性的作用[10]。与抗生素类药物引起的副作用和抗药性相比，高良姜可能是研究开发新的抗菌药物的理想资源，但目前有关研究较少，并且还仅仅处于对粗提物的研究阶段，为明确其中的活性成分，有待进一步深入研究。7抗溃疡作用吴清和[11]等探讨了高良姜超临界萃取物对应激性胃溃疡模型大鼠溃疡形成及血清表皮生长因子(EGF)和白介素一2(IL一2)的影响。研究小组以束缚一水浸应激性胃溃疡大鼠为对象，观察了高良姜萃取物对大鼠溃疡指数及血清EGF和IL一2水平的影响。研究结果表明，高良姜萃取物能降低束缚一水浸应激型溃疡大鼠的溃疡指数，并可使该模型大鼠血清IL一2和EGF水平明显回升接近正常水平。研究人员认为高良姜萃取物能提高应激大鼠的TH1免疫应答，增强细胞免疫功能，可能是高良姜抗溃疡机制的一个重要方面。8抗凝血和抗血小板聚集作用刘应柯[12]等的研究结果表明，高良姜水提物100％浓度即有明显抗凝作用，150％浓度可完全抗凝，与250ug／mL肝素抗凝作用相同，明显强于高良姜水提物，其抗凝机理可能与高良姜具有抑制血小板聚集，阻碍凝血活酶的形成等因素有关。该研究工作的实验还证实，高良姜水提物保护缺血缺氧心肌的SOD活性，降低MDA含量的作用与高良姜相似。高良姜醚提物和水提物能剂量依赖性地预防电刺激颈动脉引起的血栓，药理作用涉及抗凝血和抗血小板聚集两个方面，可用于预防和阻止休克机体发生弥漫性血管内凝血(DIC)。高良姜醚提物和水提物均有抗缺氧作用，机理可能分别为减慢机体耗氧速度和提高机体在缺氧条件下的氧利用能力[13]。9其他方面(1)保鲜作用。Cheah[14]等发现l0％高良姜提取物能有效廷缓生牛肉中的脂质氧化，降低硫代巴比妥酸值，功效相当于0.1％的维生素E或0.02％的丁羟基甲苯(BHT)；在熟牛肉中，其功效则强于维生素E和丁羟基甲苯。而且高良姜提取物对热表现出很好的稳定性。(2)防霉作用。谢小梅[15]等观察高良姜、草果的防霉作用。方法：测定高良姜、草果挥发油对6种霉菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果：高良姜、草果挥发油有明显的杭霉菌作用。结论：高良姜、草果是高效、安全、价廉的天然防霉药物，可广泛用于食物、中药材及其制品等的防霉。含高良姜的中草药涂液对瓜果的保鲜效果明显，已有实际应用。如应用于柑桔保鲜，按1000kg柑桔配用高良姜千品1kg。将高良姜干品切碎加水l0kg熬煮45min，得汁液7kg，然后加入漂白虫胶1.5kg和水3～5kg的溶解液混匀，趁热过滤，冷却后涂果。果实涂抹药液后摆放阴凉通风处，待果面药液晾干即可装入容器。室内贮藏90d后，果实外形饱满，色艳味醇，好果率达92％。7[4]临床应用高良姜可用于治疗霍乱吐泻、脚气欲吐、心脾冷痛（按：即胃痛）、养脾温胃，去冷消痰，宽胸下气、脾虚寒疟（寒多热少，不思饮食）、双目突然红痛、风牙痛肿。主要参考文献[1]LeeSE，HwangHJ，ttaJS，eta1．Screeningofmedicinalplantextractsforantioxidantactivity[J]．LifeScience，2003，73：167—179．[2]AkhtarMS，KhanMA，MalikMT．HypoglycaemicactivityofAlpiniagalangarhizomeanditsextractsinrabbits[J]．Fitoterapia，2002，73：623．628．[3]MoonYH，SuJS，WilliamWA．Anti—genotoxicityofgalanginasacancerchemopreventiveagent[J]．candidateMutationRes．，2001，488：135．1