1专题1基因工程1.1DNA重组技术的基本工具一、教学目标1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新二、教学重点和难点1、教学重点DNA重组技术所需的三种基本工具的作用2、教学难点基因工程载体需要具备的条件三、教学过程1、基因工程的原理:基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外和,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在水平上进行设计和施工的,因此又叫做。2、限制性核酸内切酶(1)切割DNA的工具是,又称。(2)这类酶在生物体内能将外来的DNA切断,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保持细胞原有的遗传信息。(3)由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性核酸内切酶(简称限制酶)。(4)DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段,末端通常有两种形式,即和。例1、下列关于限制酶的说法正确的是()A、限制酶广泛存在于各种生物中,但微生物中很少B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键3、DNA连接酶——“分子缝合针”根据DNA连接酶的来源不同,可以将它分为两类:一类是从大肠杆菌中分离得到的,称为coliEDNA连接酶。coliEDNA连接酶只能将连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。另一类是从分离出来的,称为T4DNA连接酶。T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的,又可以“缝合”双链DNA片段的,但连接之间的效率比较低。例2、下图为DNA分子的切割和连接过程。(1)EcoRI是一种酶,其识别序列是,切割位点是与之间的键。切割结果产生的DNA片段末端形式为。(2)不同来源DNA片段结合,在这里需要的酶应是连接酶,此酶的作用是在与之间形成键,而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是。4、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”(1)基因操作过程中使用载体两个目的:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。(2)现在通常使用的载体是,它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA,有的细菌中有一个,有的细菌中有多个。(3)质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以复制,也可整合细菌拟核DNA中,随着拟核DNA的复制而复制。(4)其他载体还有和等。(5)作为载体必须具备以下条件:能够在宿主细胞中复制并稳定地保存,具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;具有某些标记基因,便于进行筛选,如对抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。例3、以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段,分析回答问题。(1)其中①和是由一种限制酶切割形成的末端,两者要重组成一个DNA分子,所用DNA连接酶通常是。(2)和是由另一种限制酶切割形成的末端,两者要形成重组DNA片段,所用DNA连接酶通常是。四、课堂巩固(一)选择题21、关于限制酶的说法中,正确的是()A、限制酶是一种酶,只识别GAATTC碱基序列B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键C.限制酶一般不切割自身的DNA分子,只切割外源DNAD.限制酶只存在于原核生物中2、DNA连接酶催化的反应是()A.DNA复制时母链与子链之间形成氢键B.黏性末端碱基之间形成氢键C.两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接D.A、B、C都不正确分析C还可能有平末端3、作为基因的运输工具——载体,必须具备的条件及理由是()A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因B、具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达C.具有某些标记基因,以便为目的基因的表达提供条件D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存,以便于进行筛选4、质粒是基因工程最常见的载体,它的主要特点是()①能自主复制②不能自主复制③结构很小④是蛋白质⑤是环状RNA⑥是环状DNA⑦能“友好”地“借居”A、①③⑤⑦B、②④⑥C.①③⑥⑦D.②③⑥⑦5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为()A、目的基因上有标记B、质粒具有某些标记基因C、重组质粒能够复制D.以上都不正确6、关于质粒的叙述正确的是()A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子B、质粒是唯一的载体C、重组质粒是目的基因D、质粒可在宿主外单独复制7、基因工程中可用作载体的是()①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核A、①②③B、①②④C.②③④D、①③④8、下列关于基因工程中所选用的质粒的说法,错误的是()A、不能没有标记基因B、是小型链状的DNA分子C、能够自我复制D.可与目的基因重组9、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是()A、①②B、①③C、①④D.②③10、要使目的基因与对应的载体重组,所需的两种酶是()(1)限制酶(2)连接酶(3)解旋酶(4)还原酶A、(1)(2)(3)B、(1)(2)(4)C、(1)(2)D、(1)(3)(二)填空题:11、把目的基因与质粒DNA缝合时,中间的碱基对靠连接起来,而两链上的磷酸、脱氧核糖则在的作用下连接起来。质粒是基因操作中经常用的。12、基因工程又叫做技术或技术。这种技术是在生物体外,通过对DNA分子进行人工和,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出人类所需要的基因产物。13、治疗糖尿病用的胰岛素,在过去主要是从动物(如猪、牛)体获得的。自20世纪70年代基因工程发展起来以后,人们开始采用高新技术生产胰岛素,其操作过程如图1—5所示:(1)图中的质粒存在于细菌细胞中,从其分子结构看,可确定它是一种。(2)请根据碱基互补配对的原则判断,在连接酶的作用下,甲与乙能否拼接起来,并说明理由。(3)细菌丙进行分裂后,其中被拼接的质粒也由一个变成两个,两个变成四个……质粒的这种增加方式在遗传学上称为。目的基因通过表达后,能使细菌产生胰岛素,这是因为基因具有控制合成的功能。1.2基因工程的基本操作程序[教学目标]1、简述基因工程原理及基本操作程序。2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。[教学重点和难点]1、教学重点基因工程基本操作程序的四个步骤。2、教学难点(1)从基因文库中获取目的基因。(2)利用PCR技术扩增目的基因。[教学过程]一、目的基因的获取:1.目的基因:符合人们需要的,编码蛋白质的。2.获取目的基因的方法(1)从基因文库中获取目的基因①基因文库:将含有某种生物不同基因的许多,导人受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。基因组文库:含有一种生物的基因②种类cDNA文库:含有一种生物的基因3③目的基因的获取根据基因的有关信息:基因的序列、基因在上的位置、基因的产物mRNA、基因的产物蛋白质等特性获取目的基因。(2)利用PCR技术扩增目的基因。①PCR:是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术。②条件:已知目的基因的序列。③过程:目的基因DNA受热形成,与结合,然后在______的作用下进行延伸形成DNA。④方式:指数扩增=2n(n为扩增循环的次数)(3)人工合成法:基因较小,核苷酸序列已知,可以人工合成。例1下列获取目的基因的方法中需要模板链的是()①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A.①②③④B.①②③C.②③④D.②③二、基因表达载体的构建1.表达载体的组成:目的基因+++标记基因等。2.启动子:位于基因的,它是结合的部位,驱动基因转录产生mRNA。3.终止子:位于基因的,终止。4.表达载体的功能:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且给下一代;使目的基因____和发挥作用。5.标记基因:受体细胞是否含有目的基因。6.不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同,基因表达载体的构建上也会有所差别。例2科学家在培育抗虫棉时,经过了许多复杂的过程和不懈的努力,才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中,然后导入棉花的受精卵中,结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端),导人棉花受精卵,长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端),导入棉花受精卵,结果成长的植株,有了抗虫能力。由以上过程推知,作为目的基因的运载体应具备的结构是()A.目的基因、启动子B.目的基因、终止子C.目的基因、启动子、终止子D.目的基因、启动子、终止子、标记基因三、将目的基因导入受体细胞(一)转化:目的基因进人受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和的过程。(二)方法1.将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌转化法①农杆菌特点:易感染植物和裸子植物,对___________植物没有感染力;Ti质粒的可转移至受体细胞,并整合到受体细胞的染色体上。②转化:目的基因插人进入农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(2)基因枪法基因枪法:是单子叶植物中常用的一种基因转化方法,但是成本较高。(3)花粉管通道法花粉管通道法:这是我国科学家独创的一种方法,是一种十分简便经济的方法。(我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的)2.将目的基因导入动物细胞(1)方法:注射技术。(2)操作程序:目的基因表达载体→取卵(受精卵)→显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的_________________________内发育→新性状动物。3.将目的基因导人微生物细胞(1)原核生物特点:繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。(2)转化:处理细胞→细胞→表达载体与感受态细胞混合→_________细胞吸收DNA分子。例3采用基因工程的方法培育抗虫棉,下列导入目的基因的做法正确的是()①将毒素蛋白注射到棉受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列,注射到棉受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列,与质粒重组,导人细菌,用该细菌感染棉的体细胞,再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列,与细菌质粒重组,注射到棉的子房并进入受精卵A、①②B、②③C、③④D、①④四、目的基因的检测与鉴定1.检测(1)方法:标记了的、抗原抗体杂交。(2)内容①检测转基因生物染色体的DNA是否插入。②检测目的基因是否转录。③检测目的基因是否翻译成。2.鉴定:鉴定、抗病鉴定等。例4下图是将人的生长激素基因导人细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图,所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因,质粒A导人细菌B后,其上的基因能得到表达。请回答下列问题:______________________________________________。(1)目前把重组质粒导入细菌细胞时,效率还不高,导入完成后得到的细菌,实际上有的根本没有导入质粒,有的导入的是普通质粒A,只有少数导入的是重组质粒。以下步骤可鉴别得到的细菌是否导人了质粒A或重组质粒:将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上,能够生长的就导人了质粒A或重组质粒,反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是______________________________________________。4(2)若把通过鉴定证明导人了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养,会发生的现象是_______________________________。原因是:______________________________________(3)导人细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么?____________________________________________________________________________课堂巩固:一、选择题:1、下列属于获取目的基因的方法的是()①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取③从受体细胞中提取④利用PCR技术⑤利用DNA转录