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2010山东35．（8分）[生物—现代生物科技专题]胚胎工程是一项综合性的动物繁育技术，可在畜牧业和制药业等领域发挥重要作用。下图是通过胚胎工程培育试管牛的过程。（1）从良种母牛采集的卵母细胞，都需要进行体外培养，其目的是；从良种公牛采集的精子需后才能进行受精作用。（2）在体外培养精卵时，除了给予一定量的O2以维持细胞呼吸外，还需要提供气体以维持。（3）图中过程A称为，它在胚胎工程中的意义在于。（4）研制能够产生人类白细胞介素的牛乳腺生物反应器，需将目的基因导入牛受精卵，最常用的导入方法是；获得转基因母牛后，如果即说明目的基因已经表达。（4）PCR（或：多聚酶链式反应，聚合酶链式反应）答案：35．（8分）[生物—现代生物科技专题]（1）使卵母细胞成熟（或：使卵母细胞获得受精能力）；获能（2）CO2；培养液（基）的pH。（3）胚胎移植；提高优良母畜的繁殖率。（4）显微注射法；牛奶中含有人类白细胞介素（或：牛乳腺细胞已合成人类白细胞介素）2010福建32．[生物—现代生物科技专题](10分)红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病由于天然EP0来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(rhEPO）期间要生产流程如右图（1）图中①所指的是技术。（2）图中②所指的物质是，③所指的物质是。（3）培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞严物积累对细胞自身造成危害，应定期更换。（4）检测rhEPO外活性需用抗rhEPO单克隆抗体。分泌单克隆抗体的细胞，可由rhEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成答案：（1）PCR（2）mRNArhEPO（3）培养液（4）杂交瘤解析：本题主要以人红细胞生成素生产为材料来考查基因工程和细胞工程中动物细胞培养技术、制备单克隆抗体技术。获取目的基因的方法有四种（从基因文库中获取、用PCR扩增技术、用反转录法、用化学合成法）由图以核DNA为模板获得目的基因的方法可知①为PCR技术。进行反转录的模板是mRNA。由题意可知重组CHO细胞适用于生产重组人红细胞生成素(rhEPO），所以重组CHO细胞能过表达出重组人红细胞生成素(rhEPO）或者红细胞生成素。培养动物细胞是用液体培养基——即培养液，细胞从培养液中吸收营养，并同时向培养液中排放代谢废物，当代谢废物积累时会危害细胞，因此要不断更新培养液。制备单克隆抗体是让淋巴B细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，然后由杂交瘤细胞来分泌抗体。2010江苏27．（8分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后，分别含有个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶酶切位点越多，质粒的热稳定性越。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是。（4）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止。（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。答案：（1）0、2（2）高（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞（7）蔗糖为唯一含碳营养物质2010陕西40．[生物——选修模块3：现代生物科技专题](15分)请回答：（1）植物微型繁殖技术属于植物组织培养的范畴。该技术可以保持品种的，繁殖种苗的速度。离体的叶肉细胞在适宜的条件下培养，最终能够形成完整的植株，说明该叶肉细胞具有该植物的全部。(2)把试管苗转接到新的培养基上时，需要在超净工作台上进行，其原因是避免的污染。（3）微型繁殖过程中，适宜浓度的生长素单独使用可诱导试管苗，而与配比适宜时可促进芽的增殖。若要抑制试管苗的生长，促使愈伤组织产生和生长，需尊使用的生长调节剂是(脱落酸、2，4-D)。（4）将某植物试管苗培养在含不同浓度蔗糖的培养基上一段时间后，单株鲜重和光合作用强度的变化如图。据图分析，随着培养基中蔗糖浓度的增加，光合作用强度的变化趋势是，单株鲜重的变化趋势是。据图判断，培养基中不含蔗糖时，试管苗光合作用产生的有机物的量(能、不能)满足自身最佳生长的需要。(5)据图推测，若要在诱导试管苗生根的过程中提高其光合作用能力，应(降低，增加)培养基中蔗糖浓度，以便提高试管苗的自养能力。答案：40．[生物——选修模块3：现代生物科技专题]（15分）（1）遗传特性快遗传信息（2）微生物（3）生根细胞分裂素2,4-D（4）逐渐减小先增加后下降不能（5）降低2010海南26．（18分）［选修模块3：现代生物科技专题］请回答胚胎工程和基因工程方面的问题：（1）应用胚胎工程技术可以培育出“试管牛”。试管牛的培育需经过体外受精、＿＿＿＿、＿＿＿＿＿以及在母体中发育和产出等过程。（2）在“试管牛”的培育过程中，要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其＿＿＿＿＿。另外，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和＿＿＿＿＿。（3）通常奶牛每次排出一枚卵母细胞，采用激素处理可使其一次排出多枚卵母细胞，常使用的激素是＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（4）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是＿＿＿＿＿＿＿、基因表达载体的构建、＿＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿＿。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、＿＿＿＿、＿＿＿＿、＿＿＿＿和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺细胞）。【解析】胚胎工程的一般步骤是体外受精，经过一定的刺激，使受精卵发育成囊胚，再经胚胎移植移植到雌性动物体内，以形成个体，在受精时，需使精子获能后，才能完成受精作用，培养的卵母细胞需要发育至减数第二次分裂的中期，该时期在显微镜下可观察到次级卵母细胞和第一极体；利用基因工程可以获得转基因牛，基因工程的一般步骤是获取目的基因、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定等；而获取的目的基因需要加工修饰，在前面加上较强的启动子，后面缀上终止子，以及运载体本身携带的标记基因。把重组的DNA导入动物的受精卵一般用的是显微注射法。【答案】（1）早期胚胎培养胚胎移植（2）获能第一极体（3）促性腺激素（4）获取目的基因将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定人干扰素基因终止子标记基因显微注射法受精卵