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专题1基因工程基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过和转基因技术，赋予生物以，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在上进行设计和施工的，又叫做。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——（1）来源：主要是从中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种的核苷酸序列，并且使每一条链中部位的两个核苷酸之间的断开，因此具有（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：末端和末端。2.“分子缝合针”——(1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合键。②区别：E·coliDNA连接酶来源于，只能将双链DNA片段互补的之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合，但连接平末端的之间的效率。3.“分子运输车”——（1）载体具备的条件：①②③（2）最常用的载体是。（3）其它载体：(二)基因工程的基本操作程序第一步：第二步：（1）启动子：是识别和结合的部位，能驱动基因，最终获得所需的。（2）终止子：位于基因的。（3）标记基因的作用：。第三步：1.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是，其次还有和等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是。此方法的受体细胞多是。将目的基因导入微生物细胞：先用处理细胞，使其成为，再将重组DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。第四步：1.首先要检测，方法是采用。2.其次还要检测，方法是采用。3.最后检测，进行。4.有时还需进行的鉴定。练习1.图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有、、三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是。（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是2.基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选．已知限制酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-．根据图示判断下列操作正确的是（）A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割答案：（1）目的基因―载体连接物载体--载体连接物目的基因--目的基因连接物分离纯化（2）载体--载体连接物；目的基因--载体连接物、载体--载体连接物（3）启动子mRNA（4）EcoRI和BamHI解析：（1）连接酶连接黏性末端时，是不区分质粒还是目的基因的，所以可产生目的基因-载体连接物、载体-载体连接物、目的基因-目的基因连接物。要想得到分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。（2）在含四环素的培养基中，因为酶切位点破坏四环素抗性基因tctR，所以只有载体-载体连接产物才可能存在。含青霉素的培养基中，酶切位点没有破坏青霉素抗性基因ampR，只要含有目的基因-载体连接物、载体-载体连接物都可以生存。（4）同时选用两种酶之后目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的黏性末端不相同，就不会发生任意链接