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一种从黄芩中提取黄芩苷的新方法张国富，叶贺林，何殿，白琳，刘玲玲（1.中国化学与环境科学学院，兰州城市学院，兰州730070。2.中国药物化学研究所，药剂学院，兰州大学，兰州730000。收稿日期：2010年4月28号，接受日期：2010年5月17号，发布日期：2010年7月30号。）摘要：这项研究是探讨一种从黄芩中提取黄芩苷的新方法。与传统的方法之一相比，液-液双相连续萃取是一种新的方法，并呈现出提取总黄酮含量高的优势。这是一种比传统提取方法更有效的，操作简便，重现性良好的新型提取方法。关键词：黄芩，液-液双相连续萃取。1.简介黄芩是药用植物黄芩的干燥根茎。它被广泛用于在中国传统医药，清热，干湿润，治热病和祛除毒素，凉血和激活体内循环，还可以安胎。黄芩苷（5,6,7三羟基·7一O-葡萄糖苷酸）是黄芩苷的一种。此外，目前出现的方法主要适用于干燥的黄芩根的有效成分黄酮的商业应用。它的主要有效成分是黄酮类化合物，其中有黄芩，黄芩素，黄芩苷，汉黄芩素等。目前，黄芩苷的提取方法有水提取酸沉淀，超声波，超滤，酸醇提取物的沉淀，微波提取等。其中最常用的方法是水提取酸沉淀。但是，这种方法存在提取不完整和杂质遗留较多的缺点。在本文中，使用比较常用的水提取方法液-液双相连续萃取方法，用于提取有效成分黄芩。2.实验2.1仪器精密的酸度计（上海雷磁仪器厂）；旋转蒸发仪RE-52A（上海亚荣生化仪器厂）；SHZ—III循环水真空泵（河南省巩义适应域仪器厂）；1700UV分析仪（岛津）；BS2245电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）。2.2化学品标准黄芩苷；无水乙醇；磷酸盐；Na2HPO4·12H20；NaH2PO4·2H20；盐酸；乙酸；95%的分析醇。将黄芩的干燥根茎，粉碎通过60目筛，然后自己配制磷酸盐缓冲液。（用磷酸和磷酸氢二钠配制PH=2，3，4，5，6，7的磷酸缓冲液。）2.3黄芩苷标准曲线称取黄芩苷对照品10.29毫克干燥至恒重，加70％乙醇溶液超声溶解，定容至50毫升。测量液体黄芩苷对照品（0.2058毫克/毫升）0.5毫升，1.0毫升，1.5毫升，2.0毫升，2.5毫升，3.0毫升的精度，添加20毫升0.2mol/L盐酸，然后加70％乙醇25毫升，摇匀。用试剂作为空白对照，测量波长在276nm处的吸光度。绘制标准曲线，用吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标。回归方程为Y=0.0551X.0.0021，R2=0.9993（N=6）。表明黄芩苷在良好的线性范围4.116〜24.696mg/L（图1）。2.4提取原理2.4.1液-液双相连续萃取称取5克黄芩粉末，放入30mLpH值=2的磷酸盐缓冲液中煮沸。当冷却到约38oC，进入液液双相连续萃取装置中。添加醋酸乙酯回流顶部的1/3瓶管，一瓶沉浸在油浴约38℃。加热搅拌瓶B，进行乙酸乙酯回流（图2）。回流四小时后，使用旋转蒸发器回收乙酸乙酯，中药提取物备用。用同样的方法提取6组。2.4.2使用常用方法提取称取黄芩粉约5克，提取三次，第一次用10倍量的沸水煮2小时，第二次和第三次的时间分别用8倍的沸水煮2小时。每一小时倾倒合并煎液一次。加入2mol/L盐酸（8OoC）滤液调整pH值=2，保持温暖1小时，保持24小时。过滤和沉淀。用水洗涤至pH值=5.0，用70％乙醇洗涤至pH=7.0，低温干燥，最终得到产品。用同样的方法提取6组。2.5样品的测定添加70％的乙醇，加热溶解，然后30分钟超声溶解，加70％乙醇至100毫升。过滤，丢弃第一次滤液。吸取5.0ml的提取物，添加70％的乙醇至50毫升。吸取1ml提取物，添加20毫升0.2mol/L盐酸溶液。然后加70％乙醇至25毫升摇匀确定波长在276nm处的吸光度。2.6薄层色谱法检验黄芩苷的70%的乙醇溶液作为作为对照品溶液。一些样品使用液-液双相连续萃取的方法提取黄芩苷，而一般方法是用70%的乙醇处理样品，用薄层色谱法测试，用毛细管吸收上述溶液，然后分别拖放到同一聚酰胺薄膜，采取乙酸作为展开剂，扩展，去除，并且扩大，其次检查在紫外光(365nm)之下。图1黄芩苷的标准曲线图2液-液双相连续萃取装置表1两种提取方法提取黄芩苷量的对比3.结果和讨论3.1提取含量的比较其内容可以被定义为每克黄芩中黄芩苷的毫克数。列文方差同质化的测试结果为：F=4.794.P=0.0530.05，总体方差相等。取T=一8.148，DF=10，P=0.0000.05MN/ML，我们对一般方法和提液-液双相连续萃取两种方法的比较，这具有统计学意义（表1）。3.2薄层色谱分析结果TLC分析结果表明，两种方法提取的样品的色谱图，有在颜色相同的两个荧光斑点。4.结论上述结果表明，在我们采用新的提取方法，通过液-液双向法萃取获得了提取黄酮的特征反应，通过薄层色谱分析表明，这种方法可以提取黄酮类化合物如黄芩等。通过统计产品与服务解决方案分析两种提取方法之间的差异具有统计学意义。使用液-液双向的方法提取黄芩黄酮含量比通常我们采用的水提取多，它可以作为一种新的从黄芩中提取的有效成分更有效地较高的方法。