黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定

1实验七黄连中盐酸小檗碱的提取分离及鉴定黄连为毛茛科黄连属植物黄连（coptischinensisEraneh）、三角叶黄连（coptisdeltoidcaC．YchengetHsiao）或云连（coptiteetoidesC.Y.cheng）的干燥根茎。黄连具有清热燥湿、清心除烦，泻火解毒的功效。黄连的有效成分主要是生物碱，已分离出的主要生物碱有小檗碱（berberine）、掌叶防己碱（palmatine）、黄连碱（jatrorrhizine）等。其中小檗碱含量最高，可达10%左右，是以盐酸盐的状态存在于黄连中。小檗碱有很强的抗菌作用，已广泛地应用于临床，掌叶防己碱也作药用，其抗菌性能和小檗碱相似。[目的要求]1．学习和掌握水溶性生物碱的提取方法。2．学习和掌握生物碱的柱色谱分离方法。3．学习和掌握生物碱的化学检识及薄层色谱的鉴定方法。[实验原理]小檗碱为黄色针状结晶，mp为145℃，游离的小檗碱能缓缓溶于水（1：20）及乙醇中（1：100），易溶于热水及热醇，难溶于乙醚，石油醚、苯、三氯甲烷等有机溶剂，其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐。盐酸盐为l：500，枸橼酸盐1：125，酸性硫酸盐1：100，硫酸盐l：30，但在热水中都比较容易溶解。小檗碱常以季铵碱形式存在，碱性强（pka11.53），能溶于水中，其水溶液有三种互变形式。2N+OH-OOOCH3OCH3NOOOCH3OCH3OHNHCHOOOOCH3OCH3季铵式（红棕色）醇式（黄色）醛式（黄色）N+OOOCH3OCH3小檗碱（黄连素）掌叶防己碱又称巴马亭，为黄色结晶，溶于水、乙醇、几乎不溶于三氯甲烷、乙醚等有机溶剂。盐酸掌叶防已碱为黄色针状结晶，并有强烈的黄色荧光。易溶于热水或热乙醇，在冷水中的溶解度也比盐酸小檗碱大。N+H3COH3COOCH3OCH3掌叶防己碱本实验是利用小檗碱和掌叶防己碱的硫酸盐在水中溶解度大的性质，用硫酸水提取出来总生物碱，再利用其盐酸盐难溶于水及盐析作用，使生物碱盐析出，以除去水溶性杂质。再利用两种生物碱极性不同，采用柱色谱分离。[实验内容]一、提取分离3黄连粗粉50g加0.3％H2SO4500ml，浸渍20分钟煎煮30分钟，滤过药渣滤液加石灰乳调PH值至中性放置10分钟，抽滤滤液加HCl调PH2～3加滤液体积4～5％的NaCl，放置30分钟，抽滤沉淀滤液（主要含小檗碱、掌叶防己碱、黄连碱等生物碱）加200ml水加热至澄明趁热抽滤滤液放置、抽滤沉淀二、生物碱类检识1．化学检识：（1）丙酮加成反应：取样品0.05g，溶于50ml热水中，加入10％NaOH溶液2ml，混合均匀后，于水浴中加热至50℃，加入丙酮5ml，放置，即有柠檬黄色结晶析出。此反应可用于原小檗碱型季铵生物碱的鉴别。（2）漂白粉显色反应：小檗碱酸性水溶液中加漂白粉（或通入氯气），溶液即变樱红色。2．薄层色谱检识吸附剂：硅胶G对照品：盐酸小檗碱甲醇溶液样品：不同色带的甲醇溶液4展开剂：CHCl3-MeOH-冰HAc（7：1：2）检视：先在紫外灯光（365nm）下观察荧光，再喷改良碘化铋钾试剂。[实验说明及注意事项]1．以硫酸盐代替盐酸盐，可增加生物碱的浸出量。2．盐析最佳用量为4～5％。[思考题]1．根据小檗碱的性质，除用硫酸水溶液提取外，尚可用哪些提取方法？请设计一个提取工艺流程。2．掌握根据化合物结构及色谱条件推测不同化合物的Rf值的方法。在本实验色谱条件下，请比较小檗碱和掌叶防己碱极性及Rf值。3．查阅文献：黄连中总生物碱含量测定