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【选修一】复习归纳一、培养基的成分：1、培养基概念：给生物(植物、动物组织或细胞、细菌、真菌和病毒)的生长繁殖提供营养的液体或固体。2、微生物的培养基:营养成分包括①碳源（供碳元素的有机物或无机物）、②氮源（供氮元素的有机物或无机物）、③水、④无机盐、⑤生长因子（指有些微生物自身不能合成，而生长必需的一类微量的小分子有机物）二、微生物培养基的制作过程：①根据培养对象的类型确定配方②称量并装入三角瓶中③调节好PH值④灭菌⑤600C三角瓶中培养基倒入培养皿中凝固成平板，或倒入试管中搁置斜面。三、常见培养基的配方(选修1+选修3)1、细菌培养基:（1）成分:蛋白胨+酵母提取液+NaCl+水(一般要求中性偏碱的环境)（2）类型:①LB固体培养基（加琼脂或琼脂糖）a、培养皿中固体平板培养基：用于划线分离或稀释涂布分离微生物。b、试管固体斜面培养基：用于保存菌种）②LB液体培养基（不含琼脂）：常用于菌种的扩增繁殖或工业生产。③分离含脲酶的微生物培养基：尿素、葡萄糖、氯化钠、K2HPO4、酚红(作为指示剂）、琼脂糖(不含氮)、水（要点：只能以尿素作为唯一的氮源）2、真菌培养基:蔗糖+豆芽汁+无机盐(一般要求中性偏酸的环境)。若要培养酵母菌，则可只要葡萄糖溶液即可3、生产果酒：(1)苹果果酒：苹果汁、蔗糖（加入蔗糖的目的有：①有利于酵母菌的繁殖②能提高果酒的酒精浓度）(2)若生产葡萄酒：葡萄、蔗糖(无氧，并排出气泡CO2)4、生产果醋：果酒、水(醋杆菌吸附在锯末上、通入空气、测PH)5、生产泡菜：多种蔬菜均可、调味品、食糖、盐6、植物组织培养的培养基(MS培养基):水分、大量元素、微量元素、有机成分(如蔗糖、甘氨酸、肌醇等)。注意:①蔗糖:作为营养并维持渗透压②此时无植物激素和琼脂。(1)MS发芽培养基：MS培养基+BA溶液（多）+NAA溶液（少）+蔗糖+琼脂(2)MS生根培养基：MS培养基+NAA溶液+蔗糖+琼脂（注意：此时不加入BA溶液是因为生根时所需的细胞分裂素少，丛状苗本身可产生少量的细胞分裂素）【说明:BA（苄基腺嘌呤）是细胞分裂素类似物，NAA（萘乙酸）是生长素类似物。】(3)若在摇床上形成胚性细胞或通过培养特定植物细胞系生产次生代谢产物，则需用液体培养基）7、植物(幼苗)无土栽培:适宜浓度完全培养液(含植物生长必需的大量元素和微量元素)8、动物细胞培养液:成分类似动物细胞外液,包括水分、无机盐、葡萄糖、胎牛血清、滋养细胞(失去增殖能力的成纤维细胞)支持生长，胰岛素刺激，二氧化碳(维持PH值)恒温培养箱。通常加入抗生素用来抑制微生物生长。9、动物胚胎体外培养:配制一系列含有不同成分的培养液，用以培养不同发育时期的胚胎。只能对哺乳动物早期胚胎培养，比组织培养、细胞培养更困难。10、动物胚胎干细胞培养:培养皿底部要加饲养层细胞来抑制胚胎干细胞的分化，促进胚胎干细胞的分裂。饲养层细胞一般是胚胎成纤维细胞。四、微生物的无菌操作要领：（1）培养基要灭菌(高压蒸汽灭菌)（2）所用的器皿要灭菌（3）操作环境(超净台)和双手要消毒（4）菌种转移要在超净台中酒精灯的火焰旁进行（5）实验结束时，培养用过的培养基一定要经过高压蒸汽灭菌后才能倒掉。五、几种消毒或灭菌的方法：1、一般的培养基(耐高温)、器皿：高压蒸汽灭菌（1210C、1Kg/cm2、15min）2、培养基中含葡萄糖：为了防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2、900C、30min。3、尿素固体培养基:培养基经1210C下灭菌后，冷却至600C时，再将尿素溶液通过G6玻璃漏斗过滤加入。G6玻璃砂漏斗过滤在使用前也要在1210C下用纸包好灭菌。4、超净台灭菌:打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。5、双手用70%酒精擦拭消毒。6、无菌空气可以用通气管中塞上脱脂棉通入。7、制果酒的葡萄:用高锰酸钾溶液消毒8、植物组织培养时的外植体消毒：先在70%乙醇中浸泡30秒，再放入5%次氯酸钠中浸泡5分钟，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后在超净台中用无菌水清洗。若外植体是取自进行过无菌培养的幼苗，则外植体不需要上述的消毒过程。9、接种环灭菌：在酒精灯外焰处灼烧10、涂布器（即玻璃刮刀）灭菌：保存在70%乙醇中，使用时放在酒精灯火焰上，等到刮刀上的火焰熄灭。六、微生物的分离和计数问题：1、划线分离法（1）优点：操作方法简单（2）不足：菌落不容易分开，分离效果较差。（3）要领：①划线前都要灼烧接种环灭菌（第一次灭菌是为了消灭接种环上原有的微生物、后面在每一区划线之前灼烧是为了保证接种的菌种只能来自前一次划线的末端。②划线的第一区与最后一区不能相连。(4)说明：此方法不能用于计数。2、稀释涂布分离法：（1）优点：单菌落更易分开，且可用于对微生物间接计数（2）不足：操作复杂（3）要领：①将菌液稀释(10-4、10-5)，取0.1mL不同稀释度的菌液，加在培养基的固体表面，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行倒置培养。②每种稀释度涂三个平板。③通常以每个培养皿有20个以内的单菌落最为合适。（4）溶液中微生物数目的换算：平板上菌落平均数×稀释倍数×（溶液的体积除以0.1mL）七、微生物分离的意义：单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简单方法之一。八、选修1相关微生物:1、大肠杆菌:原核生物，革兰氏阴性、异养、兼性厌氧的肠道杆菌，二分裂方式增殖。2、含脲酶的细菌:把尿素水解成氨和CO2。3、黑曲霉和苹果青霉:真核生物，产生果胶酶，将果胶分解成半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯4、枯草杆菌:原核生物，产生ɑ-淀粉酶，该酶最适PH为5.5—7.5，最适温度50--750C。5、酵母菌:真核生物，异养、兼性厌氧型，无氧条件下利用糖类物质生产果酒。6、醋化醋杆菌:原核生物，异养、需氧型，有氧条件下利用将乙醇氧化成醋酸。7、乳酸菌(原核生物，厌氧型)、假丝酵母(真核生物):在无氧条件下，利用菜中的糖和其他有机物进行发酵，产生有机酸和醇类物质，也有少量HNO2。【练习】一、微生物的名称及培养的最适条件1、大肠杆菌培养的最适温度_____________2、有一些细菌含有_________，可通过降解尿素作为其生长的氮源。取土样时，从______________________的地方取。3、有些微生物，如______________________等都可用于生产果胶酶。4、α-淀粉酶可从______________提取。其作用的最适pH为_________，最适温度为____________5、制作果酒时，___________（微生物）在_________条件下进行发酵，该过程会产生___________6、制作果醋时，____________（微生物）在_________条件下，将_________氧化为___________。7、腌制泡菜时，是在_______条件下________________（微生物）利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，发酵产物有____________________等，其中也有少量的__________。二、写出下列器具或物品灭菌的方法1、LB液体培养基________________2、接种环________________3、无菌水________________4、玻璃刮刀_______________5、超净工作台_____________6、尿素固体培养基_________________7、外植体_________________,归纳：不同灭菌方法的适用对象1、高压蒸汽灭菌法_______________________________2、灼烧灭菌法___________________________________3、紫外线灭菌___________________________________4、滤过除菌_____________________________________三、判断下列操作是否需要在无菌环境下进行1、外植体接种入培养基______________炼苗__________2、倒平板_____________搁置斜面______________3、划线分离__________涂布分离________________4、果酒、果醋制作___________5、制备固定化酶柱____________6、泡菜的腌制________________四、有关物质的组成及鉴定等1、果胶起着_______________作用，是细胞壁的主要成分，由____________和_________组成。果胶可用___________鉴定，因为_______________。2、α-淀粉酶可将淀粉水解成_______，该产物在遇___________呈_________色。该产物在____________催化下水解成_____________，后者在______________催化下水解成葡萄糖。3、果酒发酵过程中，若_____________，则说明发酵停止。4、若要监控醋酸发酵的情况，可用______________检测流出液的pH。5、亚硝酸盐与对氨基苯甲酸发生重氮化反应，这一产物再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成_______________色产物，可用________________法定量测定。6、在加入_____的尿素培养基中，有脲酶的细菌菌落周围会观察到_______色的环状区域。五、有关培养基及成分1.LB培养基（基础培养基，用于细菌培养）配方----P21①LB液体培养基：成分_________________________,功能是_________________②LB固体培养基:成分________________________,功能是_________________③尿素固体培养基:成分___________________,功能_________________④醋化醋杆菌扩增培养基配方(成分P49)：__________________________________2.MS培养基（植物组织培养）---P60①MS发芽培养基:成分_____________________________,功能________________②MS生根培养基:成分____________________________,功能______________3.如何证明培养基上菌落来自菌种而不是培养基本身？答：用相同的培养基不接种菌种(也叫空白培养基)，在相同的条件下培养，以该培养基上是否有菌落为指标。