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1基因工程图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspI、BamHI、MboI、SmaI4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：（1）反转录法是基因工程中获得目的基因的常用方法，该方法以目的基因D的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得基因D。这两步都需要利用作为原料。该方法在提取模板RNA过程中要特别注意防止RNA的水解，试提出一种保护措施：。（2）图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由连接，而两条脱氧核苷酸链中配对的碱基之间通过连接。一条脱氧核苷酸链中相邻两个脱氧核苷酸之间通过连接。（3）限制酶BamHI切割DNA后形成的黏性末端是。同尾酶是指切割DNA分子后能产生相同黏性末端的限制酶，以上4种限制酶中属于同尾酶的是。（4）一个图1所示的DNA分子含有个游离的磷酸基团，经BamHI切割后增加个游离的磷酸基团。一个图2所示的质粒含有个游离的磷酸基团，经MboI切割后共有个游离的磷酸基团。（5）若图1中虚线方框内碱基对被T—A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d，用限制酶SmaI完全切割，其产物长度为。从杂合子中分离出图1及其相对应的DNA片段，用限制酶SmaI完全切割，产物中共有种不同长度的DNA片段。（6）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，能否使用MboI切割，原因是。能否使用MspI或SmaI4切割，原是。（7）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是。为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶，该酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？。若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越。（8）基因表达载体除了图2所示组成外，还有等（至少答两个）。2（9）将目的基因导入大肠杆菌细胞常采用法，使后者成为细胞，即处于易于吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。（10）为获得较纯净的农杆菌用于该项研究，可采用法对农杆菌进行接种培养。为筛选获得含有重组质粒的大肠杆菌时，实验人员首先将经转化处理过的大肠杆菌接种在含（抗生素的种类）的培养基中，然后用印影法将该培养基上的菌落按原来的方向印在含（抗生素的种类）培养基上，以筛选获得含重组质粒的细菌。在含抗生素B培养基中能生长繁殖，而不能在抗生素A培养基中生长繁殖的是导入了的大肠杆菌。由此可见，重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。据图分析含抗生素B培养基中含目的基因D的菌落有____个。从用途上归类，以上培养基属于培养基。图中所用培养基通常都使用法进行灭菌。（11）经检测：在上述导入了重组质粒的大肠杆菌菌株中，目的基因正常转录形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白质却并不具有生物活性，最可能的原因是_______。（12）为了获得大量的图1中的目的基因D，利用PCR扩增技术，PCR扩增反应需要在一定的缓冲液中加入，分别与两条模板链相结合的两种，其设计依据是，图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。引物长度一般在15-30个碱基之间，引物中碱基数量越多，则引物的特异性越。但过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于Taq酶进行反应。而引物过短则存在等问题。(13)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是，下面的表达式不能反映DNA聚合酶的功能，这是因为_____。（14）转基因生物可能引起生物安全性、食品安全性和环境安全性等问题。下列关于转基因生物安全性和伦理问题的分析，不合理的观点是。A．转基因生物进入自然界后不会与野生物种杂交而威胁其他生物的生存B．运用重组DNA技术可以将致病菌或病毒改造成威力巨大的生物武器C．植物花粉的存活时间有限，一般不会对其他生物造成危害D．转基因农作物若缺乏配套的种植技术，也会造成减产E．由于存在生殖隔离，转基因植物很难与其他植物杂交F．许多农作物花粉的传播距离有限，绝对不会造成其他生物的安全问题G．我国已经对转基因食品和转基因农产品强制实施了产品标识制度H．国际上大多数国家都在转基因食品标签上警示性注明可能的危害I．开展风险评估、预警跟踪和风险管理是保障转基因生物安全的前提J．目前对转基因生物安全性的争论主要集中在食用安全性和环境安全性上