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1高中生物选修三知识点♚专题1基因工程①基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品.基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,又叫做DNA重组技术.（一）基因工程的基本工具※1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的.（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性.（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端.※2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：☆①相同点：都缝合磷酸二酯键.②区别：E•coliDNA连接酶来源于T4噬菌体,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低.(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键.DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键.※3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存.②具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入.③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择.（2）最常用的载体是¬¬质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子.（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因.2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成.人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_.3.PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃,引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成.2第二步：基因表达载体的构建1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用.2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质.（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的尾端.（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因.第三步：将目的基因导入受体细胞1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程.2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是∷农杆菌转化法,其次还有∷基因枪法∷花粉管通道法等.将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是∷显微注射技术.此方法的受体细胞多是受精卵.将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少,最常用的原核细胞是大肠杆菌,其转化方法是：先用Ca2+处理细胞,使其成为感受态细胞,再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程.3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达.第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术.2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA,方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交.3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是从转基因生物中提取蛋白质,用相应的抗体进行抗原－抗体杂交.4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定.如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状.（三）基因工程的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质.2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物.3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用.（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造,或制造一种新的蛋白质,以满足人类3的生产和生活的需求.（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）转录翻译♚专题2细胞工程（一）植物细胞工程1.理论基础（原理）：细胞全能性全能性表达的难易程度：受精卵＞生殖细胞＞干细胞＞体细胞；植物细胞＞动物细胞2.植物组织培养技术（1）过程：离体的植物器官、组织或细胞―→愈伤组织―→试管苗―→植物体（2）用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产.（3）地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序.3.植物体细胞杂交技术（1）过程：（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等.化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂.（3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍.（二）动物细胞工程1.动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖.（2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养.（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁.细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制.（4）动物细胞培养需要满足以下条件①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理.通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染.此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害.②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等.通常需加入血清、血浆等天然成分.③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4.④气体环境：95%空气＋5%CO2.O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH.（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞.2.动物体细胞核移植技术和克隆动物（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比4较难）.（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大,容易操作；卵(母)细胞细胞质多,营养丰富.（3）体细胞核移植的大致过程是：（右图）核移植胚胎移植（4）体细胞核移植技术的应用：①加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育；②保护濒危物种,增大存活数量；③生产珍贵的医用蛋白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等.（5）体细胞核移植技术存在的问题：克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等.3.动物细胞融合（1）动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程.融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞.（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等.（3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段.（4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法植物体细胞杂交细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动,聚乙二醇等试剂诱导克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外,再加灭活的病毒诱导制备单克隆抗体的技术之一4.单克隆抗体（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体.从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差.（2）单克隆抗体的制备过程（3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖,又能产生专一的抗体.（4）单克隆抗体的优点：特异性强,灵敏度高,并能大量制备.（5）单克隆抗体的作用：①作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点.②用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”,也有少量用于治疗其它疾病.♚专题3胚胎工程（一）动物胚胎发育的基本过程1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术,如胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术.经过处理后获得的胚胎,还需移植到雌性动物体内生产后代,以满足人类的各种需求.53.1体内受精和早期胚胎发育一、精子和卵子的发生一精子的发生⒈场所：睾丸.⒉时期：从初情期开始,直到生殖机能衰退.⒊过程⑴精原细胞→多个精原细胞→初级精母细胞⑵初级精母细胞→次级精母细胞→精子细胞⑶精子细胞→精子(其中细胞核变为精子头部的主要部分；高尔基体发育为头部的顶体；中心体演变为精子的尾；线粒体形成线粒体鞘；其它物质浓缩为原生质滴)⒋⑴精子细胞变成精子过程中,主要发生了哪些变化?细胞核和线粒体为什么都保留了?线粒体为什么集中在尾的基部?⑵成熟精子：形似蝌蚪,由头、颈、尾三部分组成.精子大小与动物体型大小有关吗?二卵子的发生⒈场所：卵巢.⒉时期：胚胎在性别分化以后.⒊过程：卵原细胞→多个卵原细胞→初级卵母细胞胞→次级卵母细胞→卵细胞两次减数分裂分别是在何时、何地完成的?⒋卵泡主要由卵母细胞和卵泡细胞组成的,生长中的卵泡的卵母细胞与周围卵泡细胞突入卵泡腔形成卵丘.排卵：卵母细胞与周围透明带(由糖蛋白组成)、放射冠(透明带外的一层卵泡细胞)从卵泡中排出的过程.排卵后卵泡位置形成黄体.刚排出的卵是成熟的卵子吗?它在母体的什么部位与精子受精?三精子与卵细胞比较⒈相似点：最初阶段均进行有丝分裂,不断增加生殖原细胞的数量；经过两次减数分裂才能形成精子和卵子.⒉不同点：一个精原细胞→四个精子；一个卵原细胞→一个卵子；精子形状为蝌蚪状；卵子为球形；精子的形成从初情期开始,而多数哺乳动物卵子的形成和在卵巢内的贮备是胎儿出生前完成的.二、受精⒈概念:指精子和卵子结合形成合子(即受精卵)的过程.⒉标志:在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时.⒊场所:输卵管.⒋过程⑴受精前的准备阶段准备阶段1－精子获能：即精子必须在雌性动物生殖道内发生相应生理变化后,才能获得受精能力的现象.准备阶段2－卵子的准备：即卵子在输卵管内达到减数第二分裂中期时,才具备受精能力.⑵受精阶段：精、卵相遇→顶体反应(→顶体酶释放→溶解卵丘细胞(放射冠)→穿越放射冠→接触透明带→顶体酶溶解透明带→穿越透明带)→接触卵黄膜→产生透明带反应→形成第一道屏障→精子被微绒毛抱合→精子外膜与卵黄膜融合→精子进入卵→产生卵黄膜封闭作用→形成第二道屏障→形成雄原核→形成雌原核→雌雄原核发育、移动、接触、合并→形成受精卵.①受精阶段主要包括哪些环节?②什么是顶体反应?什么是透明带反应?什么是卵黄膜封闭作用?它们分别起什么作用?③什么是雌、雄原核?分别是什么时期形成的?四意义：维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定；对于生物的遗传和变异十分重要.一精子的获能⒉获能处理:在体外受精前,要对精子进行获能处理⑴培养法：将取自附睾的精子,放入人工配制的获能液中,培养一段时间精子就可获能.如啮齿动物、家兔和猪.⑵化学法：将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体6A23187溶液中,用化学药物诱导精子获能.如牛、羊.三受精：获能的精子和培养成熟的卵细胞在获能溶液或专用的受精溶液中完