高压液相色谱仪基本操作步骤

Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤、保养知识及注意事项一.开机：1.打开计算机,进入WindowsNT（或Windows2000）画面,并运行BootpServer程序。2.打开1100LC各模块电源。3.待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入的工作站画面。4.从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。5.把流动相放入溶剂瓶中。6.打开Purge阀。7.单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。8.设Flow：5ml/min，单击OK。9.单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。10.单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purgevalve。11.单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。12.单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。二.数据采集方法编辑：1.开始编辑完整方法：1.1从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中除“Dataanalysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。2.方法信息：2.1在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。2.2单击Ok进入下一画面。3.泵参数设定：（以二元泵为例）3.1在“Flow”处输入流量,如1ml/min，在“SolventB”处输入70.0,(A=100-B),也可Insert一行”Timetable”,编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。3.2单击Ok进入下一画面。4.自动进样器参数设定:4.1选择合适的进样方式,进样体积1.0ul,洗瓶位置为6号。“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。4.2点击Ok进入下一画面。5.柱温箱参数设定:5.1在”Temperature”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击”more”键,如图所示,选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。5.2点击ok进入下一画面。6.VWD检测器参数设定:6.1在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如0.1min(2s)。6.1在Timetable中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。点击ok进入下一画面。7.DAD检测器参数设定:7.1检测波长:254nm,BW=30nm,参比波长=350nm,BW=100nm;7.2检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peakwidth（Responsetime）：其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit—狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。7.3点击Ok进入下一画面。8.RID检测器参数设定:8.1色谱条件:进样体积:20ul。光学单元温度:Off。极性:正。峰宽(响应时间):4s。8.2“OpticalUnitTemperature”---若环境温度控制在±2℃,设定为Off,若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。“Peakwidth”---大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automaticrecyclingafteranalysis”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。8.3点击RID图标，选择RIDControl：Heater设为On，若要循环流动相，必须将“RecyclingValve”设为ON。手动purge参比池，将其设为On，并输入Purge时间。9.FLD检测器参数设定(色谱条件):9.1样品：P/N01018-68704用甲醇稀释为1:10。9.2进样体积：5ul。9.3柱温箱:30℃。EX=246nm,EM=317nm,PMT=10。9.4响应时间=4s.停止时间：出峰完毕。9.5ExcitationA:激发波长:200-700nm,步长为1nm,或ZeroOrder。9.6Emission:发射波长:280-900nm,步长为1nm,或ZeroOrder。9.7PMT:大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少PMT值。9.8“Peakwidth”：大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值。9.9MultiEx：多波长及光谱（激发）。9.10MultiEm：多波长及光谱（发射）。9.11同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱。10.在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”，单击Ok。11.单击“Method”菜单，选中“Savemethodas”，输入一方法名，如“test”，单击Ok。12.从菜单“View”中选中”Onlinesignal”,选中Windows1,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击Ok.(如同时检测二个信号,则重复12,选中Windows2)。13.从“Runcontrol”菜单中选择“Sampleinfo”选项，如上图所示，输入操作者名称，在“Datafile”中选择“Manual”或“Prefix”。区别:Manual--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。Prefix—在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001，vwd0002……。14.从Instrument菜单选择Systemon。15.等仪器Ready，基线平稳，从Method菜单中选择“Runmethod”，进样。三.数据分析方法编辑:1.从“View”菜单中，单击“Dataanalysis”进入数据分析画面。2.从“File”菜单选择“Loadsignal”，选中您的数据文件名，如下图所示。单击Ok。3.做谱图优化,从“Graphics”菜单中选择“Signaloptions”选项，。从Ranges中选择Autoscale及合适的显示时间，单击ok,或选择”UseRanges”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。4.积分:4.1从“Integration”中选择“Autointegrate”,如积分结果不理想,再从菜单中选择“IntegrationEvents”选项，选择合适的Slopesensitivity，Peakwidth，Areareject，Heightreject。4.2从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。4.3如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。4.4单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。5.打印报告:5.1从“Report”菜单中选择“Specifyreport”选项，进入如上画面。5.2单击“QuantitativeResults”框中Calculate右侧的黑三角，选中Percent（面积百分比），其它选项不变。5.3单击Ok.5.4从“Report”菜单中选择“Printreport”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击Report底部的“Print”钮。四.关机:1.关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]2.退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。关掉Agilent1100电源开关。