鼠尾基因组DNA的提取基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中,可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部,从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓,以保证得到较长的DNA。不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同,不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法,以获得可用的DNA大分子。尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时,应考虑除去多糖和酚类物质。本实验时以小鼠尾巴为材料,提取基因组DNA。1.仪器:恒温摇床,离心机,移液器,紫外成像仪2.试剂:裂解缓冲液,蛋白酶K,酚/氯仿/异戊醇,乙醇,双蒸水3.基本步骤:3.1取大约三周龄刚离乳的转基因小鼠,剪鼠尾0.5-1cm放入1.5ml尖底离心管中3.2每管加入裂解缓冲液0.5ml,20g/L蛋白酶K2.5μl(裂解缓冲液成分:1%SDS,75mMNaCl,10mMTris-HCL,25mMEDTA)3.355℃振动恒温摇床过夜消化3.4每管加入酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)500μl,12000rpm离心10min,取上清3.5加入预冷无水乙醇1ml,-20℃沉淀DNA20min,12000rpm离心5min,弃上清3.6再加入预冷75%乙醇1ml,12000rpm离心5min,弃上清3.7抽真空或空气自然干燥DNA,溶解于适量(30-60μl)的双蒸水中,-20℃保存备用3.8琼脂糖凝胶电泳鉴定基因组DNA是否提取成功。4.注意事项:4.1尾巴裂解及蛋白酶K消化充分。4.2DNA不要过于干燥,由于不容易溶解于水。