钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒(酶联免疫法)说明书

北京利米生物科技有限公司LM-SMS-004钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书【产品名称】通用名称：钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名称：TestKitforCalpastatinAutoantibodies(ELISA)【包装规格】48人份/盒。【预期用途】本试剂盒用于体外定性检测人血清中的钙活性蛋白酶抑制因子抗体（CAST抗体）水平。CAST是一种内源性抑制因子，在类风湿关节炎（RA）滑膜中过度表达并导致软骨破坏等。CAST抗体的测定有助于血清阴性RA患者的早期辅助诊断，以及RA与血清阴性脊柱关节病的辅助鉴别诊断[8]。【检验原理】本试剂盒应用间接酶联免疫吸附实验原理。在微孔板预包被CAST抗原，加入样本稀释液及待检样本进行温育，样本中存在的CAST抗体与包被抗原形成“包被抗原-抗体”复合物，洗板去除不与包被抗原结合的物质；加入酶结合物（辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体）进行第二次温育，酶标二抗将与“包被抗原-抗体”复合物结合，形成“包被抗原-IgG抗体-酶标二抗”复合物；再次洗板后加入显色剂，复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物。终止反应后，变为黄色。若样本中无CAST抗体，不显色。【主要组成成分】表1.钙活性蛋白酶抑制因子抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成分组成成份名称数量主要成分1.CAST包被板4×12孔固相化CAST抗原2.CAST抗体阴性对照质控150μl×1支CAST抗体阴性的混合人血清3.CAST抗体阳性对照质控150μl×1支CAST抗体阳性的混合人血清4.样本稀释液6ml×1瓶含10%小牛血清和0.05%硫柳汞的0.01MpH7.4PBS5.酶结合物（CAST抗体用）6ml×1瓶辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgG抗体6.显色剂A3ml×1瓶3，3，5，5-四甲基联苯胺（TMB）7.显色剂B3ml×1瓶H2O28.终止液3ml×1瓶2MH2SO49.浓缩洗涤液（30×0.01MPBST）15ml×1瓶Tween-20,30×0.01MPBS10.自封袋1个11.封板膜2张注：不同批号的包被板、阴阳性对照质控、酶结合物不可互换。其他组份在有效期内可以互换。【储存条件及有效期】1.储存条件：2～8℃避光贮存。2.有效期：12个月。3.打开后的包被板条用自封袋密封，2～8℃避光贮存不超过2周。【适用仪器】含波长450nm的酶标仪。【样本要求】1.本试剂使用的样本为人血清。2.不能检测含有叠氮钠的样本，因叠氮钠抑制辣根过氧化物酶的活性；不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样本。3.样本中应无微生物。无菌分离的样本可在2～8℃贮存1周，低于-18℃贮存三周，避免反复冻融。4.使用前请将样本置于室温（10～30℃）平衡30分钟以上，冷冻样本实验前需解冻至室温（10～30℃）并混匀。【检验方法】1.配液：用蒸馏水或去离子水将1瓶浓缩洗涤液全部稀释至450ml。2.编号：将样本对应的微孔按序编号，每板设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白孔1孔（双波长测定可不设空白孔）。3.加样：每孔加100μl（或2滴）样本稀释液，空白孔不加。分别在相应的孔中加入样本或阴、阳对照10μl，轻轻振荡混匀。4.温育：用封板膜封板后放入37±1℃温箱温育45±1分钟。5.洗涤：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5次（也可手工洗板），每次浸泡30秒，洗涤时各孔均需加满洗涤液，最后一次在吸水纸上尽量拍干。6.加酶：摇匀后每孔加100μl（或2滴）酶结合物，空白孔不加，轻轻振荡混匀。7.温育：用另一张封板膜封板后放入37±1℃温箱温育30±1分钟。8.洗涤：操作同第5步。9.显色：每孔先加50μl（或1滴）显色剂A，然后加50μl（或1滴）显色剂B（包括空白孔），37±1℃避光显色10±1分钟。10.测定：每孔加50μl（或1滴）终止液终止反应，轻轻振荡混匀，10分钟内在波长450nm下分别测定各孔的吸光值A值。北京利米生物科技有限公司LM-SMS-004（单波长酶标仪需空白孔调零，双波长酶标仪不需空白孔调零）【阳性判断值】1.阴性对照质控的正常范围：正常情况下，阴性对照孔的A值≤0.1（若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若有两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复实验。若阴性对照平均A值小于0.05，则按0.05计算）。2.阳性对照质控的正常范围：正常情况下，阳性对照孔的A值≥0.6（若有1孔阳性对照A值小于0.6应舍弃，若两孔阳性对照A值都小于0.6，应重复实验）。3.界限值（CUTOFF值）计算：CUTOFF值=0.2+阴性对照平均A值。4.阴性判定：样本A值＜CUTOFF值者为CAST抗体阴性。5.阳性判定：样本A值≥CUTOFF值者为CAST抗体阳性。注：本试剂盒的界限值是基于150例健康人血清吸光度（A）值的平均值+2SD而得出。【检验结果的解释】1.因CAST抗体仅是血小板凝集、关节滑液中软骨破坏等疾病血清学指标之一，CAST抗体阴性并不排除上述疾病，还需结合其他临床指标判定。2.CAST抗体阳性需用其他方法进行骨关节炎、类风湿性关节炎、血栓等疾病的确认。【检验方法的局限性】1.本试剂盒不能作为定量试剂使用。2.仅用于人血清样本的检测。【产品性能指标】1.外观：试剂盒各组份齐全、完整。标识应清晰、易识别。液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。抗原包被板包装袋应密封性好，无破损、无漏气现象。2.净含量：各液体组份的净含量不少于标示值。3.临界值：3.1对临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。3.2对临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。4.S/CO值重复性：对重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。5.批间差：抽取三个批次的试剂盒，每个批次40人份，按3项临界值的要求检测，各浓度反应结果应一致。【注意事项】1.本试剂盒仅用于体外诊断，操作应严格按照说明书进行。2.使用前请将试剂盒平衡至室温（10～30℃）。3.加液时建议使用加样器，若使用滴瓶滴加，请将滴瓶垂直，挤出头2滴舍弃，再依次加入。4.加样器要定期校准；加入不同样本或不同试剂组分时，应更换加样器吸头，以防交叉污染。5.所用样本、质控、废液和废弃物都应按传染物处理。阴阳性对照质控为人血清，已灭活，HBsAg、HIV-1/2抗体、HCV抗体及梅毒抗体四项检测为阴性，但不排除其传染性。6.终止液为2MH2SO4，使用时注意安全。【参考文献】1.SchlosserU;LacknerKJ;etal.Autoantibodiesagainsttheproteaseinhibitorcalpastatin:anewriskfactorforvenousthrombosis[J].ThrombosisandHaemostasis;1997;0340-6245;v.77;no.12.ShuklaM;RajgopalY;BabuPP;Activationofcalpains,calpastatinandspectrincleavageinthebrainduringthepathologyoffatalmurinecerebralmalaria[J].NeurochemistryInternational;2006;0197-0186;v.48;no.23.中国生物制品规程（2000年版）[M].中国生物制品标准化委员会编.化学工业出版社，2000.64.医学统计学[M].颜虹主编.人民卫生出版社，2005.75.免疫学与免疫学检验[M].刘辉主编.人民军医出版社，2006.86.全国临床检验操作规程（第3版）[M].中华人民共和国卫生部医政司.东南大学出版社，2006.107.检验与临床：现代实验诊断学（第2版）[M].刘人伟编著.化学工业出版社.2009.18.临床检验学实用技术与新进展[M].府伟灵主编.人民军医出版社，2005.7【基本信息】注册人/生产企业名称：北京利米生物科技有限公司住所：北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A座1001室邮政编码：100070联系方式：电话：[phone]传真：[phone]售后服务单位名称：北京利米生物科技有限公司联系方式：电话：[phone]传真：[phone]生产地址：北京市丰台区科技园富丰路4号工商联科技大厦A座1001室生产许可证编号：京药监械生产许20060092【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】京械注准20162400065【说明书核准日期及修改日期】2016年1月16日