铝对体外培养人T_B淋巴细胞合成肿瘤坏死因子影响的研究_韦小敏pdf

中国公共卫生2000年第16卷第12期CHINAPUBLICHEALTHVol.16No.12Dec20001115铝对体外培养人T、B淋巴细胞合成肿瘤坏死因子影响的研究韦小敏1王清海2陆继培1莫立凤2黄波3提要为探讨铝对体外培养人T、B淋巴细胞合成肿瘤坏死因子的影响作用,采用体外短期培养方法,观察铝对人T、B淋巴细胞生长密度和合成分泌肿瘤坏死因子(TNFα)能力(双抗体夹心ELISA法)的影响。结果表明,人T、B淋巴细胞经过体外培养24h和48h后,细胞生长密度及合成分泌TNFα能力在加铝组明显低于对照组,呈反比例关系。结果提示:铝对人T、B淋巴细胞的生长及合成分泌TNFα有直接抑制作用。关键词铝淋巴细胞肿瘤坏死因子EffectsofAluminiumonTNFαLevelsWhichProducedbyHumanTandBLymphCellsinVitroCultivationExperimentWeiXi-aomin,etal.Dept.PublicHealthofGuangxiMedicalUniversi-ty(Nanning530021)Toexploretheeffectsofaluminium(AlCl3)onTNFαlevelswhichproducedbyhumanTandBlymphcellsinvitrocultivationexperiment.Someparametersinimmunocologywereexaminedaf-tertheTandBlymphcellscultivatedwiththedifferentlevelsofAlCl3for24hoursand48hours.TheTandBlymphcellsgrowthfunctionsweredeterminatedbydirectlycountingunderthemicro-scope.TNFαlevelsinthecultivatedliquidweredeterminatedbyELISAmethod.Comparedtothecontrolgroup,theTandBlymphcellsgrowthfunctionsandtheirTNFαlevelsinthecultivat-edliquidweresignificantlydecreasedafterinvitrocultivatedfor24hoursand48hours.TherearedirectinhibitoryeffectsofAlCl3onhumanTandBlymphcell'sgrowthfunctionandthelevelsofTNFαwhichproducedbyhumanTandBlymphcellsinvitrocul-tivatedexperiment.KeywordsAluminiumLymphcellTNFα自70年代Carswell等人发现肿瘤坏死因子TNFα后,有关TNFα的结构特点、产生与调节、生物活性、检测方法以及临床应用已有大量研究报道,其中又以TNFα的抗肿瘤作用和免疫调节作用最受关注。铝一直被认为是一种毒性很低的金属,但Alfrey等报道摄入大量铝引起透析性脑病后〔1〕,人们对铝的安全性有了重新认识。不少学者研究还发现摄入过量铝与早老性痴呆症有关〔2〕,此外,铝对实验动物的繁殖、发育产生毒作用〔3,4〕。最近,铝的免疫毒性研究也有报道,已明确高剂量铝对实验动物的免疫功能有明显抑制。为此,我们采用体外短期培养的方法,观察了三氯化铝对人T、B淋巴生长密度及合成分泌TNFα能力的影响。1材料和方法1.1受试物三氯化铝,分析纯,佛山化学试剂厂产品。1.2T、B淋巴细胞的分离、纯化无菌采集健康献血员静脉血200ml,按文献介绍的方法〔5〕,抗凝、离心分离单个核细胞,孵育去除单核细胞,所得纯化淋巴细胞用尼龙毛T、B淋巴细胞分离法制得纯化的T、B淋巴细胞。用含10%人灭活血清的RPMI1640完全培养液将T、B淋巴细胞分别制成悬液,用台盼蓝拒染法测得T、B淋巴细胞的存活率分别为97%和97.5%。1.3淋巴细胞的培养将上述T和B淋巴细胞悬液用计数板调浓度为2×106/ml,按实验所需量加入培养板孔中。T和B淋巴细胞培养实验按AlCl30.01、0.05、0.10mol/L浓度为实验组,另加对照组,每组8孔,置37℃的二氧化碳培养箱中培养24h和48h,其中T细胞培养以植物凝集素为刺激原。1.4免疫指标检测T和B淋巴细胞生长密度,均采用计数板直接计算细胞密度,各培养孔上清液中TNF2含量检测用双抗体夹心ELISA法(深圳晶美生物工程公司提供试剂盒)。加终止液后,即用EL311型酶标仪(BIO-FEXinstruments)在波长450nm处测定光密度,在标准曲线上确定每孔上清液中TNFα的含量。2结果2.1三氯化铝对体外培养人T、B淋巴细胞生长密度的影响(表1)如表1所示,三氯化铝对T、B淋巴细胞生长密度均有明显抑制作用,随三氯化铝浓度增加而生长密度下降,成反比例关系,密度下降有显著性意义(P0.05或P0.01),培养24h和培养48h所测得的结果下降态势基本一致。表1三氯化铝对体外培养人T、B淋巴细胞生长增殖功能的影响(X±S)组别T淋巴细胞生长密度(×106/ml)B淋巴细胞生长密度(×106/ml)(mol/L)24h48h24h48h对照4.57±0.765.72±0.963.96±0.674.33±0.69AlCl30.013.69±0.70＊4.01±0.78＊＊3.44±0.703.72±0.490.051.97±0.75＊＊1.97±0.54＊＊2.65±0.60＊3.04±0.72＊0.11.56±0.53＊＊1.64±0.56＊＊1.49±0.69＊＊1.97±0.52＊＊n=8与对照组比较;＊P0.05,＊＊P0.01＊为广西卫生厅科研课题1.广西医科大学公共卫生学院(南宁530021)2.广西平果铝业公司职工医院3.上海医科大学劳卫教研室2.2三氯化铝对体外培养人T、B淋巴细胞合成、分泌TNFα的影响(表2)表2数据表明,三氯化铝对体外培养的T、B淋巴细胞合成、分泌TNFα有明显抑制作用。随着三氯化铝浓度增加,T和B细胞培养液中TNFα含量均呈明显梯度下降,各1116CHINAPUBLICHEALTHVol.16No.12Dec2000中国公共卫生2000年第16卷第12期加铝组与对照组比较下降均有显著性意义(P0.05或P0.01),培养24h与培养48h所测得结果下降态势基本一致。表2三氯化铝对体外培养人T、B淋巴细胞合成分泌TNFα的影响(X±S)组别T淋巴细胞TNFα含量(pg/ml)B淋巴细胞TNFα含量(pg/ml)(mol/L)24h48h24h48h对照17.8±3.718.3±3.014.3±2.715.4±3.5AlCl30.0113.2±2.8＊13.0±2.5＊＊14.2±2.813.9±3.70.059.7±1.6＊＊8.4±1.2＊＊7.6±1.8＊＊8.2±2.1＊＊0.17.9±1.3＊＊7.3±1.3＊＊4.9±1.3＊＊5.3±1.4＊＊n=8与对照组比较;＊P0.05,＊＊P0.013讨论大量实验研究表明,TNFα具有多种生物学活性,其中TNFα对肿瘤的出血坏死作用和对肿瘤细胞的抑制或杀伤作用以及与其他免疫细胞因子之间的关系倍受人们关注〔6〕。机体免疫系统对外来化合物产生的免疫反应具有敏感性高和反应复杂性的特点,使得某些化合物在很小接触量的条件下就可以产生免疫毒性反应。近年来铝的免疫毒性受到一些学者的关注。刘景芳等报道〔7〕,在小鼠基础饲料中加铝10mg/kg,喂养2个月后,引起实验组小鼠的胸腺指数、脾脏指数明显降低,抗体形成细胞、血清溶血素及T淋巴细胞转化功能,ANAE阳性反应均受到明显抑制。我们先前的研究也发现,按AlCl325、50和100mg/kg剂量给小鼠腹腔注射2周后,致小鼠T淋巴细胞百分率、脾抗体形成细胞数(PFC)和脾淋巴细胞增殖(A)值在中、高剂量铝组明显下降〔8〕。这些结果表明在整体动物实验中,过量铝摄入会对细胞免疫和体液免疫造成抑制。朱方争等人的研究发现,铝对小鼠免疫功能指标PFC值、CD3、CD4、CD4/CD8及ANAE呈先促进后抑制趋势〔9〕。人体过量铝接触多见于铝厂的铝熔炼车间工人。据报道国内一些铝熔炼车间空气中,铝浓度在0.09～2.71mg/m3之间,低于国家卫生标准(4mg/m3)。本次研究的结果表明,铝对体外培养人T、B淋巴细胞的生长密度有明的抑制作用和对T、B淋巴细胞合成分泌的细胞因子TNFα也有明显的抑制效应。提示:铝对机体的T、B细胞免疫可以产生直接的免疫毒性作用。至于三氯化铝是否直接抑制了T、B淋巴细胞的生长繁殖,从而导致TNFα分泌减少,还是通过干扰1L-1或1L-2等其他细胞因子活性,间接引起TNF2合成下降,或者是对它们同时具有抑制作用还有待进一步研究。参考文献1.AlfreyAC,etal.Thedialysisencephalopathysyndrome.Possiblea-luminiumintoxication.NEnglJMed1976;294:1842.ShinRW,etal.NeurofibrillarypathologyandaluminiuminAlzheimer'sdisease.Hrstol-Histopathol1995;10(4):9693.LiobetJM,etal.Reproductivetoxicologyofaluminiuminmalemice.Fundam.ApplToxicol1995;25(1):454.DomingoJL,etal.Reproductiveanddevelopmentaltoxicityofalu-minium.NeurotoxicolTeratol1995;17(4):5155.薛彬(主编).免疫毒理学实验技术.第1版.北京:北京医科大学,中国协和医科大学联合出版社,19956.孙卫民,等(主编).细胞因子研究方法学.第1版.北京:人民卫生出版社,19997.刘景芳,等.铝对小鼠免疫毒性的研究.中华预防医学杂志1992;26(1):638.黄波,等.铝对小鼠免疫毒性的研究.卫生毒理学杂志1998;12(3):1909.朱方争,谢佩意.铝对小鼠免疫系统影响的研究.中国工业医学杂志1998;119(3):137(2000-07-24收稿李溪莹编辑张亚莲校对)手接触部分放入5ml采样液的试管内振打80次,吸取0.5ml沈阳市托幼机构消毒情况调查接种于普通琼脂平板上,37℃培养24h,进行活菌计数,以物体表面污染微生物数5cfu/cm2为合格。消毒柜消毒监测,以大辽宁省卫生防疫站(沈阳110005)钱蕊珠肠杆菌菌片56片每层内外各设一沈阳市皇姑区卫生防疫站安成志点(8099)(5×10～5×10/),、按消每点放个平皿每一平皿放菌片片打开平皿盖,1(2),,毒柜原设计程序进行消毒后,取出平皿,按无菌操作取出每一1999年8～10月,对沈阳市皇姑区26所不同类别托幼机菌片分别移入5.0mlPBS试管中,浸泡10min,振打80次,作构的活动室、卧室进行空气中的细菌污染检测;消毒后餐具、口适当稀释,吸取0.5ml样液接种,培养,作活菌计数。杯、消毒柜等进行消毒效果监测。现将结果简要报告如下。结果细菌总数超标率(2500cfu/m3)为9.28%,消毒后调查方法空气细菌污染检测,使用平板暴露法,倾注15餐具合格率为99.07%,口杯合格率为96.30%,消毒柜合格率～18ml普通营养琼脂9cm直径平板,小于30m2的房间设3为88.46%。个,30m2以上房间设5个采样点(东、西、南、北、中),高度为有的单位消毒制度不健全,室内空气消毒未按要求安装固1.5m,暴露5min后,37℃培养24h。记录每个平板上的菌落定式紫外线灯;工作人员缺乏