金线莲组织培养的初步研究

着江农林大学本科生毕业设计（论文）1本科生毕业设计（论文）（2014届）林业与生物技术学院题目：金线莲组织培养的初步研究学号：201001010122姓名：朱光夏专业班级：林学101指导教师：朱玉球职称：副教授2014年6月25日浙江农林大学本科生毕业设计（论文）i本科生毕业设计（论文）诚信承诺书我谨在此承诺：本人所写的毕业设计（论文）《金线莲组织培养的初步研究》均系本人独立完成，没有抄袭行为，凡涉及其他作者的观点和材料，均作了引用注释，如出现抄袭及侵犯他人知识产权的情况，后果由本人承担。承诺人（签名）：年月日着江农林大学本科生毕业设计（论文）ii金线莲组织培养的初步研究摘要：通过植物组织培养的方法研究金线莲快繁技术。用无菌的金线莲茎段作为外植体，经实验筛选出最适芽诱导培养MS＋6-BA4.0mg/L＋2,4-D0.4mg/L＋IBA0.4mg/L＋马铃薯汁20g/L,经60天培养，芽增殖5.38倍;芽增殖培养基MS＋AD3mg/L＋6-BA3mg/L＋NAA0.5mg/L＋蛋白胨3.0g/L＋蔗糖30g/L＋香蕉50g/L，经60天培养，每瓶新增芽30.25个;高增殖培养基MS＋AD3.0mg/L＋6-BA3.0mg/L＋NAA0.5mg/L＋蛋白胨2.0g/L＋蔗糖30g/L＋香蕉100g/L，经60天培养，平均增高2.96cm；生根培养基½MS＋IBA1.0mg/L＋NAA1.0mg/L＋蛋白胨2.0g/L＋活性炭2.0g/L＋香蕉100g/L，培养60天，生根率达3.92。炼苗后移栽到腐殖土︰珍珠岩︰树皮︰泥炭土比例为4︰1︰3︰2的基质上，成活率达92%。关键词：金线莲；组织培养；培养基；快速繁殖PreliminaryStudyontheTissueCultureofAnoectochilusroxburghiiZHUGuangxiaAbstract：It’srapidpropagationbytissueculturemethodofAnoectochilusroxburghii.ExplantsareasepsisstemsegmentofAnoectochilus.TheculturemediumsaremadeofMS＋6-BA4.0mg/L＋2,4-D0.4mg/L＋IBA0.4mg/L＋potato20g/Lforthebudinducement,theproliferationratereached5.38averageafter60days.MS＋AD3mg/L＋6-BA3mg/L＋NAA0.5mg/L＋tryptone3.0g/L＋sugar30g/L＋banana50g/Lforbudproliferation,abottleofnewbudsat30.25after60days.MS＋AD3.0mg/L＋6-BA3.0mg/L＋NAA0.5mg/L＋tryptone2.0g/L＋sugar30g/L＋banana100g/Lforrapidgrowth,average2.96cmincreaseinhighgrowthafter60days.½MS＋IBA1.0mg/L＋NAA1.0mg/L＋tryptone2.0g/L＋acticarbon2.0g/L＋banana100g/L＋sugar30g/Lforrootage,therootingratereached3.92after60days.Thesurvivingpercentageofseedlingis92%onthemediumof4shareshumussoil,1shareperlite,3barkand2peatsoil.Keywords:Anoectochusroxburghih;tissueculture;culturemedium;rapidpropagation着江农林大学本科生毕业设计（论文）iii目录前言........................................................................11.1金线莲简介.........................................................11.2生物学特性.........................................................11.3金线莲组培研究现状.................................................22.材料与方法...............................................................32.1材料...............................................................32.2基本培养基配制.....................................................32.3不同激素水平的芽诱导培养...........................................42.4不同添加物对芽、高增殖的影响.......................................42.5不同激素水平对根生长的作用.........................................42.6炼苗移栽...........................................................43.实验结果和分析...........................................................53.1茎芽诱导实验结果分析...............................................5表1不同激素浓度对茎段发芽的影响........................................53.2芽、高增殖培养实验结果分析.........................................6表2不同添加物对苗高增殖的影响..........................................6表3不同添加物对苗高增长的影响..........................................73.3生根培养实验结果分析...............................................7表4不同激素浓度对生根的影响............................................73.4组培苗移栽实验分析.................................................8表5不同栽植基质对苗移栽成活率影响......................................84.实验总结与讨论...........................................................9致谢.......................................................................10参考文献....................................................................10浙江农林大学本科生毕业设计（论文）1前言1.1金线莲简介金线莲是兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)的多年生草本植物。别名金线兰、金丝草、树草莲、金钱仔草、金线虎头蕉、金线入骨消等[1]。是一种传统珍贵药材,具有清热解毒、祛风利湿、滋阴润肺、降血压、平肝等功效[2]。全草均可入药，富含氨基酸、维生素、糖类、生物碱、有机酸、微量元素、黄酮等成分，在保护肝脏，预防癌症、糖尿病、心血管疾病和辅助抗肿瘤等方面有较好的作用[3]，有“金草”、“神药”、“药中之王”等美称[4]。金线莲株型小巧，叶形优美，叶脉金黄色，呈网状排列，是观赏价值极高的室内观叶珍品[5]。其分布于亚洲热带和亚热带地区及大洋洲。主要有中国、日本、印度、尼泊尔及东南亚各国。在我国主要分布在台湾、福建、浙江、广东、广西、江西、云南、贵州、四川、西藏南部、海南等省区[6]，其中以台湾、闽、浙为主产地。在自然界中，野生金线莲是许多动物喜食的植物以及遭到许多微生物的危害，同时自然条件的恶化，生态环境遭受严重破坏以及人为盲目采挖[7]，也导致金线莲野生资源日趋枯竭。正因为现存资源稀缺，药用价值极高，金线莲已被列为濒危珍贵药用植物。1.2生物学特性野生金线莲一般生长在阴湿、遮光，土壤腐殖质丰富，空气相对湿度较大小环境，适宜温度20-25℃。多数学者认为在海拔300-1200m均有分布，尤以海拔300-600m的中低丘陵区分布较多。但刘贤旺等[8]发现其在江西的海拔500-1300m分布较多，张铁等[9]也发现分布于文山的海拔800-1600m的地方。金线莲为多年生草本植物，高4-10厘米，根茎半匍匐。茎节明显，叶互生;叶柄基部呈鞘状，叶片卵形，长2-5厘米，宽1-3厘米，先端急尖，基部圆，上面有细鳞片状突起，下面暗红色，叶脉为金色。根系较短，根毛多而密。花茎长4-5厘米，具2-3朵花苞片卵状披针形，花淡红色，中警片圆形，先端骤尖，下面被长硬毛，与花瓣半卵圆形，偏斜，长7毫米，先端具长2毫米的骤尖唇瓣下部的爪(柄)长5毫米，爪部具多枚线状裂片，为梳状长5毫米，距囊状三角形，基部前子有2个疣状点起;雄蕊1，长圆形。花期3-6月。种子呈细小的粉状，种子由未发育的椭圆形胚及单层细胞构成的种皮所组成，发芽时必须有某种真菌侵入，将种子胚细胞中的淀粉转化为糖，才促进萌芽生长，是野生金线莲资源稀少、自然繁殖困难的重要原因之一[7-9]。着江农林大学本科生毕业设计（论文）21.3金线莲组培研究现状近几年来，金线莲作为中医养生的佳品，其药用价值已受到了国内外研究机构及专家学者的普遍重视，开发研究工作取得一定进展。但是野生金线莲主要分布在福建、台湾浙江等少数省份，且现存的数量稀少，难以满足日益增长的市场需求。为了更好地保护和开发宝贵的金线莲资源，组织培养金线莲大大的提高了金线莲的生产水平，让金线莲能够批量的生产，其研究价值显而易见。随着生物技术的不断进步和成熟,越来越多名贵的花卉植物以及中草药通过组织培养的途径,迅速繁殖,打破原有漫长的自然生命周期,实现了工厂化生产。而合适的繁殖材料，适宜的生长环境和优良的培养基是组培成功的关键。目前，金线莲组培常用的材料是无菌的茎段。王建勤等[11]。将金线莲根状茎接入培养基后一周,部分材料在根茎连结处的潜伏芽萌动膨大,培养13～15d可观察乳白色主芽形成。试验结果表明不同浓度的激素对金线莲根状根茎芽的诱导效果不同,在植物细胞分裂素6-BA与细胞生长素NAA不同浓度配比的培养基上芽的诱导效果有明显差异,低浓度配比时均不能诱导金线莲根状茎发生芽。范子南[5]用金线莲茎节段在Ar培养基上进行诱导实验，获得芽增殖率为4.8。较高浓度的2,4-D（如2mg/L）,会引起苗褐变死亡。其组培苗栽植实验结果表明，在5月份进行组培苗炼苗栽植最适合。戴小英，朱恒[12]用MS、½MS、B5和WPM4种培养基诱导金线莲茎段，结果表明MS培养基为最适基本培养基。黄德贵等[13]研究表明在单加NAA时，5个浓度中均以5ppm浓度的叶片、节数、苗高、生根数净增加值为最多，根生长长度最长；而在加0.3%活性炭的培养基中，上述5个项目的净增最高值均在NAA4ppm浓度中。在含有1、2、3、4、5ppmNAA的培养基上，培植体生长及根分化存在差异，五个浓度中均是补加了活性炭后叶片、节、根数净增值减少了，而苗高、最长跟的净增值却增高、增长。另