搜索
1年级：系部及班级：姓名及学号：实验一食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。适用于食品中菌落总数的测定。2菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。3设备和材料3.1恒温培养箱：36℃±1℃，30℃±1℃。3.2冰箱：2℃~5℃。3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基：见附录A中A.1。4.2磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。4.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。5操作步骤5.1样品的稀释5.1.1固体和半固体样品称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min，制成1:10的样品匀液。5.1.2液体样品2以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。5.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。5.1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。5.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。5.1.6及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。5.2培养待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。5.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。5.3.1选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。5.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。5.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。6结果与报告6.1菌落总数的计算方法6.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。6.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式计算：N=∑C÷(n1+0.1n2)d式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。36.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。6.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.2菌落总数的报告6.2.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。6.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。6.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。6.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。6.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。培养基和试剂A.1平板计数琼脂（platecountagar，PCA）培养基A.1.1成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2A.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。A.2磷酸盐缓冲液A.2.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压4灭菌15min。A.3无菌生理盐水A.3.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.3.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。7.实验结果：N=∑C÷(n1+0.1n2)d=（132+35）/{1+（0.1*1}*10-3=151818经数据修约后得1.5*105式中：N——样品中菌落数；∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d——稀释因子（第一稀释度）。8.实验分析：①平板的平均菌落数处在30-300之间，说明操作比较规范②从样品中菌落总数可知，发酵茶中含有的微生物较多56年级：系部及班级：姓名及学号：实验二食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群平板计数1范围本标准规定了食品中大肠菌群计数的方法。本标准适用于食品中大肠菌群的计数。2大肠菌群在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。3设备和材料3.1恒温培养箱：36℃±1℃。3.2冰箱：2℃~5℃。3.3恒温水浴箱：46℃±1℃。3.4天平：感量0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8无菌锥形瓶：容量500mL。3.9无菌培养皿：直径90mm。3.10pH计。3.11菌落计数器。4培养基和试剂4.1煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：见附录A中A.1。4.2结晶紫中性红胆盐琼脂（VioletRedBileAgar，VRBA）：见附录A中A.2。4.3磷酸盐缓冲液：见附录A中A.3。4.4无菌生理盐水：见附录A中A.4。4.5无菌1mol/LNaOH：见附录A中A.5。4.6无菌1mol/LHCl：见附录A中A.6。5操作步骤5.1样品的稀释5.2平板计数5.2.1选取2个~3个适宜的连续稀释度,每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL。同时7取1mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。5.2.2及时将15mL~20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL~4mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±1℃培养18h~24h。5.3平板菌落数的选择选取菌落数在15CFU~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。5.4证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h~48h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。5.5大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以5.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。培养基和试剂A.1煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤A.1.1成分蛋白胨10.0g乳糖10.0g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL0.1%煌绿水溶液13.3mL蒸馏水800mLpH7.2±0.1A.2.2制法将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0~7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。A.2结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）A.2.1成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g8氯化钠5.0g胆盐或3号胆盐1.5g中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g～18g蒸馏水1000mLpH7.4±0.1A.2.2制法将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH。煮沸2min，将培养基冷却至45℃~50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。A.3磷酸盐缓冲液A.3.1成分磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0g蒸馏水500mLpH7.2A.3.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。A.4无菌生理盐水A.4.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.4.2制法称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.51mol/LNaOHA.5.1成分NaOH40.0g蒸馏水1000mLA.5.2制法称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。A.61mol/LHClA.6.1成分HCl90mL蒸馏水1000mLA.6.2制法移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL，121℃高压灭菌15min。96.实验结果：实验三莫尔法测定酱油中NaCl的含量一、实验目的1、学会AgNO3标准溶液的配制和标定方法；2、掌握莫尔法测定可溶性氯化物的原理及方法。二、实验原理某些可溶性氯化物中氯含量的测定常采用莫尔法。在中性或弱碱性条件下，以K2CrO4为指示剂，用AgNO3标准溶液进行滴定，主要反应如下：Ag++Cl-=AgCl↓（白色）2Ag++CrO42-=Ag2CrO4↓（砖红色）由于AgCl的溶解度小于Ag2CrO4，根据分步沉淀的原理，溶液中首先析出AgCl沉淀。当AgCl定量沉淀后，稍微过量的Ag+即与CrO42-形成砖红色的Ag2CrO4沉淀，它与白色的AgCl沉淀一起，使溶液略带橙红色即为终点。滴定必须在中性或弱碱性液中进行，最适宜pH范围为6.5~10.5。如果有铵盐存在，溶液的pH需控制在6.5~7.2之间。指示剂的用量对滴定准确度有影响，一般以5×10-3mol·L-1为宜。凡是能与A