锌和维生素E对糖尿病大鼠内皮细胞保护作用的研究

锌和维生素E对糖尿病大鼠内皮细胞保护作用的研究苏晨皓崔玉山于博马建伟原理•糖尿病血管并发症是糖尿病患者的主要死因。目前认为内皮细胞功能紊乱是糖尿病血管并发症的基础。•前列腺环素(PGI2)和血栓素A2(TXA2)和内皮素(ET)是血管内皮细胞分泌的血管活性物质，参与内皮功能调节。糖尿病时，高血糖引起的氧化应激参与血管内皮功能紊乱。锌和维生素E是抗氧化剂并具有细胞保护作用。本实验旨在探讨两者对糖尿病大鼠氧化应激和血浆PGI2,TXA2和ET的影响。主要试剂与仪器链脲佐菌素(STZ):美国Sigma公司产品;ZnSO4·7H2O:北京双环化学试剂厂，分析纯;干酪素:北京双旋微生物培养基制品厂，生化试剂;I125-胰岛素放射免疫试剂盒、I125-内皮素放射免疫试剂盒、I125-6-酮-前列腺素F1α放射免疫试剂盒、I125-血栓素B2放射免疫试剂盒:北京东雅生物技术研究所;血清丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒:南京建成生物制品研究所产品；SBA-40C生物传感分析仪，山东省科学院生物研究所;SN一682放射免疫γ计数仪，上海。动物模型建立及分组雄性SD大鼠50只，体重140-150g。动物适应性喂养一周，按体重随机分为正常对照组(10只)和实验组(40只)，各组大鼠禁食12h后，实验组大鼠以60mg/kg·bw)的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(用0.1mol/L,pH=4.4的枸橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液)，正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。一周后，采尾血测血糖，以血糖浓度16.6mmol/L，饮水量40ml/d，尿糖强阳性(+++~++++)的大鼠作为糖尿病大鼠。选取糖尿病大鼠36只按血糖值参考体重分为4组:糖尿病对照组(DM)，糖尿病补锌组(DM十Zn)，糖尿病补VE组(DM+VE)，糖尿病补Zn和VE组(DM+Zn+VE)。动物模型建立及分组各组动物均喂饲人工合成饲料，合成饲料控制锌浓度为20mg/kg。正常对照组和DM组给予去离子水;补Zn组给予Zn浓度为20mg/L的含ZnSO4·7H2O去离子水;补VE组每天以50mg/kgVE灌胃;Zn和VE联合补充组在给予Zn浓度为20mg/L的含ZnSO4·7H2O去离子水的同时以50mg/kgVE灌胃。实验期间，密切观察动物进食和饮水量变化，每周称两次体重,6周末时，戊巴比妥麻醉，股动脉取血，测定有关指标。方法•测定指标：全血血糖测定，血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及总抗氧化能力(T-AOC)测定，血清胰岛素、血浆血栓素B2(TXB2),6-酮-前列腺素F1α（6-k-PGF1α)和内皮素(ET)测定。•质量控制：实验用鼠笼、食盒及配饲料用具均用1%EDTA·Na2(乙二胺四乙酸钠)溶液浸泡，配制饲料时戴口罩和一次性手套，防止锌污染。每天清洁实验室，保持室温20~25℃，湿度40%~60%。注：1%EDTA·Na2用于消除实验用具和饲养环境中混入锌元素的影响。•统计分析：采用分析软件进行多组间比较的方差分析。总结•受试对象：糖尿病大鼠•处理因素：锌和维生素E实验中应保持处理因素恒定不变，并尽量排除混杂因素的干扰作用。•实验效应：可通过全血血糖、MDA、SOD、T-AOC、血清胰岛素、TXB2、6-k-PGF1α和ET等指标来体现。•分组：在对36只糖尿病大鼠进行分组时可采用随机区组设计的方法，按血糖值参考体重将其分为4组。