镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化

中国组织工程研究第17卷第51期2013–12–17出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchDecember17,2013Vol.17,No.51doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.51.009[]郭大伟，宋玲，张春艳，曹阳,李菁文，梁星.镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化[J].中国组织工程研究，2013，17(51):8834-8840.P.O.Box1200,Shenyang110004郭大伟☆，男，1974年生，山东省苍山县人，汉族，2010年四川大学毕业，博士，主治医师，副教授，硕士生导师，主要从事口腔修复学及种植学的临床和应用基础研究。[e-mail]通讯作者：梁星，主任医师，教授，博士生导师，四川大学华西口腔医院修复科，四川省成都市[e-mail]中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2013)51-08834-07修回日期：2013-09-13(201305045/GW·W)GuoDa-wei,☆M.D.,Attendingphysician,Associateprofessor,Master’ssupervisor,DepartmentofStomatology,QingdaoMunicipalHospital,Qingdao266071,ShandongProvince,[e-mail]:LiangXing,Chiefphysician,Professor,Doctoralsupervisor,DepartmentofProsthodontics,WestChinaHospitalofStomatology,SichuanUniversity,Chengdu610041,SichuanProvince,[e-mail]:2013-09-13镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化☆郭大伟1，宋玲1，张春艳1，曹阳1,李菁文2，梁星2(1青岛市市立医院口腔科，山东省青岛市266071；2四川大学华西口腔医院修复科，四川省成都市610041)文章亮点：实验创新性的将变性梯度凝胶电泳技术引入到镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群影响的研究中，通过龈下全细菌DNA图谱分析，摆脱了细菌培养、鉴定工作的繁琐，同时又能够更全面、动态的观察龈下菌群的组成和变化情况。关键词：生物材料；组织工程口腔材料；变性梯度凝胶电泳；镍铬合金；金属烤瓷；龈下菌群；16SrRNA；牙周可疑致病菌；牙周炎；镍离子；铬离子；牙周损伤主题词：生物相容性材料；铬合金；金属烤瓷合金；牙周炎基金资助：青岛市科技计划基础研究项目(12-1-4-16-(8)-jch)*；青岛市卫生科技计划项目(2012-WSZD005)*；青岛市市立医院“总院长科研专项基金”项目(ZYZJJ-2013-W020-配)*摘要背景：目前有关镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群影响的研究还较少。目的：探讨镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群构成比的影响。方法：选择因怀疑镍铬合金烤瓷修复体影响健康而要求拆除原修复体的烤瓷牙患者9例(患牙12颗)，于镍铬合金烤瓷烤瓷修复体拆除前、拆除后1个月、拆除后3个月时，采用变性梯度凝胶电泳法检测镍铬合金烤瓷修复体基牙及对侧同名天然牙的龈下菌斑。结果与结论：修复体拆除后1，3个月，患牙龈下菌斑的变性梯度凝胶电泳图谱与拆除前相比均发生了明显变化，而且拆后3个月与拆后1个月相比也发生了较明显变化；此外，选择在修复体拆除前龈下菌斑中经常出现而在拆除后消失或减弱的变性梯度凝胶电泳图像中一些特异性条带作16SrDNA片段的序列分析，结果显示这些特异条带的基因序列分别与啮蚀艾肯菌、直形弯曲菌和隐藏优杆菌有着较高的序列相似度。结果表明镍铬合金烤瓷修复体导致了修复基牙龈下菌群组成的变化，并且导致了部分牙周可疑致病菌构成比增加。Variationinsubgingivalfloraofabutmentsbeforeandafterremovalofnickel-chromiumalloyporcelain-fused-to-metalrestorationGuoDa-wei1,SongLing1,ZhangChun-yan1,CaoYang1,LiJing-wen2,LiangXing2(1DepartmentofStomatology,QingdaoMunicipalHospital,Qingdao266071,ShandongProvince,China;2DepartmentofProsthodontics,WestChinaHospitalofStomatology,SichuanUniversity,Chengdu610041,SichuanProvince,China)AbstractBACKGROUND:Currently,therearefewreportsontheeffectofnickel-chromium(Ni-Cr)alloyporcelain-fused-to-metal(PFM)restorationonsubgingivalfloraofabutment.OBJECTIVE:ToinvestigatetheeffectoftheNi-CralloyPFMrestorationonsubgingivalfloraratioofabutment.METHODS:Ninepatients(12teeth)whosuspectedthatNi-CralloyPFMcouldaffecttheirhealthandthereforecametohospitaltoaskforremovaloftheprosthesiswereselectedinthisstudy.Theirsubgingivalplaquesofabutmentwereobtainedbeforeand1month,3monthsaftertheNi-CralloyPFMrestorationswereremoved,respectively,andthechangesofsubgingivalflorawereobservedandanalyzedbythemethodofdenaturinggradientgelelectrophoresis.RESULTSANDCONCLUSION:Theimagesofdenaturinggradientgelelectrophoresisinsubgingivalbacteriaofexperimentalgrouphadsignificantchangesat1and3monthsafterNi-CralloyPFMrestorationsremoved,furthermore,thereweresignificantdifferencesintheimagesofdenaturinggradientgelelectrophoresisat1and3months.Inaddition,thespecificbandswereselectedfromdenaturinggradientgelelectrophoresisimagethatappearedbeforeNi-CralloyPFMrestorationsremovedandweakenedordisappearedaftertheremovalofrestorations,then16SrDNAsequenceinthespecificbandswereanalyzed.TheresultsshowedthatthegenesequencesofthesebandswereclosestrelatedtoEikenellacorrodens,CampylobacterrectusandEubacteriumsaphenu.ThesefindingsindicatedthattheNi-CralloyPFMrestorationswouldresultinthechangesofthe郭大伟，等.镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患牙龈下菌群的变化ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH8835:theBasicResearchProgramofQingdaoScientificPlan,No.12-1-4-16-(8)-jch*;theHealthScientificPlanofQingdaoCity,No.2012-WSZD005*;Dean’sSpecificFundofQingdaoMunicipalHospital,No.ZYZJJ-2013-W020-pei*GuoDW,SongL,ZhangCY,CaoY,LiJW,LiangX.Variationinsubgingivalfloraofabutmentsbeforeandafterremovalofnickel-chromiumalloyporcelain-fused-to-metalrestoration.ZhongguoZuzhiGongchengYanjiu.2013;17(51):8834-8840.0引言Introduction镍铬合金烤瓷修复体因其价格低廉、性能良好被广泛应用于国内口腔临床。但随着其应用的普及也暴露了一系列不容忽视的弊病，如牙龈增生、红肿和修复体边缘牙龈色素沉着等[1]。目前一般认为镍铬合金烤瓷修复体导致的局部牙周炎症与释放的金属离子直接相关[1-3]，但尚无确切证据阐明损伤的机制。现已公认牙周病是由龈下细菌引起的慢性疾病，因此牙龈或牙周的炎症必然与龈下菌群的变化相关，然而关于镍铬合金烤瓷修复体对龈下菌群的影响的研究目前还较少报道。变性梯度凝胶电泳是用来检测DNA片段中单个碱基改变的点突变的一种电泳技术，自1993年Muyzer等[4]引入微生态的研究后，现已作为比较微生物群落多样性和监测群体动态的一个重要分子学工具[5-7]。实验创新性地引入此技术来观察镍铬合金烤瓷修复体拆除前后患者修复体基牙龈下菌群的组成变化，以探讨修复体对龈下菌群的影响。1对象和方法Subjectsandmethods设计：前后对照观察。时间及地点：实验于2011年3月至2012年9月在青岛市常见病重点实验室完成。对象：选择来青岛市立医院口腔科及四川大学华西口腔医院修复科就诊，因怀疑修复体镍铬元素影响健康而要求拆除原镍铬合金烤瓷修复体的9例患者(患牙12颗)作为研究对象，其中单颗烤瓷牙修复患者6例，2颗烤瓷牙修复患者3例；男性3例，女性6例；年龄26-60岁，平均(41.44±10.17)岁。纳入标准：①患者半年内未用对微量元素代谢有影响的药物，居住地区无明显环境污染，无镍铬金属职业接触史。②修复体所在的实验牙牙位限制在上颌一侧前牙和双尖牙区，要求为1个或2个单冠，修复体边缘深入龈下0.5-1.0mm，无明显悬突，边缘密合度良好。③口腔卫生良好，无明显牙周疾病者。④咬合关系基本正常者。⑤实验牙的对侧同名牙为健康天然牙。⑥修复体拆除前半年内以及拆除后的实验期间未行牙周治疗者。⑦近3个月内未服用抗生素及免