镧对镉胁迫下水稻幼苗生长及生理特性的影响

生态环境2007,16(3):[e-mail]基金项目：国家自然科学基金项目（30470270）；安徽师范大学校青年基金项目（2005xqn10）；安徽省重点实验室专项基金项目作者简介：张杰(1973－)，男，讲师，硕士，主要从事植物生理生态学和环境污染生态学研究。E-mail：[e-mail]收稿日期：2006-09-19镧对镉胁迫下水稻幼苗生长及生理特性的影响张杰，黄永杰，刘雪云安徽师范大学生物多样性研究中心//重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室，安徽芜湖241000摘要：选择10mg•L-1La(N03)3作为生物调控因子，通过营养液培养实验，研究了水稻(OryzasativaL.)幼苗在遭受镉胁迫（50mg•L-1和100mg•L-1两种CdCl2处理）后，稀土元素镧对抗氧化酶（SOD和CAT）活性、脂质过氧化产物MDA含量、质膜透性、叶绿素质量分数、根系活力、幼苗生长及镉质量分数等生理生长指标的影响，以探讨稀土在重金属胁迫下对作物的防护效应。研究结果表明：水稻幼苗遭受镉胁迫的初期，镧对提高SOD和CAT的活性，降低MDA含量和质膜透性，提高叶绿素质量分数和根系活力有明显的正效应，但是随着镉胁迫程度的加重和胁迫时间的延长，这种作用开始下降，最后甚至与镉发生协同作用，不仅不能缓解镉对水稻幼苗的毒害，反而更加剧了镉对水稻幼苗的毒害，这说明适量的稀土元素对重金属胁迫下植物生长有一定的防护效应，但是这种效应与重金属胁迫的浓度大小、胁迫的时间长短有着密切的关系。此外，镉在水稻幼苗体内的富集规律是：根系＞地上部，镉的富集与各处理组镉浓度之间有比较明显的剂量效应关系，但是，镧处理并未降低水稻幼苗地上部分及根系中镉的质量分数。关键词：镧；镉胁迫；水稻(OryzasativaL.)幼苗；生理特性中图分类号：X171.5；Q946.91文献标识码：A文章编号：1672-2175（2007）03-0835-07镉是一种生物非必需的重金属元素，由于它具有高毒性及在水体中较为稳定，因而被认为是最重要的重金属污染物之一[1]。农业、采矿业、工业生产活动使大量的Cd进入环境中[2]，随着污泥农用及污灌的应用，越来越多的Cd进入农业生态系统。Cd不仅降低作物产量，而且通过食物链传递可能最终危害人体健康，因此如何降低Cd在作物中的富集，减少Cd对作物的伤害已经受到广泛的关注[3]。近年来稀土农用研究发现，适当与适量的稀土，在促进作物优质增产的同时，还有诱导植物抗性的能力[4,5]，但是以主要的粮食作物——水稻(OryzasativaL.)作为对象，研究稀土元素对重金属胁迫下作物生长的影响却鲜见报道，另外笔者在此之前研究结果表明10mg•L-1La(N03)3处理对水稻幼苗生长的促进作用最为显著[6]，因此本文以水稻为试验材料、10mg•L-1La(N03)3作为调节因子，研究La对Cd胁迫下水稻幼苗生长的影响，以考察在实验中应用稀土元素作为植物抗重金属胁迫的拮抗剂的可能性，为稀土对农业生态系统中重金属污染的防护研究提供一定的依据。1材料与方法1.1幼苗的培养水稻品种为“金优63”，种子用w=2%的NaClO溶液消毒30min，后用蒸馏水清洗干净，置于27℃恒温培养箱中用蒸馏水浸泡48h，然后将种子放入盖有湿润纱布的白瓷盘中，于27℃恒温培养箱中催芽，保持纱布湿润。2d后水稻长出芽及根，转移到改良的Hangland培养液中培养8d后备用，每天更换1次培养液，实验在28℃光照培养箱中进行，光周期为10h∶14h（光∶暗比）。1.2幼苗的处理水稻在改良的Hangland培养液中生长8d后进行处理。向培养液中加入相应浓度的La(N03)3或CdCl2溶液（表1）。为避免形成LaPO4和Cd3(PO4)2沉淀，处理后培养液中不再加入NH4H2PO4，但是每天光照结束前向叶面定量喷施1mol•L-1NH4H2PO4溶液，其它营养元素同处理前。每一塑料杯一次性浇入上述培养液200mL，6种处理，每一处理均20杯，每杯移植水稻幼苗10株。实验在28℃光照培养箱中进行，光周期为10h∶14h（光∶暗比）。表1试验处理Table1Treatmentoftest处理Treatment加入的溶液Aquaofjoin质量浓度/(mg·L-1)ConcentrationCK——LaLa(N03)310Cd1CdCl250Cd2CdCl2100Cd1LaLa(N03)3和CdCl210，50Cd2LaLa(N03)3和CdCl210，100836生态环境第16卷第3期（2007年5月）1.3测定方法1.3.1超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性的测定称取植物材料0.2g，加入5mL预冷的50mmol•L-1pH7.8的磷酸缓冲液于冰浴中研磨成匀浆，在冷冻高速离心机中于4℃下15000×g离心20min，取上清液用于测定SOD和CAT活性。SOD活性测定采用NBT光化还原法[7]，以抑制NBT光化还原50%的酶量为一个酶活力单位；CAT活性测定用高锰酸钾滴定法[8]，酶活性大小以每克鲜质量每分钟分解的H2O2的量来表示。1.3.2丙二醛(MDA)质量分数和质膜透性的测定MDA含量测定按Heath等[9]的硫代巴比妥酸(TBA)显色法；质膜透性的测定采用外渗电导率法[10]261-263，以相对电导率表示大小。1.3.3生长指标及镉质量分数的测定用直尺量出株高及最长根的根长，之后，于恒温干燥箱中100℃杀青0.5h，80oC烘12h至恒质量，以单株为单位，分别测出每株水稻幼苗茎干质量和根干质量。然后将根和茎叶样品消化，用原子吸收分光光度法[10]121-123分别测定根和茎叶中Cd的质量分数。1.3.4叶绿素质量分数和根系活力的测定叶绿素质量分数用分光光度法[11]；根系活力的测定采用氯化三苯基四氮唑(TTC)法[10]119-120。SOD、CAT活性，MDA含量分别于处理后0、3、6、9d采样测定；质膜透性、生长指标、镉质量分数、叶绿素质量分数和根系活力在处理第10d采样测定。每一指标测定均重复3次。1.4数据统计分析实验数据的处理和方差分析采用SPSS11.0软件完成。2结果与讨论2.1镧对镉胁迫下水稻幼苗地上部及根系SOD活性的影响图1是水稻幼苗遭受镉胁迫后，镧对地上部分SOD活性的影响。La处理可提高幼苗茎叶中SOD活性，且一直持续到试验结束，其活性仍比对照高出32.48%，达到5%显著水平。Cd1，Cd2，Cd1La，Cd2La在处理的早期(第3天)，幼苗茎叶中SOD的活性均有明显增加，并且Cd1La，Cd2La处理组幼苗茎叶中SOD活性分别高出Cd1，Cd2处理组6.92%和13.64%，表现出镧有提高水稻幼苗抗重金属胁迫的潜能。随着镉胁迫时间的延长，各处理组的SOD活性均大幅度下降，至处理最后，Cd1，Cd2，Cd1La，Cd2La处理组幼苗茎叶中SOD活性与CK相比均无显著差异。图2反映了镉胁迫时镧对水稻幼苗根系SOD活性的影响。在处理的早期(第3天)，相对对照而言，各处理根系的SOD活性均有明显增加，其中以Cd2La处理的为最高，达到了对照的2.93倍。与地上部分相似，La处理可提高幼苗茎叶中SOD活性，且一直持续到试验结束，其活性仍比对照高出50.90%，达到5%显著水平。遭受镉胁迫的各处理组，均随着镉胁迫时间的延长，根系中SOD的活性迅速降低，并与受镉胁迫的程度有关。至处理结束(第9天)，Cd1，Cd2，Cd1La，Cd2La处理组均已低于CK组，其中Cd2，Cd1La，Cd2La处理组达显著水平(P＜0.05)，这一点与地上部分的影响有所区别。镧在处理第3天时，Cd1La，Cd2La处理组根系SOD活性分别比Cd1，Cd2处理组高出24.03%和7.74%，即有使遭受镉胁迫水稻幼苗根系SOD活性增高的趋势。但是随着镉胁迫时间的延长，镧逐渐失去提高镉胁迫时根系SOD活性的作用，直至处理最后，与镉发生协同作用，使加镧处理的根系SOD活性更低。活性氧(如·O2－，·OH，H2O2，1O2等)是植物正01002003004005006007000369t/dSOD活性/(U•g-1)CKLaCd1Cd2Cd1LaCd2La图2镧对镉胁迫下水稻幼苗根系SOD活性的影响Fig.2EffectsofLaonSODactivityinrootsofriceseedlingsunderCdstress01002003004005006007008009000369t/dSOD活性/(U•g-1)CKLaCd1Cd2Cd1LaCd2La图1镧对镉胁迫下水稻幼苗地上部SOD活性的影响Fig.1EffectsofLaonSODactivityinshootsofriceseedlingsunderCdstress张杰等：镧对镉胁迫下水稻幼苗生长及生理特性的影响837常代谢中的产物，在植物的生长过程中活性氧的产生和清除处于低水平平衡状态，这时不会对植物造成伤害。但是在逆境胁迫下，活性氧代谢系统的平衡会受到影响，植物体内的活性氧大量生成。活性氧的升高能启动膜脂过氧化或膜脂脱脂作用，从而破坏膜结构[12,13]。因此，植物体内的活性氧清除剂的质量分数或活性水平的高低对植物的抗逆能力具有十分重要的意义。超氧化物歧化酶(SOD)是存在于植物细胞中最重要的清除自由基的酶类之一。SOD在C3和C4植物的叶绿体、线粒体和细胞质中都有分布，它的主要功能是清除超氧化物自由基·O2－。图1和图2表明，在Cd胁迫的早期(第3天)，加入La(N03)3能提高SOD的活性，从而提高清除·O2－的能力，缓解Cd胁迫对水稻幼苗的伤害；但是，随着Cd胁迫时间的延长，La(N03)3逐渐失去提高幼苗SOD活性的作用，直至处理的最后(第9天)，甚至与Cd发生了协同作用，使加La(N03)3的处理SOD活性更低。此外，有研究表明，生物体合成SOD常受·O2－浓度的影响，在·O2－的诱导下，SOD的生物合成能力升高[14]。说明植物在逆境条件下能启动自身的保护机制，来最大限度地减少伤害。这可能就是处理早期(第3天)SOD活性大大提高的原因，但是植物的这种自我保护是有一定限度的，随着胁迫的加重，保护机制可能会被破坏，因此，随着Cd胁迫时间的延长，SOD活性又发生了急剧下降。2.2镧对镉胁迫下水稻幼苗地上部及根系CAT活性的影响过氧化氢酶(CAT)也是一种重要的保护酶，它可以清除H2O2，主要存在于细胞的过氧化体中。图3反映了镉胁迫时镧对水稻幼苗地上部分CAT活性的影响。La处理组从一开始到试验结束均比CK组的CAT活性要高，而且差异显著(P＜0.05，说明镧有提高CAT活性的潜力。随着处理时间的延长，Cd1，Cd2，Cd1La，Cd2La处理组的CAT活性始终在下降，而且，镉胁迫越重，CAT活性下降的幅度也越大，这与庞欣等[15]的研究结果恰恰相反，可能是与Cd2+的浓度有关，这一点有待于进一步研究。图3还表明，从试验开始到结束，Cd1La始终比Cd1的CAT活性要高，且差异显著(P＜0.05)，Cd2La处理的CAT活性在第3天和第6天测定时均比Cd2处理要高，但差异不显著(P＞0.05)，在第9天测定时反而比Cd2处理要低，Cd2La只有Cd2的75.68%，达5%显著水平。说明镧有提高CAT活性的能力，但是这与镉胁迫的浓度和时间长短有关，随着镉胁迫强度的增加，镧不但会丧失保护作用，而且可能与镉发生协同作用，从而降低CAT的活性。图4是镉胁迫时，镧对水稻幼苗根系CAT活性的影响，其趋势与对地上部分的影响基本一致，只是有一点不同，从试验开始到结束，Cd1La始终比Cd1的CAT活性略高，差异不显著(P＞0.05)。2.3镧对镉胁迫下水稻幼苗地上部及根系MDA含量的影响丙二醛(MDA)是生物膜系统脂质过氧化的产物之一，其浓度的高低可以用