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生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定教师：杨丽（一）生物组织中还原糖鉴定试验•思考一：化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀。那么生物学中又是如何鉴定物质的呢？•可溶性还原糖+斐林试剂→砖红色沉淀（水浴加热）反应物反应物现象条件实验原理注意：反应物和条件缺一不可小试牛刀•判断：•1、还原性糖鉴定的实验原理是还原性糖加斐林试剂产生砖红色沉淀。2、蔗糖鉴定的实验原理是还原性糖加斐林试剂在水浴加热条件下产生砖红色沉淀。还原糖指什么？•还原性糖概念：还原糖是指具有还原性的糖类。•在糖类中，①分子中含有游离醛基或酮基的单糖。•②含有游离醛基的二糖都具有还原性。•如：葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。•还原性糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。非还原性糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。鉴定步骤•（1）选材，选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果，梨最好。为什么？•（2）制备组织样液。•①苹果：洗净、去皮、切块，取5g放如研钵中。•②研磨成浆：加石英砂，加5ml水研磨。•③过滤：将玻璃漏斗插入试管中，漏斗上垫一层纱（为什么不是滤纸？）组织样液2ml（3）加斐林试剂：2ml考点:由斐林试剂甲液（0.1g/ml的NaOH）和乙液（0.05g/mlCuSO4溶液）充分混合而成，不能分别加入。原则：使用的斐林试剂要现配现用，混合均匀后一次加入，(在实验中改用班氏试剂更为简便)。（4）水浴加热：煮沸2min？思考：观察现象，试管中发生了什么变化，为什么？••1.在鉴定可溶性糖的实验中，加入斐林试剂时应()•(A)先加入斐林试剂甲液．后加入乙液•(B)先加入斐林试剂乙液，后加入甲液•(C)将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加•(D)以上A、B、C三项操作方法都正确•典例分析解析：斐林试剂的甲液是氢氧化钠的质量浓度为0.1g／mL的溶液；乙液是硫酸铜的质量浓度为0.05g／mL的溶液．只有将甲液和乙液混合后，才能生成浅蓝色的Cu(OH)2沉淀．而可溶性搪(还原糖)就是与Cu(OH)2在加热条件下．才能生成砖红色的Cu2O沉淀，起到鉴定可溶性糖的作用。C•2.可溶性还原糖的鉴定中，制备生物组织样液时加入少许石英砂，其目的是()•(A)研磨成分（B)防止糖被破坏•(C)防止反应(D)无作用•3.组织样液制备时，过滤苹果组织研磨液时，漏斗上（）•（A)铺几层滤纸(B)填一团棉花•(C)垫上一层纱布(D)堵一小团脱脂棉•4.在鉴定可溶性还原糖的实验中，对试管中的溶液进行加热时，操作不正确的是（)•（A)将这支试管放进盛有开水的大烧杯中•(B)试管底部不要触及烧杯底部•（C)试管口不要朝向实验者•(D)试管底部紧贴烧杯底部ACB•5.现有下列生物材料：①苹果②黄豆种子③梨④花生种子⑤蛋清⑥马铃薯块茎。最适于用来鉴定还原性糖的有（）•A、①③⑥B、①②③C、①③D、③④•6.青苹果汁遇到碘酒溶液变成蓝色，熟苹果汁则能还原银氨溶液(即发生银镜反应)，这说明（）A、青苹果中只含淀粉，不含其他糖类B、熟苹果中只含糖类，不含淀粉C、苹果转熟时单糖聚合成淀粉D、苹果转熟时淀粉水解为单糖•7.斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液颜色的变化过程为（）A、无色→砖红色（沉淀）B、浅蓝色→砖红色（沉淀）C、浅蓝色→蓝色→砖红色（沉淀）D、浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）•8、某人做实验时，用了放置时间很久的蔗糖，结果对照试管加入斐林试剂后，也出现了砖红色沉淀，原因是（）•A.蔗糖是还原性糖•B.蔗糖被淀粉酶分解成还原性糖•C.蔗糖放置久了，被微生物分解成为还原性糖•D.斐林试剂失效考点总结•1.常见还原性糖•2.还原性糖鉴定原理•3.鉴定步骤及其为什么生物组织中脂肪鉴定试验脂肪小颗粒+苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒实验原理脂肪的鉴定步骤•取材：花生种子（浸泡3-4h）,将子叶削成薄片•取理想薄片••制片在薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液，去浮色。•制成临时装片•观察：先在低倍镜下，找到材料的脂肪滴，然后，转为高倍镜观察。•现象：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色实验成功的要点•①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。•②该试验成功的关键：单层细胞理想薄片。•③滴苏丹Ⅲ染液时，染色2-3min，时间不宜过长，以防细胞的其他部分被染色。•生物组织中蛋白质鉴定试验实验原理•蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应蛋白质的鉴定步骤•选材：卵清稀释液或黄豆（浸泡1-2d）豆浆滤液•组织样液2ml双缩脲试剂B液4–5滴结论：蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。双缩脲试剂A液2ml注意事项•1.双缩脲试剂的使用，一定要先加入A液(即0.1g/ml的NaOH溶液)，再加入双缩脲试剂B液(即0.01g/ml的CuSO4溶液)。•2.还可设计一只加底物的试管，不加双缩脲试剂，进行空白对照，说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应，而不是空气的氧化引起。练习巩固•1.在生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定实验中，对实验材料的选择叙述中，错误的是（）•A.甘蔗茎的薄壁组织、甜菜的块根等，都含有较多的糖且近于白色，因此可以用于进行可溶性还原糖的鉴定•B.花生种子含脂肪多且子叶肥厚，是用于脂肪鉴定的理想材料•C.大豆种子蛋白质含量高，是进行蛋白质鉴定的理想植物组织材料•D.鸡蛋清含蛋白质多，是进行蛋白质鉴定的良好动物材料A•2.做“脂肪的鉴定”实验时，某学生制备以花生为生物组织材料的临时装片。在显微镜下观察花生子叶的切片时，发现有一部分细胞看得清晰，另一部分细胞较模糊，还是由于（）•A.反光镜光源不适合•B.焦距没调整好•C.镜头脏•D.标本切得厚薄不均匀D3.关于双缩脲试剂A和B以及使用方法正确的是（）A.试剂A和B分别为浓度0.1g/mL的NaOH和0.01g/mL，二者混合后立即使用B.试剂A和B分别为浓度0.1g/mL的和，使用时先加A液，再加B液C.试剂A和B分别为浓度的和，使用时先加A液，再加B液D.试剂A和B分别为浓度的和，二者混合后立即使用C•4.下列关于还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的实验操作步骤的叙述中，正确的是（）•A.用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定•B.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴•C.在蛋白质的鉴定实验中，若用蛋清作实验材料，可以直接使用，不必稀释•D.供实验用的花生种子必须提前浸泡，浸泡时间应该长一点，便于切片B