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侧柏叶黄酮的提取及定性分析一、采样：侧柏叶，洗净自然阴干后于60℃恒温烘干4h,粉碎后过筛（40目）,备用。二、提取1、超声波法提取侧柏叶中黄酮类化合物称取5g左右的样品，按照1∶10的料液比加入50%乙醇水溶液浸泡2h，然后在70℃下超声波40Hz时超声处理40min。趁热过滤,过滤后将滤渣再按上述方法超声处理一次,过滤,合并滤液定容250ml,测定含量。2、索氏提取侧柏叶中黄酮类化合物以乙醇作提取剂，称取5.0g左右的样品，加乙醇约100mL，浸提时间4h。250ml容量瓶定容,测定含量。3、黄酮含量测定芦丁质量25mg在50ml容量定容。浓度为0.5mg/mlA标准曲线的绘制：精密吸取芦丁对照品液(0.5mg/ml)1、2、3、4、5ml分别用50%乙醇稀释至10ml，准确加入1%三氯化铝溶液1ml，于50ml容量瓶定容，摇匀,同法制成空白对照，在415nm处测定吸度.以吸收度值为纵坐标,以浓度值为横坐标绘制标曲线。数据如下：V芦丁1ml2ml3ml4ml5mlC（mg/ml）0.010.020.030.040.05A0.1930.3990.6010.8020.986A=19.88C–2.38×10-4,r=0.9999式中:A为吸光度,C为芦丁的浓度(mg/mL)。B含量测定：精密吸取上层清液5ml，准确加入1%三氯化铝溶液1ml，于50ml容量瓶定容，摇匀,同法制成空白对照，在415nm处测定吸度.A，计算含量。总黄酮含量%=C×稀释倍数×V/W×100%公式中:V—处理前溶液的体积(mL)C—芦丁溶液的浓度(mg/mL)W—侧柏叶质量(mg)三、定性分析1、紫外可见光谱：侧柏叶提取物在270nm、356nm处各有一吸收峰。初步推测侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮、黄酮醇类(220～280,300～400)。250～285nm和352～385nm间有两个主要的吸收峰,3-OH黄酮。加入AlCl3显色剂后，桂皮酰峰带发生红移至415nm，红移了59nm，说明A、B环上均有两个酚羟基。2、显色反应：盐酸-镁粉反应是鉴定黄酮类化合物最常用的颜色反应。吸取定容好的提取液1ml于试管中,加入少许镁粉振摇,滴加几滴浓盐酸,1～2min即可显色。多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至紫红色,少数显紫至蓝色。以AlCl3为显色试剂，紫外灯下观察荧光。以氢氧化钠为显色试剂作定性分析溶液呈棕黄色,因此可以确定侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮醇类。侧柏黄酮洗发香波的配制及性能测定①将去离子水称量后加入250ml烧杯中，将烧杯放入水浴锅中加热至60℃。②加入AES控温在60~65℃，并不断搅拌至全部溶解。③控温60~65℃，在连续搅拌下加入其他表面活性剂至全部溶解，再加入羊毛酯、珠光剂或其他助剂，缓慢搅拌使其溶解。（开始降温至50℃,加入侧柏叶提取液并充分搅拌）④降温至40℃以下加入香精、防腐剂、染料、螯合剂等，搅拌均匀。⑤测pH值，用柠檬酸调节pH值为5.5~7.0。⑥接近室温时加入食盐调节到所需粘度，并用粘度计测定香波的粘度。表1洗发香波的参考配方质量分数/％名称活性物配方1配方2配方3配方4脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AES)7081594脂肪酸二乙醇酰胺(6501、尼诺尔)70444十二烷基二甲基甜菜碱(BS-12)30612十二烷基苯磺酸钠(ABS-Na)3015硬脂酸乙二醇酯2.5聚氧乙烯山梨醇酐单酯(吐温)5090柠檬酸适量适量适量适量苯甲酸钠11NaCl1.51.5色素适量适量适量适量香精适量适量适量适量去离子水余量余量余量余量调理香波透明香波珠光调理香波透明香波注意事项1)用柠檬酸调节pH值时，柠檬酸需配成质量分数50％的溶液。2)用食盐增稠时，食盐需配成质量分数20％的溶液。加入食盐的质量分数不得超过3％。3)加硬脂酸乙二醇酯时，温度控制在60~65℃，且慢速搅拌，缓慢冷却。否则体系则无珠光。侧柏黄酮雪花膏的配制及性能测定配方作用质量分数/％硬脂酸乳化剂，使其变成洁白的膏体（15）单硬脂酸甘油酯使膏体细腻滑润（1.0）矿物油固化作用1.0十六醇保湿剂，保湿作用1.0甘油保护柔软皮肤、防止水分挥发、防止干燥10.0苛性钠调粘度0.05苛性钾调硬度0.6苯甲酸钠防腐剂适量香料芳香剂适量蒸馏水加至100ml按配方中的量分别称量硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、白油、十六醇、和丙二醇于250mL烧杯中，水和碱称量后加入另一250mL烧杯中。分别加热至90℃，使物料熔化、溶解均匀。装水的烧杯在90℃下保持20min灭菌。然后在搅拌下将水慢慢加入到油相中，当温度降至50℃时，加人防腐剂。温度降至40℃加入香精，搅拌均匀。静置、冷却至室温。调整膏体的pH，使其在要求的范围内。注意事项1)加入少量NaOH有助于增大膏体粘度，也可以不加。2)降温至55℃以下，继续搅拌使油相分散更细，加速皂与硬脂酸结合形成结晶，出现珠光现象。3)降温过程中，粘度逐渐增大，搅拌带人膏体的气泡不易逸出，因此，粘度较大时，不易过分搅拌。理化指标要求包括：膏体耐热、耐寒稳定性，微碱性pH≤8.5，微酸性pH为4.0~7.0；感官要求包括：色泽、香气和膏体结构(细腻，擦在皮肤上应润滑、无面条状、无刺激)。侧柏系柏科，侧柏属（Platycladusorientalis），常绿乔木，又称柏树、扁柏、香柏。原产华北、东北，目前全国各地均有栽培。朝鲜亦有分布。幼树树冠尖塔形，老树广圆形；树皮薄，浅褐色，呈薄片状剥离；大枝斜出；小枝直展，扁平，无白粉。珠果卵形，长1.5~2.5cm，熟前绿色，肉质，种鳞顶端反曲尖头，成熟后变木质，开裂，红褐色。侧柏叶性苦寒，能凉血止血。与艾叶、炮姜同用，能治疗虚寒性的胃及十二指肠溃疡出血。外伤出血则可用鲜侧柏叶捣烂外敷。侧柏叶与何首乌、女贞子、生地同用，可治疗中老年人肝肾亏虚，须发早白，单用内服能治疗咳喘痰多。用鲜品酒浸外涂，可以治疗脂溢性皮炎。侧柏叶中黄酮类物质含量很高（1.73%）。其中黄酮类成分又是治疗出血症、带状疤疹、风湿病、高血压、咳喘等的有效成分，对风湿性的关节炎、急性血管球性肾炎和红斑狼疮、动脉硬化也有显著的疗效。近年来，由于自由基生命科学的进展，使具有很强的抗氧化和消除自由基作用的类黄酮受到空前的重视。它们对人体健康的好处有：抗炎症、抗过敏、抑制细菌、抑制寄生虫、抑制病毒、防治肝病、防治血管疾病、防治血管栓塞、防治心与脑血管疾病、抗肿瘤、抗化学毒物等。类黄酮内用称之为“类维生素”或“抗自由基营养素”，外用称之为“皮肤维生素”。进一步的研究发现黄酮的抗氧化作用比VE强50倍，比VC强20倍，而且能通过血脑屏障到达脑部，防治中枢神经系统的疾病，尤其对皮肤的保养、年轻化及血管抗炎作用特别显著。此外，在食品工业上作为功能性食品添加剂，如：天然甜味剂、天然抗氧化剂、天然风味增强剂、天然色素等。因此，黄酮类化合物在食品、饮料、医药行业有着广泛的应用前景。目前，从银杏叶、紫苏叶、龙柏叶、槐花、香椿嫩叶中提取黄酮类化合物报道较多。侧柏为柏科植物，侧柏的干燥枝稍和叶是临床常用药，其中的黄酮类化合物具有凉血止血、生发止咳等功效，可以治疗各种出血症、风湿痹病、高血压及肺热咳嗽等疾病，还可外用治疗烧伤、烫伤。因而，侧柏叶中黄酮类化合物的提取对于食品科学和医学的发展有很重要的影响。传统的提取方法存在着工序繁多、耗能、费时、提取率低等缺点，寻求节能、环保、省时、高效率的提取方法是天然产物化学工作者所研究的对象。国内化妆品市场销售额到2010年将达800亿元。市场消费呈现新格局，功能性化妆品备受青睐。功能性化妆品是根据皮肤组织的生理需要和病理改变加入了有相关功效的物质，使产品兼具美容效果和保健效用。功能性化妆品近年来发展很快，正成为市场上的一个热点，也将为此行业带来良好的社会效益和经济效益。侧柏叶总黄酮作为美容护肤化妆品的添加剂，具有药性稳定，药力持久，对皮肤作用温和、刺激性小、安全性高、疗效显著等特点。制成水包油型的乳化产品，其安全性好，使肌肤自然、美白亮泽。顺应了国际化妆品天然化、营养化、疗效化的发展趋势。表1侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，加显色剂1ml，50ml容量瓶定容。测A波长吸光度波长吸光度波长吸光度2501.7423500.7434500.4602601.7073600.7454600.3122621.7363700.7274700.2112641.7733800.7094800.1372661.8133900.7484900.0922681.8464000.8035000.0692701.8604020.8145100.0542721.8614040.8215200.0452741.8474060.8255300.0402761.8134080.8295400.0402781.7774100.8325500.0342801.6944120.8335600.0292901.2434140.8303001.0074160.8253100.8614180.8173200.7694200.8073300.7814300.7183400.7654400.607表2侧柏叶黄酮提取液，稀释20倍，不加显色剂，50ml容量瓶定容。测A波长吸光度波长吸光度波长吸光度波长吸光度2601.7003240.9313400.9773561.0162701.6473260.9323420.9843581.0142801.3783280.9313440.9913601.0102901.1293300.9513460.9973700.9383000.9813320.9563481.0043800.7683100.9393340.9623501.0103900.5883200.9023360.9663521.0134000.4183220.9303380.9733541.01525030035040045050055002侧柏方块加显色剂侧柏圆点未加A波长/nm20025030035040045050055060002槐米方块正丁醇未加显色剂槐米圆点正丁醇加显色剂Anm第一次黄酮提取液吸收曲线10g侧柏，250ml，定容，稀释20倍。波长吸光度波长吸光度波长吸光度波长吸光度2601.6193240.973560.8795100.0992621.863260.9613580.8675300.0952641.8693280.9493600.8596000.0632661.8973300.943620.8586100.0642681.933320.9313640.8416500.0682701.9453340.933660.836600.0822721.9453360.9223680.8156700.092741.9223380.9173700.7986800.072761.913400.9143800.6496900.0612781.8493420.9113900.5357000.062801.8063440.8984000.4498000.0522901.4033460.8984100.3823001.1083480.914200.3143101.023500.8914300.2363200.9543520.9294400.2083220.9743540.8834500.16720030040050060070080002Anm