超细粉体技术对小儿腹泻外敷凝胶透皮吸收的影响

1超细粉体技术对小儿腹泻外敷凝胶透皮吸收的影响袁红宇1，欧宁1，王静2（1南京医科大学第一附属医院，江苏南京210029；2南京中医药大学，江苏南京，210046）[摘要]目的考察超细粉体技术对小儿腹泻外敷凝胶中丁香酚透皮吸收的影响。方法以丁香酚单位面积累积渗透量为指标，采用Franz扩散池分别对药材普通粉和超细粉制备的两种小儿腹泻外敷凝胶进行小鼠离体皮肤体外渗透实验。结果丁香酚在两种凝胶中均以零级释放过程透过皮肤，其透皮吸收速率分别为7.89±1.80、10.72±2.32μg/（cm2·h），二者具有显著性差异（p0.05）。结论超细粉体技术可以加快凝胶中有效成分的吸收，提高生物利用度。[关键词]小儿腹泻外敷凝胶；超细粉体；丁香酚；透皮吸收TheTransdermalAbsorptionEffectofUltraPowderTechnologyonXiao’erFuxieWaifuGelYUANHong-yu1,OUNing1,WANGJing2（1.TheFirstAffiliatedHospitalwithNanjingMedicalUniversity,Nanjing,210029China;2.NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanjing,210046China)Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofultrapowdertechnologyontransdermalabsorptionofeugenolinXiao’erFuxieWaifugel.MethodsThereleasetestoftwokindsofXiao’erFuxieWaifugelwasassayedwithFranzdiffusioncellbytheindexofcumulativereleasingofEugenolinunitareainvitro.ResultsThepercutaneousabsorptionprocessofeugenolintwokindsofgelswereconformedtozero-orderreleasingmodelandthetransdermalrateswere7.89±1.80and10.72±2.32µg/（cm2·h）respectively.Therewassignificantdifferencebetweentwokindsofgel（p0.05）.ConclusionThetechnologyofsuperfinecouldfavortransdermalabsorptionofeugenolandimprovebioavailability.KEYWORDS:Xiao’erFuxieWaifugel;ultrapowder;eugenol;transdermalabsorption小儿腹泻外敷凝胶是以丁桂散为基本方加味吴茱萸、胡椒等药材，采用超细粉体技术研制的一种新型中药敷脐制剂(专利号ZL03152990.9)，可以提高药物在脐部皮肤的黏附时间和亲和力，克服传统散剂在皮肤表面易脱落，滞留时间短，剂量低，难于形成局部有效浓度基金项目：南京医科大学科技发展基金项目（NY03034）作者简介：袁红宇（1973~），副主任药师，硕士，从事中药制剂开发研究。Email：[e-mail]2的缺点，有利于有效成分的释放、吸收。为了更好的了解超细粉体技术对小儿腹泻外敷凝胶透皮吸收的影响，我们对分别使用药材普通粉和超细粉制备的两种小儿腹泻外敷凝胶进行体外渗透实验，比较其透皮吸收规律。1实验材料1.1仪器FW100型高速万能粉碎机；ZHWY-100型气流粉碎机；改良Frans体外扩散池（自制）；791型磁力加热搅拌器；岛津LC-10AT高效液相色谱仪；SPD-IOA紫外检测器；N2000色谱工作站；KromasilC18色谱柱；Sartorius-BP211型电子天平；KQ-250B型超声波清洗器。1.2药品与试剂丁香、肉桂等药材（安徽省亳州市药材公司）；丁香酚对照品（批号725－200209）（中国药品生物制品检定所提供）；甲醇（色谱纯）。1.3实验动物昆明种小鼠，雄性，20±2g，南京中医药大学动物中心提供（SYXK苏2002-0053号）。2实验方法2.1凝胶样品的制备：2.1.1普通凝胶的制备：处方量药材用高速万能粉碎机粉碎成普通粉（过120目筛），与空白凝胶基质完全混匀。2.1.2超细凝胶的制备：按处方量取药材，用气流粉碎机粉碎至超细粉（d9030μm），与空白凝胶基质完全混匀。2.2体外透皮吸收实验2.2.1离体鼠皮的制备取雄性小鼠，脱颈处死，用眼科手术剪除小鼠背部毛，注意不损伤角质层。剪取适当大小脱毛皮肤，除尽皮下黏膜及脂肪组织，用蒸馏水、生理盐水反复洗至无白色浑浊，置生理盐水中保持新鲜，备用。2.2.2接受液的制备生理盐水500mL，加1.2g十二烷基硫酸钠，超声20min，使完全溶解，滤过备用。2.2.3渗透扩散装置[1]及透皮吸收实验实验装置采用改良的Franz扩散池，上池为筒状释放池，下室为圆锥状接受室，其供给池内径1.5cm，有效扩散面积1.77cm2，接受池容积为16.5mL。将新鲜离体鼠皮固定在供给池下端，角质层面向上，在角质层上分别均匀涂抹凝胶0.5g，使凝胶与皮肤接触而无气泡。然后将供给池固定在接受池上，接受池内充满接受液，整个系统置于37.0±1.0℃的恒温水浴中，磁力搅拌，转速100r/min。分别于1，2，4，6，8，12小时时精密吸取1.6mL接受液样品，随即补回相应量的空白接受液。吸取的样品液经0.45μm微孔滤膜滤过后直接进行HPLC分析，测定丁香酚含量，按文献[2]方法计算单位面积累积渗透量（Qn）。32.3丁香酚的含量测定2.3.1色谱条件[3]流动相：甲醇-水(65：35)；检测波长：280nm；流速：1.0mL／min；进样量：20µl。2.3.2线性关系的考察取丁香酚对照品约200mg，精密称定，甲醇定容至250mL，得浓度为862.20µg/mL的丁香酚储备液。分别精密吸取0.25，0.5，1.0，2.5，5.0，10.0mL丁香酚储备液置100mL量瓶中，甲醇定容至刻度，得浓度为2.16，4.31，8.62，21.56，43.11，86.22µg/mL的标准溶液。依次进样，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝10510.4X-1968.3，r＝0.9999。2.3.3系统干扰性实验分别吸取丁香酚对照溶液、透皮样品液进样，样品在丁香酚吸收峰对应处无其它干扰峰存在，见图1。AB图1丁香酚对照品(A)、透皮样品液(B)HPLC图Fig.1HPLCchromatogramsofeugenol(A)andtransdermalsample(B)2.3.4精密度试验精密吸取凝胶透皮样品液，重复进样6次，峰面积RSD=1.35%。2.3.5稳定性试验精密吸取凝胶透皮样品液，在0，0.5，l，2，3h分别进样，峰面积RSD=0.97％，可见供试品溶液在3h内测定结果稳定。2.3.6加样回收率试验精密吸取己知含量的6份透皮凝胶样品液，分别加入一定量的丁香酚标准溶液，测定其中丁香酚含量，并计算回收率。结果平均回收率为100.4%，RSD=1.8%。3透皮吸收实验结果两种凝胶不同时间丁香酚的单位面积累积渗透量结果见表1。可以看出在12h内，各时间点超细凝胶的丁香酚单位面积累积渗透量均大于普通凝胶，两者相比均具有显著性差异（p0.05），表明超细凝胶中丁香酚透皮吸收量较普通凝胶明显增多。将单位面积累积渗透量Q与时间t分别按Higuchi方程、零级释放模型和一级释放模型进行拟合，求出释放方程，以相关系数最大者为最优释放模型，结果见表2。比较三种释放模型的相关系数，可以看出两种凝胶均以零级释放模型拟合最优，表明丁香酚在12小时内均以零级释放方式进行透皮吸收。零级释放拟合曲线与时间轴的交点为凝胶样品的渗透时滞，两者分别为1.55±0.27、1.07±0.21h；其斜率即为两种凝胶的透皮吸收速率(渗透系数)，分别为7.89±1.80、410.72±2.32μg/（cm2·h）。以两种凝胶丁香酚的渗透时滞和透皮吸收速率分别作成组设计t检验统计分析，发现两者均具有显著性差异（p0.05）。可见与普通凝胶相比，超细凝胶渗透时滞时间显著减少，透皮吸收速率明显加快，表明超细粉体技术可以加快凝胶中丁香酚的释放和吸收，提高生物利用度。表1透皮吸收实验结果（n=8）Tab.1Theresultsoftransdermalabsorption(ｎ=8)t（h）普通凝胶Q/μg·cm-2·h-1超细凝胶Q/μg·cm-2·h-1103.86±1.77**22.78±1.978.67±2.19**38.12±3.1917.90±4.88**418.79±5.4028.11±4.48**635.15±12.3151.68±9.28**848.89±19.7480.02±21.69**1284.35±29.16115.64±27.62**与普通凝胶相比,*p0.05，**p0.01表2丁香酚累积渗透量Q与时间t拟合结果Tab.2Thesimulatingresultsbetweencumulativereleasingofeugenol(Q)andtime(t)Methods普通凝胶超细凝胶Higuchi释放模型Qt=at1/2+bQt=31.499t1/2-39.841r=0.983Qt=47.594t1/2-57.530r=0.977零级释放模型Qt=at+bQt=7.885t-12.252r=0.997Qt=10.716t-11.412r=0.996一级释放模型lg(Q∞-Qt)=at+blg(Q∞-Qt)=-0.009t+2.656r=0.995lg(Q∞-Qt)=-0.012t+2.657r=0.9954.讨论超细粉体技术是近年来发展起来的一项新技术，在中药粉碎中正逐步得到应用。它是借助于特殊的机械力、射流能力，将中药材的细胞壁破碎，使其细胞内容物可以直接进入溶媒被人体吸收。而在一般粉碎颗粒或饮片中，多数细胞是完整的，其粒子由数个或数十个甚至更多的细胞组成，细胞中的有效成分需穿过数个甚至数十个细胞壁才能进入溶媒中，而后才能被吸收，而且还有相当一部分成分不能溶出被浪费。药效学研究[4]表明，采用超细粉体技术得到的超细乌元散与用传统粉碎工艺得到的散剂相比，可明显提高药物对小鼠胃溃疡抑制作用。临床研究[5]结果表明超细羚羊角粉与粗粉相比，退热作用缓和而持久，效果优于后者，5而剂量仅为后者的一半。本文比较了两种凝胶的透皮吸收过程，发现与普通凝胶相比，超细凝胶渗透时滞时间缩短，透皮吸收速率明显加快，表明药材超细化后制成凝胶剂，可以促进有效成分的释放，加快药物的透皮吸收，提高生物利用度。在体外透皮实验中，透皮吸收接受液应具有接受通过皮肤的药物的能力，在体内药物渗透通过皮肤能很快被微循环移去，形成漏槽条件。本实验采用临界胶束浓度的十二烷基硫酸钠的生理盐水作为接受液，可以增加丁香酚在生理盐水中溶解度，维持漏槽条件；同时，该接受液通过0.45um的微孔滤膜后可直接高效液相进样进行丁香酚的含量测定，简单、快速而准确，减少了实验误差。参考文献：[1]陆彬等.药物新剂型与新技术[M].北京：人民卫生出版社，2002：375[2]周莉玲，刘强，李锐.青藤碱贴片经皮渗透的比较研究[J].中国现代应用药学杂志，2000，17(3)：200-202[3]袁红宇，欧宁，葛巧香.RP-HPLC测定小儿腹泻外敷凝胶中丁香酚的含量[J].中药新药与临床药理，2008，19（1）：50-52[4]李永，杨中林，肖小春.超微粉碎对乌元散加减方药效学的影响研究[J].海峡药学200618（1）：54-55[5]黎家楼，梁雪，何钜楠.羚