遗传性耳聋检测

遗传性耳聋基因检测的临床实践右江民族医学院附属医院：韦叶生医学博士，教授，博士研究生导师概述什么是遗传性耳聋？遗传性耳聋基因检测内容是什么？如何检测？遗传性耳聋指的是由于基因和染色体异常所致的耳聋。这种疾病是由父母的遗传物质（包括染色体及位于其中的基因）发生了改变传给后代而引起的耳聋，并且在于孙后代中以一定数量出现。遗传性耳聋分为综合征性遗传性聋及非综合征性遗传性聋两大类。前者指除了耳聋以外，同时存在眼、骨、肾、皮肤等部位的病变，这类耳聋占遗传性聋的30%；后者只出现耳聋的症状，在遗传性聋中占70%。遗传性耳聋我国听力残疾者2780万《第二次全国残疾人抽样调查统计公报》2006.120-7岁听障儿童80万每年新生聋儿3.5万（NTD:8-10万/唐氏2-3万/地贫7500/DMD3000）为什么要关注耳聋？4新生儿耳聋发病率为1-3/1000与唐氏综合症的发病率一样高80%的聋孩子父母听力正常听力正常人群中聋病基因携带者约占6%耳聋离我们有多远？5目前孩子耳聋能治疗吗？无药可治，听力损失不可逆人工耳蜗植入价格昂贵由聋至哑存在再生育风险6每出生一个先天性聋儿，国家及家庭要花费70万人民币（不包含人工耳蜗和语言康复训练）无法在产前预测遗传性耳聋风险--家庭不幸新生儿普通听力筛查存在漏检迟发性耳聋、药物性耳聋--引发纠纷7目前耳聋能预防吗？我们的疑问？为什么听力正常的夫妇会生育出一个聋孩子？为什么有的孩子，出生时听力正常，幼年或成年的时候，听力就迅速下降？为什么有的人打针吃药都没事，有的人，打了一针聋了？8耳聋的原因是什么？99耳聋非综合征型（70%）遗传因素(约60%)常染色体隐性（77%）环境因素（约20%）综合征型（30%）Alport综合征Pendred综合征Waardenburg综合征BOR综合征Usher综合征……等四百余种细菌感染病毒感染耳毒性药物外伤磕碰声损伤……常染色体显性（22%）X—连锁（~1%）线粒体(1%)不明原因（约20%）很可能是遗传因素流调单位：中国人民解放军聋病分子诊断中心流调范围：全国28个省市样品规模：3552例10全国耳聋流行病学调查中国人群遗传性耳聋的特点11基因耳聋表现正常人所占比例聋人中所占比例先天性聋哑基因（GJB2）先天性耳聋2-3%21%大前庭水管综合征相关基因（PDS）先天性耳聋迟发性耳聋1-2%14.5%药物敏感性耳聋基因（12SrRNA）药物性耳聋0.3%4.4%耳聋基因突变携带者7800万人四种主要致聋基因12导致生下来就聋GJB2：先天性聋哑基因对震荡高度敏感PDS：大前庭水管综合征“一针致聋”母系遗传12SrRNA：药物敏感性耳聋基因后天高频听力损失GJB3：我国克隆的第一个遗传病基因遗传性耳聋基因21位点检测项目13项目属性项目名称：遗传性耳聋基因突变检测（21位点）方法学：SNaPshot(单碱基延伸法)检测基因：GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体DNA12SrRNA。共检测21个位点。覆盖率：21位点覆盖80%非综合征耳聋位点标本类型：干滤纸血片（新生儿）全血1-3mlEDTA-K/Na或枸橼酸钠抗凝（成人）报告时间：7工作日内其他：患者需签署基因检测知情同意书SNaPshot法该技术由美国应用生物公司（ABI）开发，是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。热点基因21位点的携带率与检出率16基因突变位点GJB2中突变频率检出率GJB2(人群携带率2.6%，遗传性耳聋患者突变率为14%~41%）c.35delGorc.35dupG1%97.40%c.176_191del164%c.235delC75%c.299_300delAT10.70%c.508_511dupAACG16.70%c.167delTrare热点基因21位点的携带率与检出率17基因突变位点SLC26A4中的突变频率检出率SLC26A4(人群携带率约为1.9%，遗传性耳聋患者突变率8.95~14.54%，）c.919-2AG(常用名IVS7-2AG)50.10%80.66%c.2168AG13.17%c.281CT0.86%c.589GA1.29%c.1174AT2.59%c.1707+5GA(常用名IVS15+5GA)1.51%c.1226GA3.88%c.1229CT2.80%c.1975GC3.02%c.2027TA1.51%c.2162CTrare基因突变位点突变频率检出率12SrRNA（遗传性耳聋突变率1.67~15.5%）m.1555AG1.67~15.5%100%m.1494CT基因突变位点GJB3中的突变频率检出率GJB3（人群携带率较小）c.538CT0.86%未见报道c.547GA热点基因21位点的携带率与检出率标本要求19新生儿滤纸血片儿童、成人抗凝血（EDTA/枸橼酸钠抗凝）耳聋基因筛查的对象？20丈夫婚龄女性孕妇耳聋产前筛查对象21孕妇耳聋基因产前筛查时间孕早期、孕中期最佳检测时机：越早越好，孕妇建档时（12周）或做唐筛时（16周）是合适的时机•检测要求：采集2-3ml静脉血采血者不需要空腹采血22耳聋基因产前筛查流程女方或孕妇遗传性耳聋发生率低产前咨询，用药及生活指导丈夫耳聋基因检测（测序）胎儿产前诊断（如羊水，测序）产前咨询，用药及生活指导阴性阳性线粒体和GJB3基因GJB2和PDS基因阴性阳性23海淀妇幼医院3000例孕妇耳聋易感基因突变携带者160例（5.3%）GJB2携带者105例（3.5%）夫妇同为GJB2携带者3对PDS携带者49例（1.6%）夫妇同为PDS携带者3对线粒体基因突变携带者6例（0.2%）通过2840例244对夫妇行产前诊断，1例胎儿确诊为遗传性耳聋，家庭选择终止妊娠。检测孕妇配偶检测孕妇配偶2009.12-2010.4上海新华医院3056例孕妇耳聋易感基因突变携带者163例（5.3%）GJB2携带者104例（3.4%）夫妇同为GJB2携带者3对PDS携带者42例（1.4%）夫妇同为PDS携带者6对线粒体基因突变携带者8例（0.3%）通过2893例255对夫妇行产前诊断，1例胎儿为GJB2基因235delG及V37I复合杂合。检测孕妇配偶检测孕妇配偶2010.7-2011.626301医院具体病例在301医院，一对第一胎生育聋儿的听力健康夫妇，怀孕第二胎时进行了孕期耳聋基因诊断，最后确定胎儿是杂合突变，出生后孩子听力正常。（该夫妇为加拿大籍华人）GJB2235杂合235野生探针235突变探针2627熊X的父母是GJB2基因突变携带者，由于未进行产前诊断，先后育有两个聋儿，此次怀孕，经301医院进行孕期耳聋基因诊断，胎儿确定为杂合突变，出生后听力应正常。熊X9岁，GJB2基因235delC纯合突变导致的遗传性耳聋。熊X的妈妈，GJB2基因突变携带者并怀孕5个月。陕西汉中熊XX一家耳聋基因在产前诊断中的应用耳聋基因普筛的意义正常人群常见耳聋基因携带率约6%(GJB2：3%,SLC26A4：2-3%,mtDNA：0.3%)依赖聋人的筛查和干预尚不足以从根本上阻断遗传性耳聋在整个人群中的传递和发病。及早地发现药物性耳聋敏感个体，通过指导用药避免耳聋。实现常见遗传性耳聋的预防对耳聋基因携带孕妇的家人具有警示作用28新生儿听力筛查新策略耳聋基因检测+常规听筛29新生儿耳聋出生缺陷现状我国每年有3万以上患严重耳聋残疾的宝宝出生，新生儿耳聋发病率为1-3/1000现有常规新生儿物理听力筛查方法无法检出迟发性耳聋、药物性耳聋加上每年新增的迟发性耳聋和药物性耳聋患者，每年实际新增聋人6万人30常规听筛타겟에게가장노출빈도가높은시간은언제인가?타겟이우리의이야기에가장귀기울여줄기회는언제인가?新生儿听力联合筛查耳聋基因芯片检测早发现、早预防后天迟发聋、药物聋耳聋基因筛查是对常规听筛最有效的互补筛查手段联合筛查提高听力异常新生儿的筛出率新生儿听力筛查新策略31新生儿听力筛查常规听筛+耳聋基因筛查听筛通过基因未通过听筛通过基因携带听筛通过基因通过听筛未通过基因未通过听筛未通过基因携带听筛未通过基因通过新生儿听力联合筛查高度预警，提示迟发聋和药物聋风险遗传咨询听力随访听力随访确诊为听力障碍患儿听力检查基因检测遗传咨询听力检查3233高危新生儿的干预措施高危新生儿先天性聋儿及早安装助听器或人工耳蜗植入，避免孩子由聋致哑迟发性聋儿（EVA）通过生活指导，避免或延缓耳聋发生药物性耳聋高危个体终身禁用耳毒性药物，并预防家族成员发生药物性耳聋采集新生儿足跟血3滴筛查对象新生儿耳聋基因筛查所有新生儿样本要求3435新生儿筛查及早确诊先天聋在沈阳202医院，一对夫妇带新生儿就诊，父母听力正常，孩子出生后3天听力初筛未通过，在一个月时带孩子到202医院新生儿科就诊。经耳聋基因芯片检测，发现GJB2纯合突变，及早确诊先天性耳聋，及早干预（正常情况下3-6个月干预）。GJB2235纯合235野生探针235突变探针35新生儿筛查及早发现迟发聋王×父亲29岁听力正常IVS7-2AG杂合突变宋×母亲29岁听力正常IVS7-2AG杂合突变王×女儿5岁双侧感音神经性聋IVS7-2AG纯合突变因说话不清，5岁才被发现IVS7-2AG杂合IVS7-2AG杂合IVS7-2AG纯合3637耳聋基因在药物性耳聋预防中的应用在中国聋儿康复中心，照片中的小女孩被检测出药物性耳聋，在专家的建议下，小女孩的母亲、阿姨、舅舅都进行了耳聋基因检测，都被诊断为药物性耳聋易感基因携带者，他们将终身禁用所有氨基糖甙类药物。1555突变探针线粒体A1555G均质突变37常规新生儿听力筛查无法查出药物性耳聋邰丽华：湖北宜昌人，2岁时因高烧注射链霉素而失去了听力，现任中国残疾人艺术团团长、艺术总监、中国特殊艺术协会副主席。38现有常规新生儿听力筛查尚无法检出此类耳聋高危个体，而通过新生儿基因筛查及早发现致病风险一针致聋完全可以预防。39所有被诊断为药物性耳聋基因突变的携带者，都将终身禁用上面所列所有的氨基糖甙类药物，避免“一针致聋”的发生。药物性耳聋可以主动预防39预防耳聋出生缺陷全社会共同努力40三级预防阻断遗传聋一级预防婚育指导防遗传聋二级预防产前筛查防先天聋三级预防新生儿筛查防后天、药物聋41谢谢！