辅助生育技术的研究进展

孕为主,开展了常规体外受精2胚胎移植(IVF2ET);90年代,径。随着ICSI技术的广泛应用,扩展至睾丸及附睾活检相对变硬,弹性较差;②透明带异常:包括透明带形态、色、厚度异常或某种功能上缺陷;③IVF治疗失败史;④质量差取精获ICSI成功。选择人球型精子做ICSI,也用于不育症的临床。的胚胎:胚胎出现较多碎片或胚胎生长速度缓慢;⑤冷冻胚二、胎植入前遗传学诊断(PGD)PGD是在胚胎植入母体前完成的遗传学诊断,适用于有高风险生育遗传病患儿的夫妇,是优生领域中的重要进展。目前已有17个国家40多个中心建立此项技术,已有近1000例健康婴儿出生。PGD取材方法有3种:①卵细胞在未受精前的第一极体,以及受精后的第二极体,由于其只能间接地反应母体单方面的遗传缺陷,可靠性相对较差;②卵裂期细胞活检[5]:学酸化法可引起局部pH改变,Cieslak等[11]报道Tyrode溶裂球进行活检比较适宜;③早期胚胎滋养外胚层细胞活检:优点是取材的细胞量较多,可靠性增加,缺点是必须增加2～3d体外培养,以使胚胎发育至囊胚期,且胚胎发育至囊胚五、成熟卵母细胞的体外成熟(IVM)技术PGD常用检测方法有:聚合酶联反应(PCR)和荧光原位杂交(FISH)技术[6]。PGD目前主要用于3个方面,即性别诊断、基因遗传病及染色体病[7]。性别诊断对X伴性隐研究表明,卵子成熟机制与卵泡液中甾体激素的作用有关,性遗传病基因携带者有临床意义。如果母方携带致病基因,男性后代患病的概率为50%,故提倡淘汰男性胚胎。单基因遗传病的诊断主要用PCR方法。已有多种疾病被诊断,如囊性纤维化病、Duchenne型肌营养不良、甲型血友病、12中得到未成熟卵,经体外成熟、精、植、娠成功,还可从Lesch2抗胰蛋白酶缺乏症、性X综合征、网膜色素变性、PCO患者卵巢中获取未成熟卵体外培养而受孕,文献报道Ny2han和Tay2Sach病。染色体病的诊断多采用FISH方的继续发育与种植之间的时间,从而降低不良因素对胚胎2辅卵酶卵核囊・410・辅助生育技术的研究进展王树玉任国庆北京医学2002年第24卷第6期1978年在英国第1例试管婴儿的问世,为辅助生育技术树立了新的里程碑。20世纪80年代主要以解决女性不母体的影响;移植囊胚比早期胚胎更接近生殖生理的自然环境;减少移植胚胎的数量,降低多胎率;为人胚胎干细胞技术研究提供细胞来源。囊胚培养和移植成功,不但提高了种植治疗男性不育使用胞浆内单精子注射技术;分子生物学技术率和妊娠率,也为其他新技术的发展奠定了基础。的发展结合显微操作基础,发展为胚胎植入前诊断技术。近四、助孵化技术(AH)在IVF中的应用年来核移植技术的不断发展,将成为此领域新的突破。应用辅助孵化使透明带失去完整性,有助于使自然孵化一、母细胞内单精子注射(ICSI)困难的胚胎在囊胚完全扩张期顺利孵出,完成植入子宫内膜ICSI技术为选择优质精子注入减数分裂中期(M2)成熟的过程。该技术是IVF领域中的又一新技术[9,10]。AH指卵母细胞中,为男性不育及受精障碍患者的治疗开辟了新途征:①高龄妇女:年龄增高时往往卵子质量较差,胚胎透明带[1][2][3]胚胎透明带变硬、失去弹性,导致孵出困难;⑥基础FSH水平升高者,提示卵巢功能较差,卵子的透明带可出现异常,往往需做AH。AH方法:一般AH在第3天胚胎期进行,因此时胚胎处于细胞分裂期,分裂球与透明带之间有明显的间隙,且未融合,此时不容易损伤胚胎。主要方法有机械法、化学酸化法、消化法及激光法。机械法对技术要求较高,须短[4]时间内操作,并且易损伤胚胎组织;采用蛋白酶(pronaseE)可以消化透明带使其变薄,对第2～5日的胚胎辅助孵化;化为大多数学者所接受,对受精后第3日6～8细胞阶段的卵液对分裂中期胚胎细胞的纺锤丝有毒害作用而使其应用受到限制;激光法操作时间短,定位准确,消除部分透明带使其变薄,对胚胎无损伤,但仪器昂贵,推广有一定困难。的几率是有限的。有关IVM研究是生殖医学领域的又一热点。在IVF中,卵子的成熟度直接关系到受精卵质量、裂率及妊娠率。单通常E21100pmol/ml和E2/P0.001是卵子成熟和质量优良的标志。因此,选择含有卵泡液、hMG及生长因子的培养液是其成熟的必要条件。IVM将可以从刺激周期的卵巢α脆视未成熟卵可冻存并融解后继续成熟至M2期,成熟率为58.3%,并移植成功。IVM技术将使IVF技术更经济、安法,最近用PCR扩增单细胞DNA的RhD基因片段,为临床全,并为切除卵巢患者及PCO患者解决生育问题。开辟了新的途径。六、移植技术的应用三、胚期胚胎培养及移植核移植技术的深入研究及发展,为辅助生育技术提供了近年来,根据胚胎不同发育阶段需求而设计的序贯培养广阔的前景,为男性不育及高龄不孕妇女的治疗提供了新的方法的使用,使囊胚培养成为研究热点[8]。囊胚期胚胎培养思路,也为治疗性克隆提出了应用前景。正常受精是由变态优点为:选择良好的胚胎移植,淘汰有遗传缺陷发育阻滞的胚胎;有利于ICSI、活检及辅助孵化的胚胎修复;缩短胚胎首都医科大学附属北京妇产医院(邮编100006)©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.为卵子重建提供了新的解决方法,如为生殖细胞期核移植,2.SiberSJ,DevroeyP,TourageH,etal.Fertilizecapacityofepididy2malandtesticularspermusingintracytoplasmicsperminjection.Re23.EdwardsRG,TarinJJ,DeanN,etal.Arespermatidinjectinintohu24.VerlinskyY,EvsikovS.Karotyingofhumanoocytesbychromoso2高度未分化细胞,它具有发育成各种细胞的潜能。1981年Evans首次在延缓着床的小鼠胚胎中发现了ES细胞,ES细andsexchromosomesinmorphologicallynormalmonospemicpreim26.SiacssenC,VanAseche,JocisH,etal.Clinicalexperienceofsexde2型,如Lesch2Nyhan综合征(HPRT基因缺陷)、家族性粉样terminationbyfluorescentinsituhybridizationfor多神经瘤(TTK基因缺陷)、胶原病、镰状红细胞贫血等,已使人致病基因在小鼠中表达。还有研究用加入21号染色体或片段,制造21三体模型,利用ES细胞观察其肌肉和神经8.LevitasE.Blastocyststageversus48～72hembryotransferinwom2经胶质细胞,设想可治疗多发性硬化症(MS);用于器官、组织移植:在动物实验中,通过遗传操作改变组织相容抗原复newassistedhatchingmethodusingapiezo2micromanipulatorformorphologicallylow2qualityembryosinpoor2prognosisinfertilepa2者提供可移植的器官;用于造血干细胞移植;用于肿瘤患者11.CieslakJ,IvakhnenkoV,WolfG.Three2dimensionalpartialzonadis2sectionforpreimplatationgeneticdiagnosisandassisterhatchingfa212.ZhangJ,WangCW,KreyL,etal.Invitromaturationofhumanpre2辅助生育技术应严格掌握适应证,ICSI技术决不可取代常规IVF。文献报道,无精症患者中4%存在染色体结构异常,不可忽视助孕可将有缺陷的基因传给后代的风险;吁不宜常规使用ICSI治疗。ICSI治疗前应建立相关的遗传学检查常规、PGD技术及随访制度。PGD技术对自身不孕和反复流产病人不失为一种值得尝试的方法。PGD有其独到优点:非侵入性;不需行流产术即可避免遗传病儿出生;在(收稿:2001209218)胚能遗选克改脊抗高北京医学2002年第24卷第6期的单倍体成熟精子完成的。有研究表明,变态前的球形精子细胞核移植到成熟卵胞质中,可跨越变态直接形成雄原核,并与雌原核结合,成功产生后代。纽约大学医学中心Zhang等12]博士报告将单倍体雄原核和(或)雌原核移植入体内成熟的受精卵中进行原核移植,有可能产生正常子代;高龄妇・411・效性亟待提高。随着辅助生育技术的发展,应对其不足之处给予充分的关注。参考文献1.GoveartsI,DevtekerF,KoeninI,etal.Comparisionofpregnancy女胚胎种植率下降是影响成功率的原因之一。核移植技术tion.HumReprod,1998,6:1514～1518.即将高龄妇女不成熟卵子中分出生殖泡,与去除生殖泡的高育龄妇女的卵浆融合,至新的卵子成熟后ICSI授精使胚胎prodFertilDevel,1995,7:281～285.发育,可适用于高龄使非整倍体率增高而致的不孕[13]。七、胎干细胞(ES)的应用前景manoocytesnowmandatory?HumanReprd,1994,9:2217～2219.胚胎干细胞是从早期胚胎中发现、在体外培养的一种malanalysisofsecondpolarbodies.MolHumReprod,1999,5:89～95.胞具有发育的全能性,含正常二倍染色体,可以在体外培养、5.HaperJC,CoonenE,HanndysideAH,etal.Masochismofautosomes扩增、传操作、择、隆和冻存,而不失其多能性。因此,它拥有优于其他细胞的特性而具有应用前景。用于遗传病plantationhumanembryos.PrenatDiagn,1995,15:41～49.的的治疗:目前利用ES细胞已制造出许多小鼠的疾病模neticdignosis.MolReprod,1999,5:382～389.7.WellsD,SberlockJK,HandysideAH,etal.Detailedchromosomalandmoleculargeneticofsinglecellbywholegenomesmplificationandcomparativegenomehybridization.NucleicAcidRes,1999,27:的形成。美国国家神经病研究所分子学实验室用小鼠ES1214～1218.细胞诱导神经上皮细胞,植入脑内得到大量少突状细胞、神enwhofailedtoconceiveonthreeormoreIVFtreatmentcycles:aprospective,randomizedstudy.HumReprod,2000,15:8～9.合物(MHC),使其不被受体免疫系统识别及排斥;此外,利9.NakayamaT,FujiwaraH,TastumiK,etal.Anewassistedtechique用ES细胞分化诱导为各类不同细胞注射到受损伤的组织usingapiezomicromanipulator.FertilSteril,1998,70:784～788.器官中以修复、善其功能。还可用于神经退行性变、糖尿10.NakayamaT,FujiwaraH,YamadaS,etal.Clinicalapplicationofa病、髓损伤等。其应用前景为可改变基因改造速度及改变物种改造速度,作为组织工程的种子细胞将为成千上万的患tients.FertilSteril,1999,71:1014