酒石酸法茶多酚含量测定报告

茶多酚的含量测定实验组员：赵龙飞赵奇慧刘芳陈小丽一、实验原理茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，在碱性条件下易氧化变质。酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比，络合物在540nm处有最佳吸收。因此可以用比色方法测定。二、仪器与试剂仪器：分光光度计、天平、1ml移液枪、100ml容量瓶*6、100ml量筒、100ml烧杯*310mlEP管试剂：(1)FeSO4•7H2O1.000g，含4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g(2)Na2HPO4•12H2O6.02g，NaH2PO4•2H2O0.50g(3)儿茶素标准品10mg三、操作步骤（1）酒石酸钾铁溶液：称取FeSO4•7H2O0.100g，含4个结晶水的酒石酸钾钠0.500g，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。（2）pH7.5的磷酸缓冲液：6.020gNa2HPO4•12H2O，0.500gNaH2PO4•2H2O，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。(3)儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至10ml，浓度为1000μg/ml。分别稀释到200、400、600、800μg/ml，得5个浓度标准品溶液。(4)标准曲线：分别吸取1ml标准液，磷酸缓冲液3ml，酒石酸钾铁1ml混匀，3000转离心10min。吸取上清液3ml加入玻璃比色皿，用分光光度计测定540nm处的OD值三次求平均值，并绘制浓度-OD标准曲线。以蒸馏水代替标准品溶液加入同样的试剂作空白对照。(5)取提取物10mg，用蒸馏水定容至10ml。取1ml，按上述同样方法测定540nm处的OD值3次求平均值。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白对照。四、计算茶多酚含量W=C/1000×100%C：所测吸光度带入标准曲线得到样品中茶多酚浓度μg/ml1000：样品浓度μg/ml五、实验结果样品吸光度浓度含量（%）123平均有机溶剂萃取法0.450.4490.450.449666667402.630383340.26%金属离子沉淀法0.4490.4490.4490.449402.0701540.21%打孔树脂30%醇洗脱0.5250.5260.5250.525333333466.216866746.62%打孔树脂50%醇洗脱0.3490.3490.3480.348666667317.755033331.78%打孔树脂80%醇洗脱0.1110.1110.1110.111118.0318511.80%六、实验分析由实验结果看出，30%的乙醇提取大孔树脂法提取的茶多酚的含量是最高的，而其余的溶剂提取法、金属离子沉淀法，都相对较低。本实验数据不能代表各个提取分离方法的绝对优略，要视各组在实验过程中的实际操作是否规准确。实验中存在以下问题：1、标准品溶液浓度过低，吸光值存在负数，仪器不够精密，无法准确测出对应的OD值。最后修改方案，浓度提高了20倍。2、样品测定时，同样浓度，吸光度却高于标准品，也就是含量超过100%。经过各个环节问题排除后，怀疑是标准品含量过低。最后重复实验时发现加入反应物会有很多不溶的褐色絮状物，经过离心后再测OD值，数据显示合理。