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1酶工程第一章测试试题卷一填空(每空1分,共20分)1.1878年,____首次将酵母中酒精发酵的物质称为酶.2.1913年,Michaelis和Menten根据中间产物学说,推导出酶催化反应的基本动力学方程----米氏方程,可用公式表示为_______.3.1982年ThomasCech等人发现四膜虫的rRNA可以在没有蛋白质存在的情况下自身催化切除内含子,完成加工过程.这一具有催化活性的RNA的发现改变了传统的酶的化学本质是____________的概念。4.对同一种酶可同时采用系统命名和_____命名两种方法.5.乳酸脱氢酶可标识为[EC1.1.1.2],其中EC代表_________.6.催化L-谷氨酸D—谷氨酸的酶属于________酶.7.核酸类酶的基本组成单位是_________.8.酶的有机辅助因子在催化过程中起_______________的作用.9.在酶的二级结构β—片状折叠中,________式结构更稳定.10.酶的绝对专一性又称为___________专一性.11.PH对酶的影响主要是影响到了氨基酸的________状态.12.在测酶活力时,为了使酶反应速度不受底物浓度底限制,反应系统应使用足够高的底物浓度,一般要求:__________.13.酶分离纯化整个工作包括三个基本环节:抽取纯化和________.14.工业应用的三大酶制剂是蛋白酶________和脂肪酶.15核酸类酶催化反应的类型,可以将R-酶分为三类:剪切酶,剪接酶和________酶.16、具有不同分子形式但却催化相同反应的酶称为__________.17、每毫克蛋白或RNA中所具有的酶活力数称为酶的_______.用u/mg表示.18、酶制剂可分为液体酶制剂,固体酶制剂,纯酶制剂和_______酶制剂.二.选择题(每题2分,共10分)1.谷氨酸脱氢酶可有以下四种底物,由Km推断它的最适底物是().A.谷氨酸Km=0.12B.α-酮戊二酸Km=2.0C.NAD氧化形Km=0.025D.NAD还原形Km=0.0182.DEABCFG图示抑制模式属于:()AＢ无分支途径中酶活性反馈抑制C顺序反馈抑制D协调反馈抑制3．有A.B两种蛋白酶样品,A样品32mg,酶活力单位数为180U.B样品52mg,酶活力单位数为190U,则两样品纯度为:AABB.ABC.A=BD.不能断定.24．某酶四种底物的Km如下,与酶亲和力最大的底物是:()A2.5×10-2B4.4×10-1C8.8×10-2D5.0×10-65．从世界范围看,酶制剂在哪一行业中的应用占比例最高?()A淀粉业B乳制品C洗涤剂业D制酒业三.名词解释(每题3分,共12分)1.调节酶2.别构效应3.固定化酶四.判断题(每题1分,共7分)2.1/Km越大,酶与底物亲和力越大.3.酶的最适温度是一个固定不变的常数,其数值不受底物的种类.作用时间而改变.4.盐析法分离蛋白质时,应将溶液PH调至蛋白质等电点附近.5.酶浓度越高,酶结晶越大.6.调节酶就是别构酶.7.大肠杆菌丙酮酸脱氢酶是多酶复合体.五.说明题(共6分)1.图示并说明竞争性抑制和非竞争性抑制的区别.(6分)六.简答题(共21分)1.简介酶分子中氨基酸残基种类及作用.(8分)2请比较说明吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析的原理.(8分)3、固定化酶的制备原则是什么?(5分)酶工程第一章测试参考答案一填空(每空1分,共18分)1.库尼2.v=vmax[S]/Km+[S]3.酶是具有生物催化功能的蛋白质.4.习惯5.国际酶学委员会6.异构酶7.核糖核苷酸8.传递电子原子和基团的作用.9.反平行10.立体异构11.解离12.[S]5Km13.制剂.14淀粉酶15多功能酶16同工酶17酶的比活力.18固定化酶制剂二.选择题(每题3分,共15分)1.D2.D3.A.4D5.C三.名词解释(每题5分,共15分)1.调节酶:在代谢途径和物质转化体系中起调节作用的关键酶.2.别构效应:一种化合物与酶的活性中心以外的部位结合,引起酶的构象发生变化的现象.3.固定化酶:在一定空间内呈闭锁状态存在的酶,能连续地进行反应,反应后酶可以回收重复使用.四.判断题(每题2分,共14分)1.正确2.错误3.正确4.错误5.错误6.正确7.正确五、图示说明题(共12分)2.图示并说明竞争性抑制和非竞争性抑制的区别.(6分)竞争性抑制剂结构往往与正常底物非常相似,从而与底物竞争酶分子上同一个结合部位(活性中心),阻止底物和酶的结合.因而酶不能与抑制剂和底物同时结合.ESI复合物缺乏反应活性基团不能继续分解成产物,形成死端复合物.(图4分,解释2分)3不论底物分子是否与酶结合,非竞争性抑制剂都能与酶分子结合产生死端复合物.非竞争性抑制剂与活性中心以外的基团结合,其结构肯与底物分子毫无相关之处,两者没有竞争作用,但ESI不能进一步分解成产物.(图4分,解释2分)七.简答题(共26分)1.请比较说明吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析分离酶的原理.(16分)层析类型原理吸附层析利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物各组分分离离子交换层析利用离子交换剂上的可解离基团对各种离子的亲和力不同而达到分离目的.凝胶层析是以各种多孔凝胶位固定相,利用溶液中各组分的相对分子质量不同而进行分离的技术.亲和层析利用生物分子与培基之间所具有的专一而又可逆的亲和力使酶等生物大分子分离纯化.2.固定化酶的制备原则是什么?(10分)(1)维持酶的催化活性和专一性.(2)应有利于生产自动化.连续化.(3)与载体牢固结合(4)载体不与底物.产物和反应物发生化学反应.(5)成本要低,利于工业使用.第二、三章酶的生物合成法生产测试题填空题1、SOD是_________酶，具有____________________的功效。2、依据在体外培养时对生长基质依赖性差异，动物细胞可分为两类：__________、______________。3、动物细胞培养的PH应控制在______________；温度控制在_______,允许波动_______。判断题谷草芽孢杆菌是应用最广泛的产酶微生物。√大多数产酶微生物采用淀粉或其水解产物为碳源,植物细胞一般以蔗糖为碳源。√植物细胞培养要求的氮源一般为有机氮源。×动物细胞培养主要用于各种功能蛋白质的生产。√动物细胞传代培养时可以用胃蛋白酶分散细胞。×简答题：1、固定化原生质体产酶有何特点？2、植物细胞培养产酶的工艺流程？3、酶的生物合成有哪几种模式？各有何特点？P36-384、影响酶生物合成的主要因素有哪些？结合酶的生物合成模式，分析说明怎样4提高产酶效率。P39答案：填空题1、抗辐射、抗氧化、抗衰老2、贴壁依赖型细胞，非贴壁依赖型细胞3、7.0－7.4微碱性，36.5℃，允许波动范围在＋－0.25℃简答题1、(1)、变胞内产物为胞外产物固定化黑曲霉原生质体生产葡萄糖氧化酶，使细胞内葡萄糖氧化酶的90％以上分泌到细胞外。(2)、提高产酶率固定化枯草芽孢杆菌原生质体生产碱性磷酸酶，使原来存在于细胞间质中的碱性磷酸酶全部分泌到发酵液中，产酶率提高36％。(3)、稳定性好(4)、易于分离纯化2、外植体诱导愈伤组织细胞培养分离纯化酶第四章酶的提取与分离纯化测试题填空题1、酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。通常酶的纯度应当在_______以上，方能进行结晶。2、酶结晶的主要方法有：________、________、________、________。3、酶的剂型有：_____、______、________和固定化酶制剂；通常用作分析试剂或用作医疗药物的酶制剂要求是___________。4、注射用的医用酶应设法除去____________。判断题1、一般采用稀盐溶液进行酶的提取，盐的浓度一般控制在0.02～0.5mol／L。√2、常用硫酸铵盐析沉淀酶蛋白。√3、盐析沉淀酶蛋白时，溶液的pH值应调节到远离酶的等电点。×4、等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐远离酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。×名词解释：1、选择性变性沉淀法2、酶的提取3、亲和层析简答题：1、酶的分离纯化工作的基本原则？2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理。3、稳定酶的方法有哪些？答案：填空题1、50％。2、盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法。3、固体酶制剂、液体酶制剂、纯酶制剂、固定化酶制剂；纯酶制剂。4、热源物质名词解释1、选择性变性沉淀法：选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性5沉淀，而不影响所需的酶，这种分离方法称为选择性变性沉淀法2、酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程，也称为酶的抽提。3、亲和层析是利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使酶等生物分子分离纯化的技术。简答题1、（1）、防止酶变性失效凡用于预防蛋白质变性失效的方法与措施都应考虑用于酶的分离纯化。A、除少数例外外，所有操作都必须在低温条件下进行，特别是在有机溶剂存在的情况下更应小心。B、大多数酶在PH4或PH10的情况下稳定，应控制整个系统不要过酸、过碱，同时要避免在调整PH时局部过酸或过碱。C、重金属能使酶失效，有机溶剂能使酶变性，微生物污染以及蛋白酶的存在都能使酶分解破坏，所有这些都应周全考虑。可以加入蛋白酶抑止剂，杀菌剂，稳定蛋白质构象和酶活性的还原剂。（2）、酶活性测定贯串纯化过程的始终也就是说，从原理开始，整个过程的每一步都要进行比活力与总活力的检测与比较，以便知道每一步骤中可采用什么方法与什么条件，分别使酶的纯度提高了多少，回收了多少酶，从而决定其取舍。（3）、选择有效的纯化方法凡用于蛋白质纯化的一切方法同样适用于酶。应根据目的酶的物理、化学性质选取。（4）、原料来源要方便，成本要低2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理方法举例原理酶降解溶菌酶处理细菌消化细胞壁化学破碎甲苯抽提酵母化学溶解细胞壁细胞溶解红细胞渗透破碎细胞膜手动匀浆器肝组织迫使细胞通过窄缝撕开细胞膜超声波细胞悬浮液破坏细胞膜3、稳定酶的某些方法（1）、添加底物、抑止剂和辅酶（2）、添加－SH保护剂如谷胱甘肽、二巯基乙醇（3）、低温（0－4℃）（4）、添加某些低分子无机离子Ca2＋保护淀粉酶，Mn2+能稳定溶菌酶，CL－能稳定透明质酸酶等（5）、固体酶制剂稳定性高可保存数月或几年以上；热敏性酶多用冷冻干燥法，例如注射用酶等。（6）、固定化酶也是提高酶的稳定性的好方法。第四章酶的提取与分离纯化测试题填空题1、酶在结晶之前，酶液必须经过纯化达到一定的纯度。通常酶的纯度应当在_______以上，方能进行结晶。2、酶结晶的主要方法有：________、________、________、________。3、酶的6剂型有：_____、______、________和固定化酶制剂；通常用作分析试剂或用作医疗药物的酶制剂要求是___________。4、注射用的医用酶应设法除去____________。判断题1、一般采用稀盐溶液进行酶的提取，盐的浓度一般控制在0.02～0.5mol／L。√2、常用硫酸铵盐析沉淀酶蛋白。√3、盐析沉淀酶蛋白时，溶液的pH值应调节到远离酶的等电点。×4、等电点结晶是通过缓慢改变浓酶液的pH值，使之逐渐远离酶的等电点，而使酶析出结晶的过程。×名词解释：1、选择性变性沉淀法2、酶的提取3、亲和层析简答题：1、酶的分离纯化工作的基本原则？2、举例说明细胞破碎的几种方法及原理。3、稳定酶的方法有哪些？答案：填空题1、50％。2、盐析结晶法、有机溶剂结晶法、透析平衡结晶法、等电点结晶法。3、固体酶制剂、液体酶制剂、纯酶制剂、固定化酶制剂；纯酶制剂。4、热源物质名词解释1、选择性变性沉淀法：选择一定的条件使酶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀，而不影响所需的酶，这种分离方法称为选择性变性沉淀法2、酶的提取是指在一定的条件下，用适当的溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程，也称为酶的抽提。3、亲和层析是利