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1．(2013·浙江五校联考)某实验小组为探究果胶酶的最适温度，设计了以下实验：①用搅拌器搅拌制取一定量果泥备用；②配制质量分数为2%的果胶酶溶液备用；③按以下操作步骤进行：试管号操作123456加入果泥(mL)8ABCDE水浴恒温(℃)102030405060加入果胶酶(mL)2FGHIJ反应时间min303030303030比较果汁澄清度过滤比较出汁量(1)该实验的自变量是______，因变量是__________________。(2)请填写表格中字母所代表的数值，并解释原因。__________________________________________，__________________________________________________。(3)为使效果更明显，本实验还要考虑其他因素对酶的影响。请列举三点：________________________________________、__________________________________、________________________________。(4)本实验检测因变量的方法有两种分别为________________________________、__________________________。解析：表格中只有温度不同，所以温度是自变量，因变量就是由于温度不同而形成的最终的结果即果汁澄清度或出果汁量的多少。由于温度是自变量，其他无关变量都要相同，这样可以确保单一变量，得到正确的实验结果。影响本实验中酶的其他因素还有很多，如：合适的pH、酶与底物的充分接触等。答案：(1)温度果汁澄清度或出果汁量(2)A、B、C、D、E均为8，F、G、H、I、J均为2这样可保证除自变量不同以外，其他无关变量都相同(3)本实验应将反应混合物调到果胶酶的最适pH为了使果胶酶与果泥能充分接触，应尽量将水果泥粉碎在反应中适当搅拌(4)测果汁澄清度比较出汁量2．(1)在工业生产中，为提高酶的使用效率和产品纯度，一般需要将酶进行固定化处理。利用石英砂固定α淀粉酶的方法属于______。A．吸附法B．偶联法C．交联法D．包埋法(2)一定浓度的淀粉溶液流经α淀粉酶固定化柱后，被水解成______，遇碘显______色。(3)α淀粉酶可以通过枯草杆菌发酵生产，以下是利用诱变育种方法培育获得产生较多淀粉酶的菌株的主要实验步骤。(原理：菌株生长过程可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈)第一步：将枯草杆菌菌株接种到______培养基上进行扩大培养。第二步：将枯草杆菌菌株分成两组，A组用______处理，B组不处理(作对照)。第三步：制备多个含淀粉的固体培养基。第四步：将A、B组分别稀释后，分别在含淀粉的固体培养基上利用______法分离，适宜条件下培养得到单菌落。第五步：观察A、B组各菌落周围的________________________________________________________________________。实验结果预期：根据诱发突变率低的特点，预期______________________。根据诱发突变不定向性的特点，预期______________________________。解析：吸附法可以将α淀粉酶固定在石英砂上。淀粉水解成糊精遇碘显红色。液体培养基可以用于扩大培养，固体培养基则可以用于划线分离，稀释后则用涂布分离法，由于诱发的突变是不定向的，所以A组的菌落周围形成的透明圈有大有小。答案：(1)A(2)糊精红(3)液体诱变剂涂布透明圈大小A组多数菌落周围的透明圈与B组差异不显著A组有少数菌落周围的透明圈比B组明显小，有少数比B组明显大(或A组透明圈大小不一，B组较一致)3．(2013·舟山模拟)工业生产果汁时，常常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提高出汁率。为研究温度对果胶酶活性的影响，某学生设计了如下实验：(1)将果胶酶与苹果泥分装于不同试管，在10℃水浴中恒温处理10分钟(如图A)。(2)将步骤(1)处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在10℃水浴中恒温处理10分钟(如图B)。(3)将步骤(2)处理后的混合物过滤，收集滤液，测量果汁量(如图C)。(4)在不同温度条件下重复以上实验步骤，并记录果汁量，结果如下表：温度/℃1020304050607080出汁量/mL813152515121110根据上述实验，请分析回答下列问题：(1)果胶酶能破除细胞壁，是因为果胶酶可以促进细胞壁中________的水解。(2)实验结果表明，当温度为______℃时果汁量最多，此时果胶酶的活性________。当温度再升高时，果汁量降低，说明__________________________________________。(3)实验步骤(1)的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)在生产果汁时，为使果胶酶反复使用应该采用什么技术？________________。答案：(1)果胶(2)40最高温度升高，酶的活性降低了(3)保证苹果泥与果胶酶混合前后的温度相同，避免因混合导致温度变化而影响果胶酶活性(4)固定化酶技术4．(2013·杭州调研)下列是有关固定化酶及细菌培养与分离的问题。请回答：(1)固定化酶是将水溶性的酶用物理或________的方法固定在某种介质上，使之成为________而又有酶活性的制剂。可用________法将淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。(2)为获取土壤中的芽孢杆菌，某同学进行了相关实验，操作流程如下。上图中步骤A为________，步骤B为________。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)下列消毒灭菌方法中，常用于接种环灭菌的是________。A．70%酒精浸泡B．紫外线照射C．灼烧D．高压蒸汽(4)请分析划线分离法能得到单菌落的原因：________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)固定化酶常用化学结合法和物理吸附法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。可用物理吸附法将淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。(2)配制的固体培养基经灭菌后就可以倒平板，制成固体平面培养基，划线分离后，把培养皿放在合适的温度条件下进行培养。培养基灭菌是否彻底只需让灭好菌的培养基培养细菌一段时间后，观察有无菌落出现即可。(3)接种环常用灼烧灭菌，微生物的培养器皿则用高压蒸汽灭菌。(4)划线分离法之所以能够获得单菌落的原因就是在不断的划线过程中，接种环上的菌液越来越少，到划线最后部分细菌间距离加大，经培养后能得到单菌落。答案：(1)化学不溶于水吸附(2)制平板培养将灭菌后的培养基培养一段时间后观察是否出现菌落(3)C(4)划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，到划线最后部分细菌间距离加大，经培养后能得到单菌落