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1、（2014福建卷.33.）[生物-现代生物科技专题]必答题（10分）Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：（1）步骤①中，在核移植前应去除卵母细胞的。（2）步骤②中，重组胚胎培养到期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。（3）步骤③中，需要构建含有基因Rag2的表达载体。可以根据Rag2基因的设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用HindIII和PstI限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有酶的酶切位点。（4）为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。2、（2014新课标II卷.40．）[生物——选修3：现代生物科技专题](15分)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：（1）理论上，基因组文库含有生物的基因；而cDNA文库中含有生物的基因。（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中出所需的耐旱基因。（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的是否得到提高。（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐旱基因整合到了（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。3、（2014海南卷.单科.31.）[生物—选修3：现代生物科技专题]（15分）下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。请据图回答：⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出响应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的序列，再通过化学方法合成所需基因。⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有、、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为。⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是。4、（2014山东卷.36.）（12分）【现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。5、（2014新课标I卷.40.）[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）某研究者用抗原（A）分别免疫3只同种小鼠（X、Y和Z），每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价（能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数），结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞（染色体数目40条），并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞（染色体数目60条）按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：（1）制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16000以上，则小鼠最少需要经过次免疫后才能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是小鼠，理由是。（2）细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有，体系中出现多种类型细胞的原因是。（3）杂交瘤细胞中有个细胞核，染色体数目最多是条。（4）未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是。6、（2014江苏卷.单科.19.）杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点,被称为“钻石级冶肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示,相关叙述正确的是A.为了获得更多的卵母细胞,需用雌激素对雌性杜泊羊进行处理B.从卵巢中采集的卵母细胞可直接与获能的精子进行体外受精C.为避免代孕绵羊对植入胚胎产生排斥反应,应注射免疫抑制剂D.为了进一步扩大繁殖规模,可通过胚胎分割技术获得同卵双胎7、科学家采用不同方法培育良种牛的过程．请据图回答有关问题：（1）与一般的繁育良种动物方式相比较，胚胎移植的优势是。为提高良种奶牛的繁殖能力，在获取卵母细胞之前需用促性腺激素对奶牛进行处理，目的是。（2）“转基因牛”D培育过程中，常用受精卵作为外源基因的受体细胞，主要原因是。（3）图中数字标号①代表的结构为，①将来发育为，c→d过程需对其均等分割的目的是。A、B牛基因型是否相同？。（4）在培育良种牛的过程中，都运用了动物细胞培养技术．在动物细胞培养过程中，为防止杂菌的污染而要加入一定量的。8、从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌性和溶血性均较强的多肽P1。目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是()A．合成编码目的肽的DNA片段B．构建含目的肽DNA片段的表达载体C．依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽D．筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽9、小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是()A．设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列B．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列C．PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶D．一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞10、斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具有纯合突变基因(dd)的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白(G)基因整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。用个体M和N进行如下杂交实验。(1)在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是________和________。将重ab公牛良种奶牛精子激素处理卵细胞受精卵外源基因转基因牛Dh母牛子宫A、B牛C牛cdefg①②③组质粒显微注射到斑马鱼________中，整合到染色体上的G基因______后，使胚胎发出绿色荧光。(2)根据上述杂交实验推测：①亲代M的基因型是________(选填选项前的符号)。a．DDggb．Ddgg②子代中只发出绿色荧光的胚胎基因型包括________(选填选项前的符号)。a.DDGGb.DDGgc.DdGGd.DdGg11、将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是()A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个adaD．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子12、下列叙述符合基因工程概念的是()A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因B．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上13、下列关于基因工程的叙述，错误的是()A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达14、根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是___________________________________________________________________________________________________________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是________，产物是________。若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。(5)基因工程中除质粒外，________________和________________也可作为运载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是________________________。15、生物分子间特异性结合的性质广泛用于生命科学研究。以下实例为体外处理“蛋白质—DNA复合体”获得DNA片段信息的过程图。据图回答：(1)过程①酶作用的部位是________键，此过程只发生在非结合区DNA。过程②酶作用的部位是________键。(2)①、②两过程利用了酶的________特性。(3)若将得到的DNA片段用于构建重组质粒，需要将过程③的测序结果与________酶的识别序列进行比对，以确定选用何种酶。(4)如果复合体中的蛋白质为RNA聚合酶，则其识别、结合的DNA序列区为基因的________。(5)以下研究利用了生物分子间特异性结合性质的有________(多选)。A．分离得到核糖体，用蛋白酶酶解后提取rRNAB．用无水乙醇处理菠菜叶片，提取叶绿体基粒膜上的光合色素C．通过分子杂交手段，用荧光物质标记的目的基因进行染色体基因定位D．将抑制成熟基因导入番茄，其mRNA与催化成熟酶基因的mRNA互补结合，终止后者翻译，延迟果实成熟1、【答案】（10分）（1）细胞核（2）囊胚（3）核苷酸序列HindⅢ和PstⅠ（4）蛋白质2、【答案】（1）全部部分（2）筛选（3）乙表达产物耐旱性（4）同源染色体的一条上4、【答案】（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）；DNA分子杂交（或核酸探针）（2）超数排卵；获能（处理）（3）显微注射法；性别鉴定；全能性（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）5、【答案】（1）四YY小鼠的B淋巴细胞产生抗体数量较多（2）杂交瘤细胞自身融合产物、B淋巴细胞自身融合产物细胞融合不具有特异性，在诱导剂的作用下，相同种类和不同种类的细胞均可以融合（3）1200（4）①B淋巴细胞高度分化，不能恶性增殖；②不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次危机6、【答案】D7、（1）可充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力超数排卵（2）受精卵的全能性易于表达（3）内细胞团胎儿的各种组织有利于胚胎的恢复和进一步发育相同（4）抗生素（1分）8、C9、BD10、答案：(1)限制性核酸内切酶DNA连接酶受精卵表达(2)①b②b、d(3)N非姐妹染色单体4×(红·绿荧光胚胎数/胚胎总数)11、C12、B13、D14、答案：(1)黏性末端平末端(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产