通心络逆转动脉粥样硬化兔内皮功能损害的研究

通心络逆转动脉粥样硬化兔内皮功能损害的研究复旦大学附属中山医院上海市心血管病研究所葛均波，周京敏教授为何研究内皮功能？内皮功能异常的临床意义•是动脉粥样硬化的始动环节•是临床动脉粥样硬化疾病的标志–Endothelialdysfunctionshowsastrongassociationwithcoronaryarterydiseaseandcanbeausefulnoninvasivetoolfortheevaluationofcoronaryarterydisease.IndianHeartJ.2003Jan-Feb;55(1):44-8.•内皮功能是临床动脉粥样硬化疾病预后的独立预测因素–IndependentpredictorsofcoronaryeventsbynoninvasiveFMDJAmCollCardiol.2003Sep17;42(6):1037-43.–IndependentpredictorofcerebrovasculareventsinthossewithoutCHD.Circulation.2003Jun10;107(22):2805-9.内皮功能异常的临床意义内皮功能改善的临床意义•Preservedendothelialfunctionattenuatestheriskoffutureeventsassociatedwithahighplaqueburden.–JAmCollCardiol.2003Sep17;42(6):1037-43.•对已形成动脉粥样硬化的血管，通心络是否具有改善内皮功能的作用？材料与方法•新西兰大白兔•正常饮食组：6只•高脂饮食组：30只，8周后（成动脉粥样硬化模型）随机分为：–继续高脂饮食组：10只–高脂饮食＋通心络干预组（1000mg/kg/d）：10只–高脂饮食＋氟伐他汀干预组(10mg/kg/d)：10只•血清总胆固醇浓度测定：1，8，12周•血管内皮功能的检测•NOS、GSH-PX、MDA的检测•氧化LDL受体（LOX–1）表达的检测检测指标血管内皮功能的检测1.气体栓塞法处死动物2.取胸主动脉作离体主动脉环（4～5mm）3.用不锈钢钩固定于含克氏液的浴槽，通过张力换能器连接二道生理记录仪4.静息张力为3g，平衡120min后，用苯肾上腺素(10-7mol/L)预收缩血管环5.观察Ach(10-9～10-5mol/L)引起的血管内皮依赖的舒张反应6.再以苯肾上腺素(10-7mol/L)收缩血管环7.观察对硝普钠(10-8～10-6mol/L)的舒张反应血管MDA，GSH－PX，NOS的检测主动脉丙二醛（MDA）含量：应用硫代巴比妥酸比色法主动脉谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－PX）活力：二硫代二硝基苯甲酸比色法主动脉总NOS活性：应用催化L-Arg法LOX–1受体表达的检测•LOX-1mRNA的表达：RT－PCR方法•LOX-1蛋白表达：WesternBlotting方法结果实验第1,8,12周血脂总胆固醇水平的变化血清总胆固醇（mg/dl）1周8周12周正常对照组(ｎ=6)46.3±14.349.7±14.647.5±7.3高脂饮食组(ｎ=10)49.7±7.9840.8±52.8**810.8±32.3**来适可干预组（n=10)43.6±6.0873.0±77.5**110.1±87.5##通心络干预组(ｎ=10)50.1±10.2804.6±83.5**739.1±83.5注：与正常对照组比较：**P0.01；与高脂饮食组比较：##P0.01内皮依赖性血管舒张反应00.20.40.60.8198765血管的舒张度通心络干预组高脂饮食组正常饮食组来适可干预组Ach浓度(mol/L)的负对数值(-lg[Ach])**注：通心络干预组与高脂饮食组比较：##P0.01;氟伐他汀组与高脂饮食组比较：**P0.01通心络干预组与氟伐他汀组比较：P0.05##非内皮依赖性血管舒张反应0.40.50.60.70.80.9187.576.56硝普钠浓度(mol/L)的负对数值（-lg[SNP])血管的舒张度通心络干预组高脂饮食组正常饮食组来适可干预组注：各组两两比较均无差异(P0.05)GSH-PX，MDA和NOS水平测定GSH-PX(U/mgprot)MDA(nmol/mgprot)NOS(U/mgprot)正常饮食组86.7±47.63.8±1.92.6±0.9高脂饮食组47.5±26.612.1±5.51.0±0.2氟伐他汀组100.4±64.3*3.5±1.7*3.0±1.9*通心络组97.8±34.3*3.5±1.6*2.9±1.3*注：与高脂饮食组比较：*P0.05LOX-1受体mRNA表达Figure1.RT-PCRdetectionofLOX-1mRNAexpressionintheaortasfromdifferentgrouprabbits.LOX-1GAPDH通心络正常饮食组高脂氟伐他汀Figure2.WesternblottingofLOX-1expressionintheaortasfromdifferentgrouprabbits.高脂LOX-1正常饮食组氟伐他汀通心络LOX-1受体蛋白表达讨论•通心络具有逆转动脉粥样硬化模型血管的内皮功能的作用•提供了通心络治疗冠心病的理论基础–通心络显著改善患者症状抗氧化•AcutevitaminCadministrationrestoredperipheralendothelialfunctioninpatientswithCADtonormalvalues.--AmHeartJ.2003Aug;146(2):280-5.•他汀类药物的抗氧化作用已得到公认–Statinspromotepotentsystemicantioxidanteffectsthroughspecificinflammatorypathways.--Circulation.2003Jul29;108(4):426-31内皮功能逆转的可能机制通心络有抗氧化的作用•对NOS的作用：增加NOS的活性，促进NO的释放，改善血管内皮依赖的舒张功能。–阜外医院杨跃进等：通心络增加急性心肌梗死模型心肌组织的NOS活性•减少氧自由基的生成:增加GSH-PX活力，减少MDA生成•对血脂水平可能有一定作用内皮功能逆转的可能机制•CirculatingautoantibodiestooxidizedLDLcorrelatewithimpairedcoronaryendothelialfunction–ArteriosclerThrombVascBiol.2002;22:2044-8.•他汀类药物改善内皮功能的作用与此有关•通心络对LDL的作用？内皮功能逆转的可能机制•通心络有下调LOX-1受体的作用:–提示其作用机制可能与影响LDL对内皮的损害有关•与他汀类药物的作用相似内皮功能逆转的可能机制结论通心络–逆转动脉粥样硬化血管的内皮功能损害–有抗氧化作用，通过抗氧化机制？–有下调LOX-1受体的作用