幻灯片1维维生生素素类类药药物物的的分分析析概述基本要求维生素A维生素D维生素E维生素B1维生素C练习与思考幻灯片2一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。五、掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。七、熟悉本类药物杂质检查方法。八、了解维生素A三点校正法的推导过程。幻灯片3维生素:是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。人体不能合成维生素。幻灯片4返回主目录基本要求返回概述按溶解度分分类脂溶性VitA、D2、D3、E、K1等VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。水溶性幻灯片5返回第一节维生素ACH3CH3CH2ORCH3CH3CH3-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:幻灯片6为一个具有共轭多烯侧链的环己烯(一)具有UV吸收结构与性质一、存在多种立体异构化合物幻灯片7易发生脱氢、脱水、聚合反应VitA2VitA3幻灯片8CH2鲸醇幻灯片9CH2OHCH2OHCH3CH2OH△或有金属离子存在时氧化↑幻灯片10酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitA]O[O2环氧化物VitA醛共轭多烯侧链易被氧化(二)HOCVitA酸幻灯片11COOHOCH2OH鉴别试验二、条件无水无醇幻灯片12蓝色紫红幻灯片13三氯化锑反应(一)紫红蓝色3SbClVitACHCl3-RCOOSbCl5+CH2+CH2-RCOOSbCl5(BP(2000))λmax为326nm一个吸收峰λmax为350~390nm三个吸收峰幻灯片14UV法(二)VitAVitAHCl去水△无水乙醇VitA↓去水VitA(VitA3)幻灯片15幻灯片16TLC法(三)CH2CH3CH3CH2ORCH3CH3CH3BP杂质对照品法显色剂三氯化锑USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值幻灯片17(一)UV法维生素A2维生素A3环氧化物含量测定三、维生素A醛维生素A酸立体异构体氧化降解产物合成中间体幻灯片18三点校正法(法定方法)1.原理:(1)杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线,且随波长的增大吸收度减小;(2)物质对光的吸收具有加和性。幻灯片192.波长的选择:(1)1VitAmax(328nm)(2)231的两侧各选一点幻灯片20=12nm测定对象VitA醋酸酯幻灯片21第一法等波长差差法3283403163281=325nm,2=310nm,3=334nm测定对象VitA醇幻灯片22测定法(1)基本步骤:第一步A的选择选择依据:所选A值中杂质的干扰已基本消除幻灯片23第二步求)(%cm1样注意:C为混合样品的浓度幻灯片24第三步求效价换算因数由纯品计算而得:幻灯片25第二法等吸收比比法%)(cm1Eg/IU纯)效价(换算因数=醋酸酯维生素Ag344.0IU12907000g344.0g101g/IU6)效价(15302907000Eg/IU%)(cm1纯)效价(换算因数=幻灯片2619003330000g300.0g101g/IU6)效价(18203330000Eg/IU%)(cm1纯)效价(换算因数=幻灯片27第四步:求标示量%1830%标示量丸标示量%=100/IU幻灯片28(2)第一法维生素A醋酸酯方法:%标示量平均丸重换算因数100CA幻灯片29判断是否在326~329nm之间iAnm360340328316300ml/IU159S处测、、、、分别于溶液~环己烷在326~329nm之间max是否改用第二法max%标示量平均丸重=100g/IU醇维生素Ag300.0IU1换算因数)效价(样样%)(cm1)(Eg/IU)()(%cm1%cm1纯样幻灯片30规定值差值求算并与规定值比较328iA/A299.0AA811.0AA0000.1AA907.0AA555.0AA328360328340328328328316328300328iA/Al(%)CA%)(cm1样32176AAA幻灯片31判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过计算A328(校正)用A328计算幻灯片323403163283282523AAA.A校正幻灯片33%100AAAf328328)(328校正02.002.002.0第二法第二法328A校正328A幻灯片3403%--VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法(即代数法)推导而来;VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法(几何法或称6/7定位法)推导而来。在应用三点校正法时,除其中一点在最大吸收波长处测定外,其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。幻灯片35VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下(平均装量0.07985g/丸)的内容物0.1287g至10ml烧杯中,加环己烷溶解并定量转移至50ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀;精密量取2.0ml,置另一50ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀。以环己烷为空白,测定最大吸收波长为328nm,并在下列波长处测得吸收度为幻灯片36讨论A300:0.374A316:0.592A328:0.663A340:0.553A360:0.228求本品中维生素A占标示量的百分含量?幻灯片37A300/A328:0.564A316/A328:0.893A328/A328:1.000A340/A328:0.834A360/A328:0.344A300/A328:0.564A316/A328:0.893A328/A328:1.000A340/A328:0.834A360/A328:0.344+0.01-0.010+0.02+0.04-----=====A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(2×0.663–0.592–0.553)=0.637幻灯片380.5550.9071.0000.8110.299幻灯片39幻灯片40(等吸收比法)(3)第二法[皂化法、6/7A法]A328(校正)–A328(实测)A328(实测)×100=0.637–0.6630.663×100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正)100ms/D=0.637100×0.1287/1250=61.87供试品中维生素A效价=E1%1cm(328nm×1900=61.87×1900=117553(IU/g)标示量%=VA效价(IU/g)×每丸内容物平均装量(g/丸)标示量(IU/丸)×100%=117553×0.0798510000×100%=93.9%适用于维生素A醇第一法无法消除杂质干扰时用此法幻灯片41脂溶性水溶性幻灯片42max是否在323~327nm之间是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定i/KOHAnm334325310300ml/IU159VitAVitAS处测、、、于~稀释至溶解异丙醇除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐植物油醇醋酸酯皂化液挥干乙醚乙醚提取乙醇计算幻灯片43判断A300/A325是否大于0.73否是取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定计算A325(校正)幻灯片44334310325325260455528156A.A.A.A校正幻灯片45%100AAAf325325)(325校正325300AA校正325A325A03%-3%幻灯片46(二)校正325A(二)标准曲线法λmax618nm~620nm优点简便快速幻灯片47三氯化锑比色法蓝色3SbCVitASbOClSbClOH32缺点呈色不稳定(5~10s内)水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性返回一、结构与性质维生素D2幻灯片48HOHHCH2CH3HHHCH3CH3CH3CH3维生素D3幻灯片49开环的甾体:具有甾类化合物的显色反应,可用于鉴别。第二节维生素DHOHHCH2CH3HHCH3CH3CH3手性碳原子:具有旋光性,可用于鉴别。多烯:可进行紫外检测。幻灯片50二、鉴别试验1.显色反应三氯化锑反应橙红色渐变粉红三氯化铁反应橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应绿色幻灯片512.比旋度鉴别维生素D2维生素D3溶剂无水乙醇无水乙醇浓度40mg/ml5mg/ml比旋度值+102.5°~+107.5°+105°~+112°注意事项:应于容器开启30分钟内取样,在溶液配制后30分钟内测定。幻灯片523.区别反应:以96%乙醇为溶剂,加乙醇和85%硫酸,D2显红色,在570nm处有最大吸收,D3显黄色,在495nm处有最大吸收。醋酐--硫酸反应D2黄红紫绿D3黄红紫、蓝绿绿4.其他方法:TLC、HPLC、制备衍生物测熔点幻灯片53三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查:加洋地黄皂苷溶液,混合,放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D的光照产物幻灯片54四、含量测定方法中国药典(2000年版)采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量,定量方法为内标法,内标物为邻苯二甲酸二甲酯,该法分为三个方法。固定相:硅胶流动相:正己烷-正戊醇(997:3)幻灯片55第一法:用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况,步骤如下:1.系统适用性试验:测定重复性和分离度。幻灯片562.测定校正因子:AS/mSf1=--------Ar/mrf2=(ASmr-f1mSAr1)/(Ar1mS)3.含量测定:mi=(f1Ai1+f2Ai2)mS/AS幻灯片57第二法:用于有杂质的干扰的情况,步骤如下:1.皂化处理:皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。2.净化:供试液A经液相色谱分离,准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液,制备成供试液B。固定相:ODS流动相:甲醇-乙腈-水(50:50:2)3.含量测定:取供试液B按第一法测定。幻灯片58第三法:用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况。步骤如下:1.制备供试液:取供试液A,净化,水浴加热,得供试液C。制备对照液:对照品储备液:稀释、加热。2.含量测定:在第一法的色谱条件下,交替精密进样对照液和供试液,按外标法定量。VitD3对照品前VitD3反式VitDVitD3速甾醇DVitD3重复性前VitD3与反式VitD3VitD3与速甾醇D390℃1h254nm365nmHPLC冷却环己烷R大于1.0RSD小于2.0%峰:峰峰33幻灯片59返回苯并-二氢吡喃醇幻灯片60***OR1HOR2CH3第三节维生素E名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1OHO幻灯片61dl-α-生育酚醋酸酯幻灯片62CH3COOCH3CH3CH3CH3CH3CH3H3CH3CO苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基易水解结构与性质一、緘緘緘瑌醌型化合物幻灯片63硝酸反应(一)杂质,需检查△生育酚緘緘緘緘畗緘orOHHVitE]O[鉴别二、75℃15′緘緘緘畗緘HNO3Vit生育酚緘生育红幻灯片64]O[橙红色CH3HOOCH3C16H33CH3H3C生育酚HNO3OOCH3C16H33H3CCH3O强氧化剂(橙红色)生育红幻灯片65KOH幻灯片66三氯化铁-联吡啶反应(二)HOOCH3CH3CH3CH3C16H33OCH3CH3CH3CH3CH3-COOC16H33CH3HOOCH3C16H33CH3H3C
本文标题:药物分析维生素
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